葉冬梅，韋海明，李 徽

(廣西壯族自治區(qū)人民醫(yī)院，廣西 南寧 530021)

長春瑞濱是臨床上常用的廣譜抗癌藥物，為肺癌、乳腺癌及卵巢癌等的化療方案中主要組成成分，有文獻(xiàn)指出骨髓抑制及神經(jīng)系統(tǒng)毒性為其主要不良反應(yīng)[1]，而肝臟損害的發(fā)生率和嚴(yán)重程度在不同的文獻(xiàn)報(bào)道中有較大差異[2-3]，尚無嚴(yán)格的研究報(bào)告。對(duì)于應(yīng)用聯(lián)合化療方案的患者，出現(xiàn)肝損害時(shí)不能確定主要是由哪一種藥物引起，更換治療方案時(shí)選擇哪一種藥物組合可最大程度降低肝毒性也無文獻(xiàn)依據(jù)。本研究主要通過測(cè)定給藥后小鼠血清生化指標(biāo)、肝組織過氧化及抗氧化指標(biāo)，檢查肝組織病理，探討長春瑞濱引起肝損害的時(shí)間和對(duì)肝臟損害的程度，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與材料

數(shù)顯恒溫水浴鍋(金壇市醫(yī)療儀器廠)；Baujahr 2000型低溫離心機(jī)(上海博星基因芯片有限公司)；8430型紫外-可見分光光度計(jì)（美國惠普）。昆明種雄性小鼠，體重(20±2)g，廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)為SYKG桂2003-0005。長春瑞濱注射液(江蘇豪森制藥有限公司，批號(hào)為20090101)；丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD）、還原型谷胱甘肽(GSH)試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供（批號(hào)為20091026）。

1.2 動(dòng)物分組與模型建立

取健康昆明種雄性小鼠50只，10只設(shè)為正常對(duì)照組(K組)，靜脈注射生理鹽水0.2 mL；40只作為試驗(yàn)組，尾靜脈注射0.56 g/L長春瑞濱注射液0.2 mL（按臨床常用劑量25 mg/m2換算）。對(duì)照組于給藥第3天取標(biāo)本；試驗(yàn)組隨機(jī)均分為A，B，C，D組，每組分別于給藥第3，7，11，14天時(shí)取血和肝組織進(jìn)行指標(biāo)檢測(cè)（取標(biāo)本前1天禁食）。

1.3 觀察指標(biāo)檢測(cè)

從小鼠眼眶采血，以3 000 r/min轉(zhuǎn)速離心10 min，分離血清檢測(cè)直接膽紅素（DBIL）、堿性磷酸酶(ALP)、天門冬酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)。取小鼠肝組織0.2 g，加4℃生理鹽水在冰浴下制成10%(W/W)肝組織勻漿，將勻漿在4℃離心10 min（4 000 r/min）,取上清液，以考馬斯亮藍(lán)法檢測(cè)總蛋白含量，按試劑盒方法測(cè)定肝組織勻漿MDA、GSH含量和SOD活性。取一小塊同一部位的肝組織，用10%甲醛固定，石蠟包埋，切片，HE染色，置電子顯微鏡下觀察。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 血清生物化學(xué)指標(biāo)

結(jié)果見表1。

表1 血清生化指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果(X ± s，U/L)

2.2 肝組織氧化及抗氧化指標(biāo)

結(jié)果見表2。

表2 肝組織氧化及抗氧化指標(biāo)(±s)

表2 肝組織氧化及抗氧化指標(biāo)(±s)

組別K組(n=10)A組(n=10)B組(n=10)C組(n=10)D組(n=10)MDA(nmol/mg)124.98±10.14 213.72±8.03▲249.93±13.13▲246.15±15.31▲216.51±14.81▲GSH(mg/g)53.95±1.76 41.50±5.42△40.46±3.73△36.00±4.55▲34.76±5.25▲SOD(U/mg)66.43±4.63 60.59±4.25 60.53±5.31 62.26±7.44 63.88±3.13

表3 病理學(xué)檢查結(jié)果

2.3 肝臟組織病理學(xué)檢查

試驗(yàn)組動(dòng)物在給藥第3天即出現(xiàn)肝細(xì)胞病理改變，普遍表現(xiàn)為肝細(xì)胞脂肪變性。其中50.00%為中等到大量肝細(xì)胞脂肪變性；20.00%出現(xiàn)肝細(xì)胞壞死，以點(diǎn)狀壞死多見，周圍有炎性細(xì)胞；12.50%出現(xiàn)肝細(xì)胞瘀膽。結(jié)果見表3。小鼠肝臟組織病理切片(10×10)顯示，對(duì)照組肝小葉結(jié)構(gòu)、肝索、肝竇清晰；試驗(yàn)組肝小葉彌漫性脂肪變性，肝細(xì)胞點(diǎn)狀壞死，周圍有炎性細(xì)胞，肝小葉結(jié)構(gòu)不清，肝索、肝竇不能分辨，肝細(xì)胞瘀膽(圖略)。

3 討論

一般認(rèn)為，長春瑞濱的主要不良反應(yīng)為血液學(xué)毒性和神經(jīng)毒性[1]，肝臟毒性很少被提及，臨床上對(duì)長春瑞濱的肝臟損傷作用關(guān)注也較少。本研究顯示，試驗(yàn)組動(dòng)物在給藥第3天即出現(xiàn)血清生化指標(biāo)與肝臟組織病理改變，說明無藥物防護(hù)情況下，臨床劑量的長春瑞濱在用藥第3天即可能導(dǎo)致肝細(xì)胞損傷，應(yīng)引起臨床重視。

本研究發(fā)現(xiàn)，試驗(yàn)組動(dòng)物在給藥第3天肝組織脂質(zhì)過氧化物MDA較對(duì)照組明顯升高，抗氧化成分GSH則明顯降低，且一直延續(xù)至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。這符合藥物誘導(dǎo)肝臟損傷的氧化應(yīng)激反應(yīng)機(jī)制，即藥物誘導(dǎo)的肝臟損傷與藥物的代謝異常有密切關(guān)系。藥物本身含有的及其經(jīng)CYP450酶系代謝產(chǎn)生的自由基、親電子基、氧基等有害活性物質(zhì)，通常與GSH結(jié)合而解毒，并不產(chǎn)生肝損傷，而某些原因?qū)е赂谓M織抗氧化防御體系（GSH等）功能下降時(shí)，可引發(fā)脂質(zhì)過氧化，肝組織脂質(zhì)過氧化鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的終產(chǎn)物之一MDA升高，導(dǎo)致肝臟氧化應(yīng)激損傷，輕者為脂肪變性（具有可逆性），重者可發(fā)生中毒性肝細(xì)胞壞死[4-5]。

鑒于氧化應(yīng)激反應(yīng)在化學(xué)治療性肝損傷的作用，臨床使用長春瑞濱治療期間，應(yīng)及早應(yīng)用抗氧化劑，通過其與過氧化物及自由基結(jié)合，對(duì)抗氧化劑對(duì)巰基的破壞，保護(hù)細(xì)胞膜中含巰基的蛋白質(zhì)和含巰基的酶不被破壞，從而減輕化學(xué)治療對(duì)肝臟的毒副作用，保證腫瘤治療順利進(jìn)行。

[1]孫 燕.抗腫瘤藥物手冊(cè)[M].北京：北京大學(xué)醫(yī)學(xué)出版社，2007:174-176.

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