黃 靜，荀冬雪，常 興

（遼寧工程技術(shù)大學(xué)理學(xué)院，遼寧阜新123000）

褐菇多糖對(duì)衰老小鼠模型的抗衰老作用

黃 靜，荀冬雪，常 興

（遼寧工程技術(shù)大學(xué)理學(xué)院，遼寧阜新123000）

通過(guò)建立D-半乳糖致衰老小鼠模型，研究了褐菇多糖的抗衰老作用。采用跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)、耐缺氧實(shí)驗(yàn)及耐寒實(shí)驗(yàn)觀測(cè)了小鼠學(xué)習(xí)記憶能力、抗應(yīng)激能力的變化。測(cè)定了小鼠血清乙酰膽堿酯酶（AchE）、過(guò)氧化脂質(zhì)（LPO）和腦中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、B型單胺氧化酶（MAO-B）指標(biāo)變化。結(jié)果表明，褐菇多糖可顯著提高D-半乳糖所致衰老小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力及抗應(yīng)激能力（p＜0.01），顯著增加其血清AchE及腦SOD（p＜0.01）活性，顯著降低血清LPO、腦MDA和MAO-B（p＜0.01）水平。褐菇多糖對(duì)D-半乳糖致衰老小鼠具有抗衰老作用。

褐菇，多糖，D-半乳糖，抗衰老

衰老是生物隨著時(shí)間的推移自發(fā)的必然過(guò)程，它是復(fù)雜的自然現(xiàn)象，表現(xiàn)為結(jié)構(gòu)和機(jī)能衰退，適應(yīng)性和抵抗力減退。目前，隨著科學(xué)技術(shù)的騰飛，抗衰老研究也有了很大的發(fā)展。褐菇是歐美市場(chǎng)最暢銷的食用菌名貴品種，除具備一般蘑菇所具有的高蛋白、低脂肪、低膽固醇特點(diǎn)外，還具有提高人體免疫力、防癌抗癌、保肝護(hù)肝、美容駐顏等作用［1］，但褐菇多糖是否具有抗衰老作用尚未見(jiàn)報(bào)道。因此擬制作有臨床價(jià)值的亞急性衰老動(dòng)物模型，再用褐菇多糖進(jìn)行實(shí)驗(yàn)性治療，以研究褐菇多糖延緩衰老的機(jī)理。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

昆明種小鼠180只 體重19±2g，雌雄各半，大連醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心；D-半乳糖 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；褐菇多糖 本實(shí)驗(yàn)室自制，水提醇沉，Sevage法去蛋白，DEAE-纖維素離子交換柱及SephadexG-100層析柱純化；AchE、LPO、SOD、MDA、MAO-B試劑盒 南京建成生物工程研究所。

UV754紫外可見(jiàn)分光光度計(jì) 北京天美生物公司；WX-2型小鼠電光刺激條件反射跳臺(tái) 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 動(dòng)物分組與給藥［2-3］小鼠60只，隨機(jī)分成6小組：分別為正常組（1）、模型對(duì)照組（2）、低劑量褐菇多糖組（3）、中劑量褐菇多糖組（4）、高劑量褐菇多糖組（5）、陽(yáng)性對(duì)照組（6）。除正常組外，其余各組120mg/kg每日頸背皮下注射D-半乳糖，連續(xù)40d，致亞急性衰老模型，正常組注射等量0.9%生理鹽水。造模同時(shí)分別灌胃給予低、中、高劑量褐菇多糖組褐菇多糖50、100、150mg/kg·d，陽(yáng)性對(duì)照組給予維生素E 20mg/kg·d，空白對(duì)照組及衰老模型給予生理鹽水20mL/kg·d。

1.2.2 小鼠學(xué)習(xí)記憶能力（跳臺(tái)法［4］） 將小鼠放入跳臺(tái)儀中適應(yīng)5min后，輕放于平臺(tái)上，當(dāng)小鼠從跳臺(tái)上跳下四肢接觸銅柵時(shí)，即給予40V交流電刺激，記錄通電后其跳至安全臺(tái)上的潛伏期，并記錄5min內(nèi)的觸電次數(shù)（錯(cuò)誤次數(shù)），以此作為學(xué)習(xí)成績(jī)。24h后進(jìn)行測(cè)試，將小鼠置平臺(tái)上，記錄其第一次跳下受電擊的時(shí)間（潛伏期）及其3min內(nèi)受電擊的次數(shù)（錯(cuò)誤次數(shù)）以此作為記憶功能評(píng)價(jià)的指標(biāo)。測(cè)試時(shí)若小鼠停留在平臺(tái)上超過(guò)3min，其潛伏期以180s計(jì)。

表1 褐菇多糖對(duì)D-半乳糖致衰老小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響

1.2.3 小鼠血清AchE、LPO，腦SOD、MDA、MAO-B測(cè)定［5-6］小鼠跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)后眼眶取血并分離血清，參照試劑盒說(shuō)明書測(cè)定血清AchE活性、LPO含量。小鼠取血后處死取腦，置勻漿器中，加入預(yù)冷生理鹽水制成10%（g/mL）的腦勻漿，按試劑盒說(shuō)明書測(cè)定SOD和MAO-B活性、MDA的含量。

1.2.4 小鼠抗應(yīng)激能力

1.2.4.1 耐缺氧實(shí)驗(yàn)［7］另取60只小鼠，分組及給藥同1.2.1。每組各取小鼠10只，將各組小鼠每只分別置于裝有20g鈉石灰的250mL的廣口瓶?jī)?nèi)，瓶蓋周圍涂凡士林封閉，觀察小鼠因缺氧而窒息死亡時(shí)間。以小鼠呼吸停止為判斷死亡標(biāo)準(zhǔn)，記錄小鼠的存活時(shí)間，實(shí)驗(yàn)在26±1℃進(jìn)行。

1.2.4.2 耐寒實(shí)驗(yàn)［8］再取60只小鼠，分組及給藥同1.2.1。將小鼠置于-20℃低溫冰箱中，記錄該寒冷條件下小鼠的存活時(shí)間。

1.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 全部數(shù)據(jù)以均數(shù) ±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用SPSS13.0以單因素方差分析。

2 結(jié)果與討論

2.1 褐菇多糖對(duì)D-半乳糖致衰老小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響

結(jié)果表明，D-半乳糖已對(duì)衰老模型組小鼠學(xué)習(xí)記憶功能造成損害，而褐菇多糖能改善D-半乳糖引起的學(xué)習(xí)記憶功能損害，且效果隨劑量增加而增強(qiáng)（結(jié)果見(jiàn)表1）。

2.2 褐菇多糖對(duì)D-半乳糖致衰老小鼠血清AchE、LPO、腦SOD、MDA、MAO-B各指標(biāo)的影響

結(jié)果表明，褐菇多糖能增加D-半乳糖所致衰老小鼠血清AchE及腦SOD活性，降低血清LPO和腦MDA含量及MAO-B活性，并且隨褐菇多糖劑量的增加，效果更加明顯（結(jié)果見(jiàn)表2、表3）。

表2 褐菇多糖對(duì)D-半乳糖致衰老小鼠血清AchE、LPO的影響

表3 褐菇多糖對(duì)D-半乳糖致衰老小鼠腦SOD、MDA、MAO-B的影響

2.3 褐菇多糖對(duì)D-半乳糖致衰老小鼠抗應(yīng)激能力的影響

結(jié)果表明，褐菇多糖能增加D-半乳糖所致衰老小鼠耐常壓缺氧及耐寒能力，并且隨褐菇多糖劑量的增加，效果更加明顯（結(jié)果見(jiàn)表4）。

表4 褐菇多糖對(duì)D-半乳糖致衰老小鼠抗應(yīng)激能力的影響

3 結(jié)論

衰老模型組與正常組相比，學(xué)習(xí)記憶及抗應(yīng)激能力，血清AchE及腦SOD活性極顯著下降（P＜0.01），血清LPO、腦MDA含量和MAO-B活性極顯著上升（P＜0.01），說(shuō)明造模成功。而服用褐菇多糖組與衰老模型組相比，學(xué)習(xí)記憶及抗應(yīng)激能力、血清AchE及腦SOD活性極顯著上升（P＜0.01），血清LPO、腦MDA含量和MAO-B活性極顯著下降（P＜0.01），提示褐菇多糖通過(guò)調(diào)節(jié)抗脂質(zhì)過(guò)氧化及中樞膽堿神經(jīng)系統(tǒng)，使機(jī)體的各項(xiàng)生命體征得到改善，從而起到延緩衰老的作用。

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Anti-aging action of polysaccharide from portabella on the model of aging mice

HUANG Jing，XUN Dong-xue，CHANG Xing
（College of Science，Liaoning Technical University，F(xiàn)uxin 123000，China）

Anti-aging action of polysaccharide from portabella was studied through the model of aging mice induced by D-galactose.The variation of learning and memory ability，anti irritability of mice were observed by step down test，cold-resistant test and hypoxia tolerance test.AchE and LPO in serum of mice，SOD and MDA and MAO-B in brain of mice were observed.The results showed learning and memory ability and anti irritability were notably enhanced（p＜0.01），AchE in serum and SOD in brain were notably increased（p＜0.01），LPO in serum and MDA and MAO-B in brain were notably reduced（p＜0.01）.Polysaccharide from portabella has the effect of anti-aging action on aging mice induced by D-galactose.

portabella；polysaccharide；D-galactose；anti-aging

TS201.1

A

1002-0306（2010）12-0326-03

2009-11-13

黃靜（1978-），女，講師，主要從事天然產(chǎn)物提取及抗衰老的研究。

遼寧工程技術(shù)大學(xué)優(yōu)秀青年基金資助（09-272）。