侯冬巖，回瑞華，李鐵純，刁全平，魏 威，劉曉媛

(鞍山師范學(xué)院化學(xué)系，遼寧 鞍山 114007)

高效液相色譜法對(duì)綠茶中茶多酚含量的測(cè)定

侯冬巖，回瑞華，李鐵純，刁全平，魏 威，劉曉媛

(鞍山師范學(xué)院化學(xué)系，遼寧 鞍山 114007)

采用高效液相色譜法測(cè)定綠茶中茶多酚的含量。在色譜柱為Kromasil C18、流動(dòng)相為乙酸:甲醇:N,N-二甲基甲酰胺:水=1:1:40:58(V/V)、色譜柱溫30℃、進(jìn)樣量10μL、檢測(cè)器為紫外檢測(cè)器、檢測(cè)波長(zhǎng)280.0nm的色譜條件下對(duì)綠茶中茶多酚含量進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果表明：回歸方程為Y=1×10-7X－0.0036(r=0.9995)，方法變異系數(shù)小于3.04%，回收率為99.16%～100.60%；6種綠茶樣品茶多酚含量為62.07～110.86mg/g，說明產(chǎn)地不同，綠茶中茶多酚的含量相差較大。本方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，適合綠茶中茶多酚含量的分析。

綠茶；高效液相色譜法；茶多酚；測(cè)定

綠茶作為不發(fā)酵茶，保留了茶葉最原有的化學(xué)成分；綠茶主要含有茶多酚、咖啡堿、糖類、黃酮類化合物等[1-5]。茶多酚又叫茶單寧、茶鞣質(zhì)，是茶葉中酚類及其衍生物的總稱。茶多酚具有很強(qiáng)的抗氧化能力，其抗氧化能力可達(dá)L-抗壞血酸的100倍。現(xiàn)代科學(xué)研究認(rèn)為人體衰老的原因在于人體的細(xì)胞在代謝過程中連續(xù)不斷地產(chǎn)生具有高度活性的自由基和細(xì)胞自身的抗氧化酶及超氧化物歧化酶(SOD)不斷消除作用的失衡，使自由基濃度過剩，茶多酚具有很強(qiáng)的清除人體自由基的作用，是極強(qiáng)的消除有害自由基的天然物質(zhì)[6-16]。綠茶中含有豐富的茶多酚，通常采用國(guó)標(biāo)法即酒石酸亞鐵比色法進(jìn)行測(cè)定茶葉中茶多酚的含量，但酒石酸亞鐵比色法存在操作步驟繁瑣、費(fèi)時(shí)等不足。本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法測(cè)定綠茶中茶多酚的含量，測(cè)得的茶多酚含量與國(guó)標(biāo)法測(cè)得的茶多酚含量比較基本一致。高效液相色譜法測(cè)定綠茶中茶多酚含量，具有靈敏度高、分

析時(shí)間短、操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，為綠茶中茶多酚含量測(cè)定方法的建立提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

綠茶樣品(浙江龍井、福建綠螺、陽羨雪芽、西鄉(xiāng)特炒、廣東綠茶、極峰綠茶) 遼寧生物技術(shù)科學(xué)股份有限公司。甲醇(色譜純)、冰乙酸、乙酸乙酯、N,N-二甲基甲酰胺均為分析純；茶多酚標(biāo)準(zhǔn)品(綠茶提取茶多酚混合物) 上海衍勝實(shí)業(yè)集團(tuán)；二次蒸餾水。

Waters 1525-2996-tcm 液相色譜儀 美國(guó)Waters公司；TU036紫外-可見分光光度計(jì) Varian公司；KQ-250B型超聲波清洗器 昆山市超聲波儀器有限公司；Kromasil C18(4.6mm×250mm，5μm)色譜柱 瑞典Akzo Nobel公司。

1.2 方法

1.2.1 樣品前處理

將綠茶樣品粉碎，過0.45mm篩，得綠茶樣品粉末備用。

1.2.2 樣品儲(chǔ)備液的制備

分別稱取粉碎的綠茶樣品1.00g于50mL錐形瓶中，加入10mL沸水，加塞。在沸水浴中浸提20min，然后立即減壓抽濾，濾渣重復(fù)提取一次，合并濾液。濾液用氯仿萃取(氯仿:茶湯=1:1)3次。取氯仿萃取后的水層用乙酸乙酯萃取(乙酸乙酯:水=1:1)3次，乙酸乙酯層在55℃減壓濃縮，濃縮液定容到50mL容量瓶中，得樣品儲(chǔ)備液，待用。

1.2.3 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

將質(zhì)量濃度0.8mg/mL茶多酚標(biāo)準(zhǔn)溶液，用紫外-可見光譜儀從波長(zhǎng)210～400nm掃描。在波長(zhǎng)為280.0nm時(shí)茶多酚的吸光度最大，因此選擇280.0nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

1.2.4 色譜條件

色譜柱：Kromasil C18；流動(dòng)相：乙酸:甲醇:N,N-二甲基甲酰胺:水=1:1:40:58(V/V)；色譜柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10μL；檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器；檢測(cè)波長(zhǎng)：280.0nm。

2 結(jié)果與分析

2.1 茶多酚標(biāo)準(zhǔn)品和樣品色譜圖

圖1 茶多酚標(biāo)準(zhǔn)品的HPLC色譜圖Fig.1 HPLC chromatogram of tea polyphenol standard

圖2 浙江龍井茶的HPLC色譜圖Fig.2 HPLC chromatogram of tea polyphenols from Zhejiang Longjing tea

采用1.2.4節(jié)高壓液相色譜條件測(cè)得茶多酚標(biāo)準(zhǔn)品與樣品的色譜圖如圖1～7所示。由圖1～7可知，可以采用HPLC法對(duì)綠茶中茶多酚進(jìn)行定量分析。

圖3 福建綠螺茶的HPLC色譜圖Fig.3 HPLC chromatogram of tea polyphenols from Fujian Lvluo tea

圖4 陽羨雪芽茶的HPLC色譜圖Fig.4 HPLC chromatogram of tea polyphenols from Yangxian Xueya tea

圖5 西鄉(xiāng)特炒茶的HPLC色譜圖Fig.5 HPLC chromatogram of tea polyphenols from Xixiang Techao tea

圖6 廣東綠茶的HPLC色譜圖Fig.6 HPLC chromatogram of tea polyphenols from Guangdong green tea

圖7 極峰綠茶的HPLC色譜圖Fig.7 HPLC chromatogram of tea polyphenols from Jifeng green tea

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

準(zhǔn)確稱取茶多酚的標(biāo)準(zhǔn)品20mg于50mL的小燒杯中，用少量乙酸乙酯溶解后，最后定容到25mL容量瓶中，作為茶多酚標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。分別精確移取0.7、1.3、1.9、2.5、3.1、3.7mL于10mL容量瓶中，然后用乙酸乙酯定容。分別通過0.45μm濾膜過濾。進(jìn)樣量為10μL，以積分峰面積為橫坐標(biāo)，茶多酚質(zhì)量濃度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為Y=1×10-7X－0.0036，相關(guān)系數(shù)r=0.9995，說明茶多酚在0.0560～0.296mg/mL范圍內(nèi)，峰面積與質(zhì)量濃度呈良好線性關(guān)系，可按標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行定量分析。

2.3 樣品中茶多酚含量的測(cè)定

從1.2.2節(jié)儲(chǔ)備液中吸取0.1mL，稀釋到50mL，在1.2.4節(jié)的色譜條件下每個(gè)樣品進(jìn)樣3次，求出3次的積分峰面積的平均值，計(jì)算各樣品的茶多酚含量，結(jié)果見表1。6種綠茶樣品茶多酚含量為62.07～110.86mg/g。

表1 樣品中茶多酚的含量Table 1 Content of polyphenols in green teas

2.4 精密度實(shí)驗(yàn)

將1.2.2節(jié)的樣品儲(chǔ)備液稀釋成6個(gè)不同質(zhì)量濃度的測(cè)定液，每個(gè)測(cè)定液在同一色譜條件下進(jìn)樣9次，計(jì)算該方法的精密度，結(jié)果如表2所示。

表2 方法精密度Table 2 Precision test results of the method

2.5 回收率實(shí)驗(yàn)

按照1.2.2節(jié)配制樣品液，添加3個(gè)質(zhì)量濃度水平(0.02、0.04、0.06mg/mL)的標(biāo)準(zhǔn)液，上機(jī)測(cè)定，測(cè)定該方法的回收率如表3所示。

表3 方法回收率Table 3 Recovery of the method

3 結(jié) 論

采用高效液相色譜法測(cè)定6種綠茶樣品的茶多酚的含量。紫外光譜選擇280.0nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。該方法的變異系數(shù)小于3.04%，回收率為99.16%～100.6%。測(cè)得的茶多酚含量與國(guó)標(biāo)法測(cè)得的茶多酚含量比較基本一致。該法準(zhǔn)確、靈敏、快速、簡(jiǎn)便、專屬性強(qiáng)，可作為綠茶中茶多酚含量的定量測(cè)定方法。6種綠茶樣品茶多酚含量為62.07～110.86mg/g，說明產(chǎn)地不同，綠茶中茶多酚的含量相差較大。

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HPLC Determination of Polyphenols in Green Tea

HOU Dong-yan，HUI Rui-hua，LI Tie-chun，DIAO Quan-ping，WEI Wei，LIU Xiao-yuan
(Department of Chemistry, Anshan Normal University, Anshan 114007, China)

The polyphenol contents in green tea were determined by high performance liquid chromatography method, using the mobile phase consisting of acetic acid, methyl alcohol, N,N- dimethylformamide and warter (1:1:40:58, V/V). The column temperature was 30 ℃, and the detection wavelength was 280.0 nm. The regression equation obtained was Y=1×10-7X－0.0036(r =0.9995). The coefficient of variation was less than 3.04%, and the recovery was 99.16%－100.60%. The result indicates that the proposed method is simple , accurate and feasible for determination of polyphenols in the green teas.

green tea；HPLC；polyphenols；determination

O657.32

A

1002-6630(2010)24-0305-03

2010-06-10

遼寧省教育廳科學(xué)技術(shù)基金項(xiàng)目 (20331079)

侯冬巖(1962—)，男，教授，碩士，主要從事天然功能食品科學(xué)研究。E-mail：houdongyan2010@163.com