唐利容,李炳奇,邵會娟,孫萍,谷新利

(1石河子大學(xué)動物科技學(xué)院,石河子832003;2石河子大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院,石河子832003)

中藥復(fù)方促孕灌注液對家兔子宮運(yùn)動的影響

唐利容1,李炳奇2,邵會娟1,孫萍2,谷新利1

(1石河子大學(xué)動物科技學(xué)院,石河子832003;2石河子大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院,石河子832003)

考察中藥復(fù)方促孕灌注液對家兔子宮運(yùn)動的影響,以成年雌性未孕的家兔為實(shí)驗對象,進(jìn)行子宮離體及在體試驗,觀察促孕灌注液對其收縮幅度、收縮頻率及子宮活動力的影響。結(jié)果顯示:與空白組相比,灌注液能極顯著提高離體子宮收縮幅度(P<0.01)和收縮頻率(P<0.01);能顯著提高在體子宮收縮頻率(P<0.05)和收縮幅度(P<0.01)。結(jié)論:中藥復(fù)方促孕灌注液能顯著增強(qiáng)家兔離體、在體子宮活動力。

促孕灌注液;收縮頻率;收縮幅度

Abstract:This study was intended to observe the influence of traditional Chinese medicine prescription fertility-promoting intrauterine infusion liquid on the domestic rabbit in uterine contraction.Healthy white nonfertile rabbits were selected,with the biology function experiment systerm,records normal uterine in vitro orin vivosmooth muscle contractive motion,contractive frequency and contractive amplitude.The result showed that compared with the blank group,fertility-promoting intrauterine infusion liquid can noticeably improve the contractive amplitude(P<0.01)and the contractive frequency(P<0.01)in vitro.It can also improve the contractive amplitude(P<0.05)and the contractive frequency(P<0.01)in vivo.The conclusion is that it can noticeably strengthen the nonfertile dosmestic rabbitin vitroandin vivouterine smooth muscle contractive.

Key words:fertility-promoting intrauterine infusion liquid;contractive frequency;contractive amplitude

灌注液(劑)是指藥材提取物、藥物以適宜的溶劑制成的供子宮、乳房等灌注的滅菌液體制劑[1]。與傳統(tǒng)的口服藥相比,最大特點(diǎn)是改變了用藥途徑,藥物直達(dá)患處,可更有效地治療動物疾病。

目前,治療奶牛不孕癥的子宮灌注液發(fā)展較快,胡元亮等[2]篩選淫羊藿,益母草,紅花等研制出治療奶牛持久黃體、卵巢靜止的促孕灌注液,經(jīng)治療后患病奶牛發(fā)情率可達(dá)90%以上;內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)研制了3個中藥組方分別對卵巢靜止、持久黃體、卵巢囊腫3種奶牛主要卵巢疾病進(jìn)行了治療,效果顯著[3]。中藥復(fù)方促孕散由石河子大學(xué)動物科技學(xué)院中獸醫(yī)實(shí)驗室研制,由淫羊藿、益母草、補(bǔ)骨脂等組方而成,主要用于治療奶牛卵巢靜止和持久黃體,經(jīng)臨床驗證,具有良好的療效,但作為傳統(tǒng)散劑,存在用藥量大,灌服困難,藥材利用率低等缺點(diǎn)。針對這些缺點(diǎn),我們將促孕散的主要活性成分(黃酮、生物堿等)經(jīng)提取后再加附加劑,高溫滅菌制成中藥復(fù)方促孕灌注液,經(jīng)測定,它的各項指標(biāo)均符合中華人民共和國獸藥典中對灌注液的要求,但還沒有對其促孕效果進(jìn)行研究。

根據(jù)灌注液的用藥特點(diǎn),本試驗以雌性成年未孕家兔為實(shí)驗對象,以原促孕散、縮宮素組為對照組,觀測其對家兔離體子宮及在體子宮運(yùn)動的影響,以期為該藥的藥效發(fā)揮提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥品及試劑

中藥復(fù)方促孕散(由石河子大學(xué)動物科技學(xué)院提供,經(jīng)水煎濃縮為每mL含生藥1.00 g的溶液,以下簡稱“促孕散”);中藥復(fù)方促孕灌注液(自制,每mL含生藥1.00 g,以下簡稱“灌注液”);縮宮素(寧波市三生藥液有限公司生產(chǎn),批號080703);苯甲酸雌二醇注射液(2 mg/mL,批號080414,寧波市三生藥液有限公司生產(chǎn));20%烏拉坦;洛氏液,其主要成分為(g/L):NaCl 9.0,KCl 0.42,CaCl20.24,NaHCO30.3,Glucose 2。

1.1.2 動物

體重2.5～3.0 kg成年雌性未孕的家兔12只(購于石河子大學(xué)實(shí)驗動物中心),實(shí)驗前48 h肌肉注射苯甲酸雌二醇,以提高子宮對藥物的敏感性。

1.1.3 主要儀器

BL-420E生物機(jī)能實(shí)驗系統(tǒng)(成都泰盟科技有限公司),HW-400SE恒溫平滑肌槽(成都泰盟科技有限公司),J H-IB肌張力傳感器(成都泰盟科技有限公司),水浴鍋,兔保定臺等。

（4）稻漁綜合種養(yǎng)模式。主要是“稻蝦共作”“稻鱉共作”“稻鰍共作”等養(yǎng)殖模式，已成為全市漁業(yè)發(fā)展新的增長空間，是農(nóng)民增收的重要途徑。

1.2 方法

1.2.1 離體子宮試驗

處死家兔,迅速剖腹取出子宮,剪取子宮角,輕柔剝離附著于子宮壁上的結(jié)締組織和脂肪組織,將其分成3 cm左右的小段,置于新鮮配制的洛氏液中備用。

正式試驗時,先在麥?zhǔn)显〔蹆?nèi)通入預(yù)熱的營養(yǎng)液,保持每次換液量一致。然后取一小段子宮角,兩端用棉線結(jié)扎,一端固定于麥?zhǔn)显〔邸癓”形通氣鉤上,另一端固定于肌張力傳感器上,棉線應(yīng)松緊適度,使其負(fù)重約1 g。控制麥?zhǔn)显〔蹆?nèi)的洛氏液溫度在(38±0.5)℃,接著通入氧氣,保持每秒通入1～2個氣泡。待子宮收縮平穩(wěn)后,開始記錄其正常的收縮曲線,記為空白對照組。描記一段曲線后,累計加入灌注液0.2、0.4、0.6和0.8 mL,每個濃度觀察描記至少10 min。描記完畢后,更換洛氏液,并更換一段子宮角,每組試驗須重復(fù)6次,每重復(fù)1次試驗即更換一段子宮。并按上述方法對促孕散水煎液及縮宮素進(jìn)行觀察描記。

1.2.2 在體子宮試驗

家兔用20%烏拉坦以每千克體重5 mL,經(jīng)耳緣靜脈注射麻醉,在腹部沿腹白線作5 cm切口,牽引一側(cè)子宮角,選取一段兩端用棉線結(jié)扎,結(jié)扎應(yīng)松緊適度,一端墜以1 g砝碼,另一端固定于肌張力傳感器上,棉線應(yīng)松緊適度,使其負(fù)重約1 g。再將此側(cè)子宮送回腹腔,然后開始觀察并描記曲線,待子宮收縮平穩(wěn)后,開始記錄其正常的收縮曲線,記為空白對照組,正式試驗時用注射器往試驗段子宮內(nèi)添加藥物,鑒于結(jié)扎的子宮體積較小,不能加入過多藥物,所以只加入灌注液、0.1 mL,待子宮收縮平穩(wěn)后開始描記曲線,描記時間至少為20 min[6-7]。為避免藥物間相互影響,1只家兔只作1種藥物,每種藥物重復(fù)以上試驗6次,每重復(fù)1次試驗須更換家兔。并按上述方法對促孕散水煎液及縮宮素進(jìn)行觀察描記。

1.2.3 觀測指標(biāo)及數(shù)據(jù)處理

觀測并記錄加入藥液后相同時間段離體、在體子宮的收縮幅度、收縮頻率及子宮活動力(收縮幅度×收縮頻率),數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示,經(jīng)DPS軟件進(jìn)行方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 藥物對家兔離體子宮收縮幅度的影響

由表1可知:

各試驗組分別加入劑量為0.2 mL時,與空白對照組比較,其子宮收縮幅度都有不同程度的提高,縮宮素組提高最明顯(P<0.01),其次是灌注液組(P<0.05),而促孕散組與空白組的差異不顯著。

當(dāng)各試驗組藥物增加到0.4 mL時,各組子宮收縮幅度繼續(xù)呈提高的趨勢,灌注液組與空白對照組相比較,提高明顯(P<0.01)。當(dāng)藥物量增加到0.6 mL時,灌注液組和促孕散組子宮收縮幅度仍略有提高,縮宮素組有下降趨勢,此時與空白組相比較,3組均顯著高于空白組(P<0.01)。當(dāng)藥物量增加到0.8 mL時,灌注液組、促孕散組、縮宮素組間的子宮收縮幅度仍有增加。

表1 各組藥物對家兔離體子宮收縮幅度(mm)的影響Tab.1 Effects of different drug on contractive amplitude(mm)of the uterus of rabbit in vitro

2.2 藥物對家兔離體子宮收縮頻率的影響

由表2可知:各試驗組分別加入劑量為0.2 mL時,相較空白對照組,其子宮收縮頻率都有不同程度的提高,灌注液組和催產(chǎn)素組顯著高于空白對照組(P<0.01),而促孕散組與空白組沒有顯著差異。當(dāng)各試驗組藥物增加到0.4 mL時,各組子宮收縮頻率繼續(xù)提高,灌注液組和催產(chǎn)素組仍顯著高于空白對照組(P<0.01)。當(dāng)藥物量增加到0.6 mL時,灌注液組、促孕散、催產(chǎn)素均顯著高于空白組(P<0.01)。當(dāng)藥物量增加到0.8mL時,灌注液組、促孕散組、縮宮素組的子宮收縮頻率均減弱,此時灌注液組間與縮宮素組差異不顯著。

表2 各組藥物對家兔離體子宮收縮頻率(次/min)的影響Tab.2 Effects of different drug on contractive frequency of t he uterus of rabbit in vitro

2.3 各組藥物對家兔離體子宮活動力的影響

由表3可知:各試驗組分別加入劑量為0.2 mL時,相較空白對照組,其子宮活動力均有不同程度的提高,灌注液組和催產(chǎn)素組顯著高于空白對照組(P<0.01),而促孕散組與空白組間的差異不顯著。當(dāng)各試驗組藥物增加到0.4 mL時,各組子宮活動力繼續(xù)提高,灌注液組和催產(chǎn)素組仍顯著高于空白對照組(P<0.01)。當(dāng)藥物量增加到0.6 mL時,灌注液組、促孕散組子宮活動力仍有提高趨勢,而催產(chǎn)素組子宮活動力明顯降低。各組數(shù)值均顯著高于空白組(P<0.01)。當(dāng)藥物量增加到0.8 mL時,灌注液組的子宮活動力略有增強(qiáng),顯著高于空白組和促孕散組(P<0.01)。

表3 各組藥物對家兔離體子宮活動力的影響Tab.3 Effects of different drug on motoricity of the uterus of rabbit in vitro

2.4 各組藥物對家兔在體子宮運(yùn)動的影響

由表4可知,各試驗組分別加入劑量為0.2 mL時,相較空白對照組,3組的收縮頻率、收縮幅度及子宮活動力均有不同程度提高,灌注液組的收縮頻率顯著高于空白組(P<0.05),收縮幅度和子宮活動力都極顯著高于空白組(P<0.01),而促孕散組的收縮頻率和收縮幅度與空白組的相比較,差異均不顯著。

表4 各組藥物對家兔在體子宮的影響Tab.4 Effects of different drug on the uterus of rabbit in vivo

3 討論

1)通過家兔離體及在體子宮試驗,初步探索了促孕灌注液的促孕效果,試驗結(jié)果表明該灌注液對子宮收縮頻率、收縮幅度及子宮活動力均有明顯的作用,且均高于傳統(tǒng)的促孕散水煎劑,這證明經(jīng)過劑型改進(jìn)后的灌注液促孕效果更顯著。

2)在離體子宮試驗中,隨著灌注液用量的增大,子宮收縮頻率、收縮幅度及子宮活力3個指標(biāo)均明顯提高,當(dāng)用藥量增加到0.4 mL時,變化最明顯,而當(dāng)用藥量增加到0.6 mL時,離體子宮的收縮幅度呈下降趨勢,到0.8 mL時,其子宮收縮幅度和收縮頻率均下降,下降量低于縮宮素,由此可以推測灌注液的促孕效果較縮宮素持久。促孕散組的子宮收縮頻率變化趨勢與灌注液組相似,子宮收縮幅度隨著藥量增加逐漸增大,但2個指標(biāo)數(shù)值均小于灌注液組和縮宮素組,因此可推測,灌注液組對離體子宮的影響高于促孕散組。

3)在在體子宮試驗中,從所測數(shù)據(jù)可以看出,在體試驗的子宮收縮幅度及頻率與離體試驗的相近,但子宮活動力明顯高于離體子宮,這可能是由于在體子宮仍與家兔體內(nèi)其他器官有接觸,使其在體子宮運(yùn)動受到了影響,且由于該試驗用藥量的限制,沒有更全面地觀測到藥物用量與其作用效果的關(guān)系,這將在今后進(jìn)行進(jìn)一步研究。

4)該復(fù)方主要由淫羊藿、益母草、補(bǔ)骨脂等組成。淫羊藿、益母草、補(bǔ)骨脂等都具有雌激素樣作用,能改善微循環(huán)[8],增強(qiáng)子宮平滑肌的興奮性[9]。而作為復(fù)方君藥之一的益母草可使離體子宮的不規(guī)則自發(fā)收縮變成規(guī)律收縮,并增大收縮幅度,作用可維持?jǐn)?shù)小時,且具有量效關(guān)系[5];益母草水提液和醇提浸膏對豚鼠、兔及狗在體子宮有直接的興奮作用,使子宮收縮頻率加快、張力增加、振幅增大[10],而同時淫羊藿中的成分有能降低子宮收縮頻率的作用[8],從而使子宮運(yùn)動更加協(xié)調(diào)地進(jìn)行。

4 結(jié)論

綜上所述,該復(fù)方促孕灌注液對家兔子宮具有良好、合理的調(diào)節(jié)作用,這是該藥發(fā)揮功效的一個重要方面。

[1]中國獸藥典委員會.中華人民共和國獸藥典[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2000.

[2]胡元亮.中藥治療母畜某些不孕癥及其機(jī)理研究[D].南京:南京農(nóng)業(yè)大學(xué),1999.

[3]祁生旺,劉俊平,王建民,等.奶牛卵巢疾病治療新方法的比較試驗[J].內(nèi)蒙古畜牧科學(xué),1999(4):20-21.

[4]徐叔云,卞如濂,陳修,等.藥理實(shí)驗方法學(xué)[M].3版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2003.

[5]唐祖年,梁成欽,覃文科,等.棕葉花提取物對動物離體子宮的興奮作用[J].時珍國醫(yī)國藥,2008,19(5):1139-1141.

[6]陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2000.

[7]張晴,羅俊,黃能慧.婦科再造丸對正常和妊娠大鼠在體及離體子宮平滑肌收縮的影響[J].貴陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2005,5(30):410-412.

[8]孔祥峰,胡元亮,孫峻嶺,等.新促孕液及其加味方和組分藥對家兔離體子宮運(yùn)動的影響[J].中國畜牧獸醫(yī),2006,3(33):51-53.

[9]苗彥霞,胡錫琴,張婳.二色補(bǔ)血草對麻醉大鼠在體子宮活動的影響[J].陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2009,1(2):38-39.

[10]郭世寧,佟恒敏,王學(xué)農(nóng).中西藥復(fù)方制劑宮炎清對家兔離體和在體子宮活動的影響[J].中國獸醫(yī)雜志,2004,40(6):40-41.

Effects of Traditional Chinese Medicine Prescription Fertility-Promoting Intrauterine Infusion Liquid on Hystera Movement of the Domestic Rabbit

TANG Lirong1,LI Bingqi2,SHAO Huijuan1,SUN Ping2,GU Xinli1
(1 Animal science and technology Department,Shihezi University,Shihezi 832003;2 ChemistrY and Chemical Engineering Department,Shihezi University,Shihezi 832003)

S858.237.2

A

1007-7383(2010)04-0432-04

2010-01-19

唐利容(1983-),女,碩士生,專業(yè)方向為中草藥制劑開發(fā)與應(yīng)用;e-mail:tanglirong@stu.shzu.edu.cn。

谷新利(1963-),男,教授,博士生導(dǎo)師,從事中草藥制劑開發(fā)與應(yīng)用方面研究;e-mail:xlgu@shzu.edu.cn。