狄永良

(江蘇省溧陽市中醫(yī)院，江蘇 常州 213300)

穿黃消炎膠囊由穿心蓮和一枝黃花組成[1]，具清熱解毒之功效，用于治療急性上呼吸道感染、急性扁桃體炎、咽喉炎等熱毒壅盛證，穿心蓮內(nèi)酯與脫水穿心蓮內(nèi)酯為其主要有效成分，為進(jìn)一步嚴(yán)格控制質(zhì)量，筆者對(duì)其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了補(bǔ)充研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀(日本島津)，包括LC-10ATVP型溶劑輸送泵，SPD-10AVP型紫外-可見檢測(cè)器;HW-2000型色譜工作站(南京千譜軟件有限公司)。脫水穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品(批號(hào)為110854-200705)，穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品(批號(hào)為110797-200707)，穿心蓮對(duì)照藥材(批號(hào)為121082-200702)，一枝黃花對(duì)照藥材(批號(hào)為121433-200801)，均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所;硅膠G和GF254(薄層色譜用，青島海洋化工廠);甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 處方和制備

處方:穿心蓮750 g，一枝黃花1 250 g，淀粉116 g，制成1 000粒。

制備:按處方量取以上2味藥材，將穿心蓮200 g粉碎成細(xì)粉，其余穿心蓮與一枝黃花一起加水煎煮2次，第1次2h，第2次1.5 h，合并煎液，濾過，濾液濃縮成相對(duì)密度為1.14～1.16(85℃)的清膏，放冷，加乙醇成含醇量為60%，攪拌，靜置48 h，濾過，濾液濃縮成相對(duì)密度為1.31～1.35(60～80℃)的稠膏，加入上述穿心蓮細(xì)粉及淀粉，混勻，干燥，粉碎成細(xì)粉，混勻，裝入膠囊，即得。

2.2 一般質(zhì)量控制

性狀:本品為膠囊劑，內(nèi)容物為灰綠色的粉末，味苦。

檢查:應(yīng)符合2005年版《中國(guó)藥典(一部)》附錄ⅠD膠囊劑項(xiàng)下各有關(guān)規(guī)定。

2.3 薄層色譜鑒別

穿心蓮:參考穿黃消炎片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和2005年版《中國(guó)藥典(一部)》[2]穿心蓮項(xiàng)下鑒別方法。取本品內(nèi)容物1 g，加乙醇20 mL，加熱回流30 min，濾過，濾液濃縮至1 mL，即得供試品溶液。取穿心蓮對(duì)照藥材1 g，按供試品溶液制備方法制備，即得對(duì)照藥材溶液。取脫水穿心蓮內(nèi)酯、穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品，加無水乙醇制成每1 mL各含1 mg的混合溶液，即得對(duì)照品溶液。取不含穿心蓮的陰性樣品1 g，按供試品溶液制備方法制備，即得陰性對(duì)照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述4種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠GF254薄層板上，以氯仿-醋酸乙酯(4∶5)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254 nm)下檢視。結(jié)果供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜和對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上分別顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照品溶液無干擾(圖 1 A)。

一枝黃花:取本品內(nèi)容物4 g，加甲醇-水(1∶1)60 mL加熱回流1 h，趁熱濾過，濾液濃縮至約20 mL，加水10 mL，再加稀硫酸約0.5 mL，繼續(xù)回流1 h，放冷，用醋酸乙酯振搖提取2次，每次30 mL，合并醋酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，即得供試品溶液。取一枝黃花對(duì)照藥材6 g，按供試品溶液制備方法制備，即得對(duì)照藥材溶液。取不含一枝黃花的陰性樣品4 g，按供試品溶液制備方法制備，即得陰性對(duì)照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各10 μL，分別點(diǎn)于用1%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上以甲苯-醋酸乙酯 -甲酸(5∶4∶1)為展開劑，噴以1%三氯化鋁乙醇溶液，熱風(fēng)吹干置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的熒光主斑點(diǎn)，陰性對(duì)照品溶液無干擾(圖 1 B)。

圖1 薄層色譜圖

2.4 含量測(cè)定[3]

2.4.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:Shim-packVP-ODS柱(150mm×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:甲醇 -水(55 ∶45);檢測(cè)波長(zhǎng):250 nm;流速:1.0 mL/min;靈敏度:0.02 AUFS。在上述條件下，脫水穿心蓮內(nèi)酯和樣品中其他組分色譜峰達(dá)到基線分離，理論板數(shù)按脫水穿心蓮內(nèi)酯峰計(jì)算應(yīng)不低于4 000。色譜圖見圖2。

2.4.2 溶液制備

取本品內(nèi)容物適量，混勻，取約1 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入40%甲醇 50 mL，稱定質(zhì)量，浸泡 1 h，超聲(功率160 W，頻率40 kHz)處理30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用40%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液10 mL，置中性氧化鋁柱(200～300 目，5 g，內(nèi)徑 1.5 cm)上，用甲醇20 mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，用甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。取不含穿心蓮的陰性樣品，同法制備陰性對(duì)照品溶液。精密稱取脫水穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品15.0 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備液;精密吸取該液適量，置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。

圖2 高效液相色譜圖

2.4.3 方法學(xué)考察

干擾試驗(yàn):分別吸取供試品溶液、陰性對(duì)照品溶液及對(duì)照品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果色譜圖中在脫水穿心蓮內(nèi)酯峰位置無其他干擾出現(xiàn)(圖2)。

標(biāo)準(zhǔn)曲線制備:分別精密吸取對(duì)照品貯備液 1，2，3，4，5 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，吸取10 μL，注入高效液相色譜儀測(cè)定峰面積。以對(duì)照品質(zhì)量濃度(X)對(duì)峰面積積分值(Y)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 Y=7 673 873.333 33 X-7 858.6，r=0.999 9(n=5)。結(jié)果表明，脫水穿心蓮內(nèi)酯質(zhì)量濃度在0.03～0.15 g/L范圍內(nèi)與峰面積積分值有良好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn):精密吸取對(duì)照品溶液(0.12 g/L)10 μL，按上述色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次。結(jié)果平均峰面積積分值為918 952，RSD=0.54%(n=6)，表明方法精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):精密吸取同一批(批號(hào)為080101)供試品溶液，按上述色譜條件，分別在 0，1，2，3，4，5，6，7，8，24 h 時(shí)進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果平均峰面積積分值為795 830，RSD=0.53%(n=10)，表明供試品溶液24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一批(批號(hào)為080101)供試品，按樣品含量測(cè)定方法操作，平行制備5份，按上述色譜條件測(cè)定含量。結(jié)果脫水穿心蓮內(nèi)酯平均含量為1.99 mg/粒，RSD=1.3%(n=5)，表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn):精密稱取已知含量的樣品(批號(hào)為080101，含量為1.99 mg/粒)適量，精密加入質(zhì)量濃度為0.5 g/L的脫水穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品溶液5 mL，依法測(cè)定其含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

2.4.4 樣品含量測(cè)定

分別精密吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積，計(jì)算含量。結(jié)果見表2。根據(jù)10批樣品的檢測(cè)結(jié)果，結(jié)合穿黃消炎片標(biāo)準(zhǔn)中脫水穿心蓮內(nèi)酯含量測(cè)定限度規(guī)定，暫訂本品每粒含穿心蓮以脫水穿心蓮內(nèi)酯(以C20H28O4計(jì))不得少于1.40 mg。

表1 脫水穿心蓮內(nèi)酯加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=5)

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果(n=10)

3 討論

對(duì)脫水穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品的甲醇溶液進(jìn)行紫外掃描，發(fā)現(xiàn)其在250 nm波長(zhǎng)處有強(qiáng)吸收，與2005年版《中國(guó)藥典(一部)》中穿心蓮含量測(cè)定項(xiàng)下脫水穿心蓮內(nèi)酯檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm接近，故選擇250 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

脫水穿心蓮內(nèi)酯易溶于甲醇、乙醇或含水甲醇、含水乙醇，故樣品制備可采用一定濃度的甲醇或乙醇作為提取溶劑。原穿黃消炎片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中含量測(cè)定項(xiàng)下樣品制備采用70%乙醇浸漬過夜，因脂溶性成分和葉綠素較多，故采用正己烷振搖提取，脫去脂溶性成分和葉綠素，處理步驟較煩瑣。參考2005年版《中國(guó)藥典(一部)》穿心蓮藥材含量測(cè)定項(xiàng)下樣品制備方法，采用40%甲醇超聲提取，脂溶性成分和葉綠素提出較少，可省去正己烷振搖提取脫脂溶性成分和葉綠素步驟。對(duì)供試品溶液制備過程中超聲時(shí)間(15，30，45，60 min)及柱洗脫溶劑體積(10，20，30，40 mL)分別進(jìn)行考察，結(jié)果超聲提取30 min、洗脫溶劑用量為20 mL時(shí)含量基本不再增加，最終確定超聲時(shí)間為30 min，柱洗脫用甲醇體積為20 mL。

曾參考原穿黃消炎片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)下一枝黃花的鑒別進(jìn)行試驗(yàn)，供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照品溶液無干擾。但供試品溶液和對(duì)照藥材溶液色譜清晰度均較差，經(jīng)加大點(diǎn)樣量，斑點(diǎn)仍不夠清晰。色譜照片較難拍攝清晰。改用文中所述方法進(jìn)行試驗(yàn)后，熒光斑點(diǎn)清晰易辨。

[1]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，1977:1.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:189-190.

[3]WS-11053(ZD-1053)-2002，國(guó)家中成藥標(biāo)準(zhǔn)匯編(中成藥地方標(biāo)準(zhǔn)上升國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)部分)內(nèi)科肺系(一)分冊(cè)[S].