陳 珂，鄺 明，易 蓉，陳 菊（四川瀘州市食品藥品檢驗所，瀘州市 646000）

解毒通竅丸是由白芷、全蝎、桔梗、連翹等中藥材組成的復方制劑。白芷為方中主藥，具有通竅止痛、散風除濕、消腫排膿等功能[1]。白芷含揮發(fā)油及多種香豆精衍生物，后者是白芷止痛的主要成分。歐前胡素是白芷中的一種香豆精衍生物，是白芷的特征成分[2]。由于解毒通竅丸目前的質(zhì)量標準中沒有收載含量測定方法，因此筆者采用高效液相色譜（HPLC）法對該制劑中歐前胡素進行含量測定，且證明方法簡便、準確、重復性好，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

1 材料

1.1 儀器

1200型HPLC儀（美國Agilent公司）；AE240型電子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；MJ600型超聲波儀（無錫市美潔超聲設備有限公司）。

1.2 試藥

歐前胡素對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110826-200712）；甲醇為色譜純，其它試劑均為分析純；解毒通竅丸（瀘州市建平醫(yī)院制備，批號：070228、070215、070201）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱：Waters Symmetryshielb C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-水（65∶35）；檢測波長：248 nm；流速：1.0 mL·min-1；柱溫：室溫。理論塔板數(shù)按歐前胡素計算應不低于3 000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液：稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥12 h的歐前胡素對照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.02 mg的溶液，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液：取本品約2 g，精密稱定，置于50 mL量瓶中，加甲醇40 mL，超聲處理（功率300 W，頻率50 kHz）40 min，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性對照溶液：取不含白芷的陰性樣品，按“2.2.2”項下方法制備陰性對照溶液。

2.3 測定方法

分別精密量取供試品溶液與對照品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測定，即得。

2.4 陰性對照試驗

取上述對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液適量，按“2.1”項下色譜條件測定。結果，陰性對照溶液在歐前胡素峰位置處無峰出現(xiàn)，表明陰性對照對測定無干擾。色譜圖見圖1。

2.5 線性關系考察

精密吸取歐前胡素對照品溶液（0.015 g·L-1）1.0、3.0、5.0、7.0、9.0 μL，分別注入液相色譜儀，按“2.1”項下色譜條件進行測定。以峰面積積分值（Y）為縱坐標，對照品進樣量（X）為橫坐標，制備標準曲線，得回歸方程為Y＝2 694 960X+6 554（r＝0.999 7）。結果表明，歐前胡素進樣量在0.15～1.35 μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關系。

2.6 穩(wěn)定性試驗

取同一供試品溶液，室溫下放置，分別于0、2、4、8、12、24 h按“2.1”項下色譜條件測定。結果，平均峰面積為1 174，RSD＝0.62%，表明供試品溶液在室溫放置24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 精密度試驗

精密吸取對照品溶液10 μL，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，連續(xù)測定5次。結果，平均峰面積為1 517，RSD＝0.22%，表明儀器精密度良好。

2.8 重復性試驗

取同一批樣品共6份，分別按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件測定。結果，樣品平均含量為0.279 mg·g-1，RSD＝0.58%，表明方法重復性良好。

2.9 加樣回收率試驗

精密稱取已知含量的樣品，分別精密加入一定量的歐前胡素對照品，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件測定，計算加樣回收率，結果見表1。

表1 加樣回收率試驗結果（n＝9）Tab 1Results of recovery test（n＝9）

2.10 樣品含量測定

取3批樣品，按正文含量測定方法測定，結果見表2。

表2 樣品含量測定結果（n＝3）Tab 2Determination of the results of samples（n＝3）

3 討論

在供試品溶液的制備中，筆者對加熱回流法、超聲提取法及提取溶劑乙醚、甲醇、乙醇進行了比較，結果顯示以甲醇超聲提取40 min效果最理想。

取歐前胡素對照品，用甲醇稀釋成適當濃度，在200～280 nm波長范圍內(nèi)用紫外檢測器掃描，根據(jù)各波長的峰形和響應值，最終選擇檢測波長為248 nm。

筆者還對流動相的組成及比例進行了反復試驗，結果顯示以甲醇-水（65∶35）為流動相分離效果較好。

[1]國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典（一部）[S].2005年版.北京：化學工業(yè)出版社，2005：69.

[2]張富強，聶 江，韋 藝，等.白芷的化學與藥理研究進展[J].南京中醫(yī)藥大學學報（自然科學版），2002，18（3）：190.