胡 瑞 唐 方 天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院(天津 300052)

腸易激綜合征(irritable bowel syndrome,IBS)[1]是一種常見(jiàn)的病因未明的功能性疾病,可能的高危因素有精神因素、應(yīng)激事件、內(nèi)分泌功能紊亂、腸道感染性病后、食物過(guò)敏及不良生活習(xí)慣等,臨床以腹痛或腹部不適伴排便習(xí)慣改變?yōu)樘卣?。IBS反復(fù)發(fā)作和慢性化的根源在于,消化吸收障礙的同時(shí),伴有心理障礙或精神異常表現(xiàn)。

胃腸安丸由 11味中草藥組成,是治療胃腸道疾患的微丸制劑,用于消化不良、腸炎、腹瀉、菌痢、胃脘脹痛、便秘等癥。實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)其對(duì) IBS-D亦有治療作用。為探討其作用機(jī)理,本研究以高乳糖飼料喂飼與束縛應(yīng)激相結(jié)合的方法復(fù)制 IBS-D大鼠模型,通過(guò)測(cè)定血清 K+、Na+、Cl-、Ca2+含量、結(jié)腸組織血管活性肽(VIP)含量探討胃腸安丸對(duì) IBS-D的作用機(jī)理,為中藥臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和藥物 清潔級(jí) Wistar大鼠 48只(體重 150g±10g),雌性,購(gòu)自軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院 ,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物批號(hào) SCXK-(軍)2002-001。胃腸安丸提取物,由天津中新藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司樂(lè)仁堂制藥廠提供,批號(hào) 20070324。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑與主要儀器 貝克曼 D×C電解質(zhì)檢測(cè)試劑(包括電解質(zhì)緩沖液和電解質(zhì)參比液),由貝克曼庫(kù)爾特實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)(蘇州)有限公司生產(chǎn),批號(hào) 2906023;血管活性肽放免試劑盒,由第二軍醫(yī)大學(xué)神經(jīng)生物教研室提供,批號(hào) 080306。 CX20型貝克曼生化分析系統(tǒng),貝克曼庫(kù)爾特實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)(蘇州)有限公司生產(chǎn);放射免疫γ計(jì)數(shù)器 ,中國(guó)科大中佳公司生產(chǎn)。

1.3 模型制備 高乳糖飼料配方:高乳糖飼料是將基礎(chǔ)飼料配方中的淀粉全部改為乳糖,參照文獻(xiàn)[2]加工高乳糖飼料,飼料配方:酪蛋白 22.05%、乳糖 45.58%、蔗糖 15.00%、大豆油 3.75%、纖維素 8%、DL-蛋氨酸 0.4%、膽堿 0.2%、維生素混合物 0.02%、無(wú)機(jī)鹽混合物 5%。其中維生素與無(wú)機(jī)鹽各組成成分參見(jiàn) GB14924.3～2001。由北京科澳協(xié)力飼料有限公司加工。束縛應(yīng)激方法:參照文獻(xiàn)[3]方法略作改變,用 0.8cm×10cm的醫(yī)用橡皮膏,捆綁于實(shí)驗(yàn)鼠雙后肢膝踝關(guān)節(jié)之間,固定于高 20cm的鐵架上 ,傾斜 60°放置,使大鼠雙后肢完全制動(dòng),肢體其它部位可自由活動(dòng),1h后解除束縛。

1.4 分組及給藥 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為 3組,空白對(duì)照組(N組)、模型組(C組)、胃腸安組(W CA組),每組 8只。 C組和胃腸安組喂飼高乳糖飼料,每日束縛應(yīng)激 1h;N組喂飼基礎(chǔ)飼料,自由活動(dòng)。胃腸安組予胃腸安丸混懸液灌胃,用蒸餾水將胃腸安丸配制成混懸液,4℃保存?zhèn)溆?投藥前將藥液在室溫中放置 1h,并充分混勻后使用。 灌胃劑量為 60mg? kg-1? d-1,相當(dāng)于人體用量 (4mg? kg-1? d-1)的 15倍;C組及 N組灌胃 2 mL蒸餾水。連續(xù) 4d。

1.5 主要觀測(cè)指標(biāo)

1.5.1 體重增長(zhǎng)率計(jì)算:以模型制備當(dāng)日體重作為初始體重,每日計(jì)測(cè)體重,體重增長(zhǎng)率=(每日體重-初始體重)÷初始體重×100%。

1.5.2 腹瀉率觀察:腹瀉率=腹瀉的動(dòng)物數(shù) /該組動(dòng)物總數(shù)×100% 。干便和稀便的區(qū)分以濾紙上有無(wú)污跡為標(biāo)準(zhǔn)。

1.5.3 腹瀉潛伏期觀測(cè):指每只實(shí)驗(yàn)鼠自模型制備開(kāi)始到出現(xiàn)溏稀便所用時(shí)間,以小時(shí)計(jì)算。

1.5.4 腹瀉指數(shù)計(jì)測(cè):腹瀉指數(shù)[4]=稀便率×平均稀便級(jí)。稀便率:每只動(dòng)物所排的稀便數(shù)與總便數(shù)之比。糞便次數(shù):以每?；蛎慷?(不能分清粒數(shù)者)為一次。稀便級(jí):表示每只動(dòng)物稀便的程度,以稀便污染濾紙所形成污跡的直徑定級(jí),分為 4級(jí): ＜ 1cm(1級(jí) ),1～2cm(2級(jí) ),2～3cm(3級(jí)),＞ 3cm(4級(jí))。(稀便直徑的測(cè)量:圓形者測(cè)其直徑;橢圓形或不規(guī)則形狀測(cè)其最長(zhǎng)和近似園的直徑,兩數(shù)相加除以 2。)平均稀便級(jí)=稀便級(jí)數(shù)總和 /稀便次數(shù)。

1.5.5 血清電解質(zhì)測(cè)定:分離血清,采用電極法檢測(cè)各樣本血清 K+、Na+、Cl-、Ca2+含量,具體操作方法按試劑使用說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.5.6 結(jié)腸組織 V IP含量檢測(cè):實(shí)驗(yàn)周期結(jié)束,禁食12h,10%水和氯醛腹腔麻醉,剖開(kāi)腹腔,剪取距回盲部 10cm處結(jié)腸組織 200mg,縱向剖開(kāi),冷生理鹽水反復(fù)沖洗,-70℃超低溫冰箱凍存。測(cè)定時(shí)以125I為放射性標(biāo)記物,采用平衡飽和加樣程序,具體操作步驟按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用 Spss for windows16.0統(tǒng)計(jì)軟件處理,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以表示,兩組間樣本均數(shù)比較采用雙側(cè) t檢驗(yàn),多組間樣本均數(shù)比較采用方差分析,率的顯著性比較采用卡方檢驗(yàn)。P＜0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組體重增長(zhǎng)率比較 如圖 1所示,與N組相比,胃腸安丸組與 C組體重增長(zhǎng)率顯著下降(P＜0.01),其中,胃腸安丸組體重下降幅度低于 C組,實(shí)驗(yàn)開(kāi)始第 4天,胃腸安丸組與 C組體重增長(zhǎng)率間差值最大,但兩組間比較無(wú)顯著性差異 (P＞0.05)。

2.2 腹瀉率、腹瀉潛伏期及腹瀉指數(shù)比較 喂飼高乳糖飼料 24 h后,胃腸安丸組和 C組大鼠陸續(xù)出現(xiàn)溏稀便,至 48h兩組腹瀉率達(dá) 100%。N組大鼠糞便呈顆粒狀。

胃腸安丸組腹瀉潛伏期與 C組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。但在實(shí)驗(yàn)周期內(nèi),胃腸安丸組腹瀉指數(shù)自實(shí)驗(yàn)開(kāi)始第2天與 C組呈現(xiàn)差異,至第 4天顯著低于 C組,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05)。見(jiàn)表 1。這一結(jié)果與體重增長(zhǎng)率的變化趨勢(shì)相吻合。

圖1 各組體重增長(zhǎng)率比較

表1 腹瀉潛伏期與腹瀉指數(shù)比較(n=8,)

表1 腹瀉潛伏期與腹瀉指數(shù)比較(n=8,)

與 C組相比:△ P＜0.05

分 組 C組 WCA組潛伏期 (h) 28.812± 9.024 28.938± 9.901腹1d — —瀉 2d 0.988± 0.191 0.964± 0.171指 3d 1.135± 0.109 1.078± 0.723數(shù) 4d 1.266± 0.209 1.066± 0.059△

2.3 胃腸安丸對(duì)電解質(zhì)的影響 與 N組比較,C組血清Ca2+、K+含量明顯降低(P＜0.01),而胃腸安組 Ca2+、K+含量明顯升高,與 C組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。但各組間血清 Na+、Cl-含量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞ 0.05)。見(jiàn)表 2。

2.4 胃腸安丸對(duì) V IP的影響 與 N組比較,C組結(jié)腸組織 V IP含量明顯升高(P＜0.01),胃腸安組結(jié)腸組織 VIP含量顯著降低(P＜0.01)。見(jiàn)表 2。

表2 各組電解質(zhì)、V IP含量比較(n=8,)

表2 各組電解質(zhì)、V IP含量比較(n=8,)

注:與 N組比較,△P ＜0.05,◇P＜0.01;與 C組比較 ,▲P＜0.05,◆P ＜0.01

分 組 K+(mmol/L) Na+(mmol/L) Cl-(mmol/L) Ca2+(mmol/L) VIP(ng/g)N 組 4.10± 0.20 138.43± 1.90 100.14± 1.21 2.57± 0.09 156.00± 16.92 C組 3.68± 0.12◇ 137.43±2.57 98.71± 2.63 2.40±0.09◇ 220.76±13.71◇WCA組 4.00± 0.23▲ 139.71±2.98 99.14± 2.04 2.53±0.15▲ 143.29±21.29◆

3 討 論 中醫(yī)學(xué)認(rèn)為泄瀉的發(fā)生,可因感受寒濕、暑濕、濕熱等外邪引發(fā),或因飲食不節(jié)、食積停滯誘發(fā),或因憂思惱怒、情志失調(diào)所致,亦可因久病體虛 ,年老體衰導(dǎo)致。因此,本研究采用高乳糖喂飼模擬飲食失常、以束縛應(yīng)激復(fù)制精神刺激制作肝脾不調(diào)所致 IBS-D動(dòng)物模型,用以探討胃腸安丸的止瀉機(jī)制。

胃腸安丸由木香、麝香、檀香、沉香、朱砂、厚樸、枳殼、大黃、巴豆霜、川芎、大棗等組成,其中木香、檀香、沉香、厚樸、枳殼具有行氣調(diào)中止痛之功,朱砂逐痰涎除中惡腹痛,川芎、麝香活血以行氣,大黃、巴豆霜攻下積滯,大棗調(diào)和諸藥,綜觀全方具有芳香化濁、理氣止痛、健胃導(dǎo)滯等功效,組方注重攻補(bǔ)兼施,寒熱并用,體現(xiàn)了“通因通用”的治療原則。

本研究結(jié)果表明,實(shí)驗(yàn)周期內(nèi),胃腸安丸組體重增長(zhǎng)率始終高于模型組,腹瀉指數(shù)低于模型組。至實(shí)驗(yàn)第 4天,兩組間體重增長(zhǎng)率和腹瀉指數(shù)的差別達(dá)到頂點(diǎn),其中腹瀉指數(shù)的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,證實(shí)胃腸安丸具有止瀉作用。

血液中的電解質(zhì)對(duì)于維持體液滲透壓平衡、水平衡及酸堿穩(wěn)定有重要作用,而腹瀉時(shí)這些離子可從胃腸道丟失,同時(shí)伴隨腹瀉時(shí)間的延長(zhǎng)或程度的加重,電解質(zhì)紊亂程度隨之加重。為此本研究以血清電解質(zhì)作為評(píng)估大鼠腹瀉程度的量化指標(biāo)。結(jié)果表明:模型組血清 K+、Ca2+含量明顯降低,顯示本課題動(dòng)物模型呈電解質(zhì)紊亂狀態(tài);胃腸安丸可明顯改善因腹瀉所致K+、Ca2+異常,其調(diào)節(jié)血清電解質(zhì)平衡的結(jié)果進(jìn)一步表明胃腸安丸具有明確的止瀉作用。

VIP是一種由 28個(gè)氨基酸殘基組成的肽類物質(zhì),因其具有明顯的擴(kuò)血管作用而被命名為血管活性腸肽。以往認(rèn)為 VIP為一抑制性神經(jīng)遞質(zhì),但隨著近年研究的增多,對(duì)其參與調(diào)節(jié)胃腸分泌及運(yùn)動(dòng)的作用有了新的認(rèn)識(shí)。V IP是產(chǎn)生下行性抑制的重要因素,其濃度降低能引起結(jié)腸的節(jié)段性蠕動(dòng)增多,從而使有效推動(dòng)減弱。有研究表明[5],在脾虛泄瀉患者或脾虛泄瀉大鼠模型均能檢測(cè)到腸道及血漿V IP含量增加,同時(shí) VIP亦是促分泌的神經(jīng)遞質(zhì),能刺激腸腺分泌,引起水、電解質(zhì)和粘液進(jìn)入腸腔。本研究顯示,胃腸安丸能降低模型大鼠 V IP含量,且與正常鼠無(wú)差異。據(jù)此推測(cè),胃腸安丸可能是通過(guò)降低 V IP含量實(shí)現(xiàn)改善病理性腸運(yùn)動(dòng)亢進(jìn)的目的,從而發(fā)揮止瀉作用。有關(guān)胃腸安丸的止瀉作用機(jī)理還有待進(jìn)一步研究。

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