羅亞虹，侯 軍

(1.廣西壯族自治區(qū)桂林食品藥品檢驗(yàn)所，廣西 桂林 541002; 2.廣西桂林南藥股份有限公司，廣西 桂林 541003)

布美他尼為一速效利尿藥，利尿作用強(qiáng)，起效快，可用于治療各種頑固性水腫及急性肺水腫，尤其適用于急、慢性腎功能衰竭[1]93。由于該藥在合成過(guò)程中需使用甲苯、乙醇等有機(jī)溶劑，產(chǎn)品中的有機(jī)殘留量對(duì)人體有害，依據(jù)人用藥品注冊(cè)技術(shù)規(guī)范國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì)(ICH)提出的殘留溶劑指導(dǎo)原則，甲苯、乙醇分別列為藥品必須限制的第二類、三類有機(jī)溶劑[2]。筆者采用頂空氣相色譜法測(cè)定布美他尼中有機(jī)溶劑的殘留量，報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

日本島津GC-17A型氣相色譜儀，HSS-4A型頂空進(jìn)樣裝置，CLASS-GC10型色譜工作站，GR-202型電子天平。布美他尼原料藥(桂林南藥股份有限公司，批號(hào)分別為080102，080103，080104);乙醇、甲苯、正丙醇均為分析純，水為重蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:DB-1型石英毛細(xì)管柱(30 m×0.53 mm，1.5 μm);柱溫:采用程序升溫，起始溫度35℃，維持3 min，再以55℃ /min升溫至90℃，維持1.5 min;載氣:氮?dú)?流速:4 mL/min;氫火焰離子化檢測(cè)器(FID);進(jìn)樣口溫度:200℃;檢測(cè)器溫度:250℃;頂空瓶溫度:80℃，平衡30 min，進(jìn)樣量1 mL。在此色譜條件下，甲苯與乙醇分離滿意。甲苯、乙醇、內(nèi)標(biāo)物正丙醇保留時(shí)間分別約為5.8，2.1，3.2 min。理論板數(shù)按正丙醇峰計(jì)不低于8 000。甲苯、乙醇與內(nèi)標(biāo)物正丙醇的分離度均大于2。色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.2 溶液制備

精密稱定正丙醇8.75 mg，置250 mL量瓶中，加水至刻度，作為內(nèi)標(biāo)溶液。分別精密稱取乙醇9.25 mg，甲苯9.0 mg，置250 mL量瓶中，加水至刻度，作為對(duì)照品貯備液;精密量取對(duì)照品貯備液0.5 mL，置頂空瓶?jī)?nèi)，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1 mL，加蓋密封，作為對(duì)照品溶液。精密稱取供試品約0.2 g，置頂空瓶?jī)?nèi)，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1 mL，加蓋密封，作為供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn):取不加供試品的頂空瓶，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1 mL，加蓋，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析得色譜圖。結(jié)果沒(méi)有與乙醇、甲苯相同的色譜峰，說(shuō)明內(nèi)標(biāo)物正丙醇所含的雜質(zhì)對(duì)測(cè)定沒(méi)有影響(圖 1 C)。

線性關(guān)系考察:精密量取對(duì)照品貯備液0.1，0.3，0.5，0.7，0.9 mL，分別置頂空瓶中，各加內(nèi)標(biāo)溶液1 mL，加蓋密封，在80℃保溫30 min，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣3次。分別以對(duì)照品乙醇、甲苯與內(nèi)標(biāo)物正丙醇的峰面積之比為縱坐標(biāo)、對(duì)照品溶液的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。結(jié)果乙醇和甲苯的回歸方程分別為C=64.36 A-1.463，r=0.999 8(n=5)，C=12.37 A-2.536，r=0.999 6(n=5)。當(dāng)基線噪音峰為 S/N=3時(shí)，乙醇和甲苯的最低檢測(cè)限分別為0.02 μg/g和0.05 μg/g。結(jié)果表明乙醇和甲苯的質(zhì)量濃度分別在 3.7～33.3 μg/mL 和 3.6～32.4 μg/mL 的范圍內(nèi)與峰面積之比線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn):取同一對(duì)照品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次。結(jié)果乙醇及甲苯與正丙醇的峰面積之比的 RSD分別為1.19%，1.01%。

重復(fù)性試驗(yàn):取供試品(批號(hào)為080102)，依法重復(fù)測(cè)定6次。結(jié)果乙醇的平均含量為4.08 μg/g，RSD為1.48%。

加樣回收試驗(yàn):用已測(cè)得殘留量的試樣，精密添加對(duì)照品貯備液0.3，0.5，0.7 mL，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 乙醇和甲苯的加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

2.4 樣品含量測(cè)定

稱取3批樣品，每份約0.2 g，各置頂空瓶中，分別加入內(nèi)標(biāo)溶液1 mL，加蓋密封，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果樣品中均未檢出甲苯，乙醇溶劑殘留符合規(guī)定[2]。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果(n=3)

3 討論

在固定平衡時(shí)間時(shí)，曾對(duì)甲苯、乙醇在60，70，80，90℃下色譜響應(yīng)值(峰面積)的變化進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果在80℃時(shí)兩種溶劑的響應(yīng)值(峰面積)最大，故選用80℃作為頂空平衡溫度。

頂空平衡時(shí)間取決于被測(cè)組分分子從基質(zhì)到氣相的擴(kuò)散速度，固定平衡溫度為80℃時(shí)，曾試驗(yàn)甲苯、乙醇在平衡時(shí)間為5，10，20，30，40 min 時(shí)色譜響應(yīng)值(峰面積)的變化，結(jié)果平衡時(shí)間30 min時(shí)達(dá)到最大值，說(shuō)明在30 min時(shí)各組分已達(dá)到了氣液兩相平衡，故選擇30 min作為頂空平衡時(shí)間。

本試驗(yàn)所建立的頂空氣相色譜法，液體與固體共存頂空自動(dòng)化進(jìn)樣，試驗(yàn)方法簡(jiǎn)便、靈敏度高、精密度及重復(fù)性好，可作為布美他尼原料藥中的有機(jī)溶劑殘留測(cè)定，對(duì)保證產(chǎn)品質(zhì)量和用藥安全具有實(shí)用性，可用于實(shí)際生產(chǎn)中的質(zhì)量控制。

根據(jù)藥品中常見(jiàn)的殘留溶劑及限度[1]附錄56規(guī)定及本試驗(yàn)的最低檢測(cè)限，建議對(duì)本品中乙醇、甲苯的限度分別規(guī)定為5 mg/g和0.89 mg/g。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(二部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005.

[2]周海鈞.藥品注冊(cè)的國(guó)際技術(shù)要求:質(zhì)量部分(ICH指導(dǎo)委員會(huì))[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，2000:88-89.