楊雪萍，袁紅英，孫 昕，張志國

養(yǎng)心氏片為衛(wèi)生部頒標(biāo)準(zhǔn)第十六冊101頁收載的品種，是黃芩、黨參、葛根、丹參等十余種中藥的復(fù)方制劑，具有扶正固本，益氣活血，行脈鎮(zhèn)痛等功效，用于氣虛血瘀型冠心病、心絞痛，心肌梗死及合并高血脂、高血糖等癥見有上述證候者，臨床療效確切。原標(biāo)準(zhǔn)中未對含量測定指標(biāo)及方法進(jìn)行規(guī)定，為提高藥品質(zhì)量，保證臨床療效，對該制劑中葛根素的含量測定進(jìn)行研究。

1 儀器、試劑與樣品

島津LC-2010高效液相色譜儀，超聲清洗器 （TCQ-250），葛根素對照品（中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用0752-200209），甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純，養(yǎng)心氏片（青島國風(fēng)集團(tuán)）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及檢測方法 C18色譜柱（4.6×150 mm，5 μm），流動(dòng)相甲醇-水（24∶76），流速為 1.0 ml/min，檢測波長 250 nm。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 稱取葛根素對照品適量，精密稱定，加50%甲醇使溶解，制成0.1 mg/ml的溶液，作為對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品內(nèi)容物研細(xì)，取1 g，精密稱定，置具塞三角瓶中，精密加入50%甲醇50 ml，稱定重量，超聲（100 W，50 kHz）處理 30 min，放冷，再稱定重量，以50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過，取續(xù)濾液以微孔濾膜（0.45 μm）濾過，作為供試品溶液。

2.2.3 陰性對照溶液的制備 按處方比例制備不含葛根的陰性對照樣品，按供試品溶液的制備方法制備，即得。

分別吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液各20 μl注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。陰性對照品溶液在葛根素峰位處無干擾，見圖1。

圖1 養(yǎng)心氏片HPLC圖

2.3 線性關(guān)系考察 精密稱定80℃干燥至恒重的葛根素對照品適量，加甲醇溶解制成0.452 mg/ml的葛根素對照品溶液。分別精密移取 2、4、6、8、10 ml于 25 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，各精密吸取20 μl注入液相色譜儀中，測定，測得峰面積、回歸方程，對峰面積積分值與進(jìn)樣量進(jìn)行直線回歸處理，得回歸方程：Y=5 036 718.48X＋74 325.40，回歸系數(shù)r=0.999 9。結(jié)果表明，進(jìn)樣量在0.723 2～3.616 μg與峰面積積分值之間的線性關(guān)系良好。

2.4 精密度試驗(yàn) 精密吸取葛根素對照品溶液 （0.069 mg/ml）20 μl，連續(xù)進(jìn)樣5次，測得5次峰面積積分值的RSD=0.173%，表明儀器精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液，分別于配制后0、4、8、12、24 h進(jìn)行測定，所得葛根素峰面積的RSD=0.419%，結(jié)果表明，供試樣品在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取同一批樣品5份，精密稱定，分別按照上述溶液制備方法及色譜條件進(jìn)行制備，并進(jìn)行測定，計(jì)算葛根素含量的RSD=0.975%，結(jié)果表明，該方法重復(fù)性良好。

2.7 加樣回收試驗(yàn) 取已知葛根素含量的樣品5份約0.5 g（含葛根素為3.91 mg/g），精密稱定，分別精密加入葛根素對照品溶液（0.075 mg/ml）各 25 ml，再精密加 50%甲醇 25 ml，按上述供試品溶液的制備方法及色譜條件進(jìn)行制備并測定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收情況

2.8 樣品含量測定 本別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20 μl，注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算含量，結(jié)果3批樣品中葛根素的含量分別為 2.35、2.51、1.93 mg/片。

3 討 論

本品為黃芪、黨參、丹參、葛根等藥材的復(fù)方制劑，原標(biāo)準(zhǔn)無含量測定方法。分析處方，黃芪為方中要藥，黃芪甲苷為其主要活性成分，因此試驗(yàn)中欲選擇黃芪甲苷作為含量測定指標(biāo)。參考有關(guān)文獻(xiàn)[1，2]對樣品中的黃芪甲苷的含量分別采用薄層掃描法及HPLC－ELSD法進(jìn)行測定，結(jié)果顯示薄層掃描法測定比較繁瑣，樣品需要經(jīng)過反復(fù)處理，試驗(yàn)誤差較大；HPLC－ELSD法測定色譜峰基線較高，干擾嚴(yán)重，分離不好，經(jīng)調(diào)整流動(dòng)相比例仍不能達(dá)到基線分離。故放棄選擇黃芪甲苷作為含量測定指標(biāo)。

葛根為方中要藥，其主要活性成分為以葛根素為代表的黃酮類成分，藥理研究及臨床應(yīng)用表明，葛根在治療冠心病、心絞痛、心肌梗死、高血壓等方面療效確切[3]，且葛根素的高效液相測定方法已較成熟，樣品制備方法簡便，故選擇葛根素作為含量測定的指標(biāo)性成分。

[1]張春輝，吳愛英，楊曉云.薄層掃描法測定養(yǎng)心氏片中黃芪甲苷的含量[J]. 中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2002，22(2)：91.

[2]孫忠敏.HPLC－ELSD法測定養(yǎng)心氏片中黃芪甲苷的含量[J].海峽藥學(xué)，2005，17（4）：75.

[3]陰 健，郭力弓.中藥現(xiàn)代研究與臨床應(yīng)用[M].北京:學(xué)苑出版社，1993.