張超峰,沈建軍

(浙江美保龍生物工程有限公司,浙江金華321017)

酸美酵素是由α-甘露聚糖肽、復(fù)合醋酸桿菌、酵母、芽孢桿菌益生菌、小肽和酶等組成。主要成分α-甘露聚糖肽是從經(jīng)基因修飾的α-溶血性鏈球菌33#菌株的深層發(fā)酵培養(yǎng)液中提取的具有多種生物活性的一種多糖物質(zhì)。主要作用于骨髓、脾臟等免疫器官和實(shí)質(zhì)性器官,在人醫(yī)上多用來抗腫瘤以及增強(qiáng)免疫力,在畜、禽上主要用來提高免疫力,促進(jìn)消化吸收等。

2008年4～7月,筆者在福建某3 000頭母豬規(guī)模豬場專門針對保育階段的40日齡小豬,添加不同劑量的酸美酵素,通過測定試驗(yàn)周期末始個體均重差、料肉比、發(fā)病率等研究生長性能的改善;通過測定免疫球蛋白(IgG)、紅細(xì)胞數(shù)、超氧化物歧化酶(SOD)活性、豬瘟抗體水平來分析酸美酵素在提高小中豬免疫力方面的作用。

1 材料

1.1 試驗(yàn)地點(diǎn) 福建某生產(chǎn)狀況正常的3 000頭母豬規(guī)模豬場。

1.2 試驗(yàn)材料 酸美酵素是由浙江美保龍生物工程有限公司提供,批次20080319,主要成分α-甘露聚糖肽含量為5%。所有參與試驗(yàn)的小中豬均為“杜×長×大”三元雜交的起始個體均重在11.3～12.3 kg之間的小豬,由豬場提供。

試驗(yàn)所需藥品、器材除豬瘟正向間接血凝抗原、陰性和陽性血清購自中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所外,其余由美保龍生物研究所提供。

1.3 試驗(yàn)飼糧 所有參與試驗(yàn)的小中豬飼糧根據(jù)試驗(yàn)要求統(tǒng)一配制,均參照美國NRC(1998版)豬營養(yǎng)需要配合而成。其中,6%龍卷風(fēng)小中豬系列預(yù)混料由浙江大飛龍動保集團(tuán)提供,飼糧配方見表1。

表1 試驗(yàn)飼糧配方

2 方法

選取960頭個體健康、生長良好、發(fā)育整齊的健康“杜×長×大”小豬,個體均重 11.3～12.3 kg之間。疫苗免疫程序試驗(yàn)組與對照組相同,試驗(yàn)分為4組,每組 240頭,即試驗(yàn) A組、試驗(yàn)B組、試驗(yàn) C組和對照組。

試驗(yàn)開始前預(yù)喂5 d,試驗(yàn)周期為40 d。在預(yù)試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,各組分別飼喂含酸美酵素0.2%(試驗(yàn)A 組)、0.4%(試驗(yàn)B組)、0.6%(試驗(yàn)C 組)比例的飼料,所有組均為自由采食飲水。試驗(yàn)初末稱重、記錄飼料使用量、發(fā)病情況,同時在試驗(yàn)起始、中期、末期前腔靜脈竇采血,進(jìn)行相關(guān)檢測。

2.1 實(shí)驗(yàn)室檢測地點(diǎn) 浙江美保龍生物新技術(shù)研究所。

2.2 生長性能測定 試驗(yàn)小豬均在試驗(yàn)正式開始的第1天隨機(jī)分組,并稱重,到第40天再次稱重。同時記錄飼養(yǎng)過程中的飼料使用量,試驗(yàn)周期內(nèi)的各組發(fā)病率和死亡率。

2.3 免疫力測定 在第1天、第20天、第40天隨機(jī)抽樣采血,每組 30頭,每頭 5mL,其中 2.5 mL全血,2.5mL用來制備血清。利用免疫比濁法測定豬的免疫球蛋白。紅細(xì)胞計(jì)數(shù)采用試管稀釋法：用沙利氏吸血管吸取20μL全血吹入含有4mL紅細(xì)胞稀釋液的試管底部,吸、吹數(shù)次后混勻,用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板在顯微鏡下計(jì)數(shù)并計(jì)算。

2.4 豬瘟抗體水平的測定 所以參與試驗(yàn)豬在出生后25日齡首免豬瘟弱毒活疫苗,60日齡進(jìn)行二免。試驗(yàn)開始時(40日齡)、20 d時(60日齡)前、40 d時(80日齡)分別檢測,采用正向血凝試驗(yàn)。具體操作步驟如下：即在96孔血凝板上,每孔加入50 μL稀釋液,每排第1孔加入待檢血清50μL,遞比稀釋待檢血清至血清濃度為1∶512,最后50μL丟棄。再在每孔加入抗原診斷液25μL,置于濕盒中25℃孵育1.5～3 h,判定結(jié)果。

2.5 血清超氧化物歧化酶活性測定 利用黃嘌呤氧化酶法測定,SOD檢測試劑盒和紫外分光光度計(jì)測定SOD活性,參照試劑盒使用說明進(jìn)行。

2.6 數(shù)據(jù)分析 試驗(yàn)結(jié)果使用SPSS 15.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

3 結(jié)果與分析

3.1 生長性能測定結(jié)果 從表2可以看出,添加不同劑量的酸美酵素,試驗(yàn)B、C組的日增重分別比對照組提高59.46 g(P＜0.05)和81.98 g(P＜0.01),但B、C組間差異不明顯;料肉比和發(fā)病率分別降低0.19(P＜0.05)和0.27(P＜0.05)、12.5(P＜0.01)和12.92(P＜0.01),B、C組間差異不明顯。不同試驗(yàn)組與對照組相比,各組間的日均耗料量未見明顯差異(P＞0.05)。添加酸美酵素的各組死亡率均明顯低于對照組?？紤]到使用成本,試驗(yàn)B組0.4%的酸美酵素添加量較為合適。

表2 添加不同劑量酸美酵素對仔豬生長性能影響的測定結(jié)果

3.2 免疫調(diào)節(jié)因子測定結(jié)果 見表3。

表3 添加不同劑量酸美酵素對仔豬免疫調(diào)節(jié)因子的測定結(jié)果

從表3可以看出,試驗(yàn)初始測定的免疫球蛋白水平并無差異,當(dāng)試驗(yàn)進(jìn)行到20 d時,試驗(yàn)B組與對照組相比IgG水平較高,差異明顯(P＜0.05),但其他各組間未見明顯差異。到試驗(yàn)進(jìn)行的第40天,試驗(yàn)組免疫球蛋白的測定水平均比對照組的要高,差異明顯(P＜0.05)。可見,短期使用酸美酵素的免疫效果并不明顯,連續(xù)使用1個月以上,對仔豬的免疫力提升見到明顯效果。

從不同采血時間測得的紅細(xì)胞數(shù)目來看,試驗(yàn)進(jìn)行到20 d時試驗(yàn)組與對照組相比較紅細(xì)胞數(shù)均有顯著提高(P＜0.05),但試驗(yàn)組間差異不明顯(P＞0.05)。這表明酸美酵素有增加紅細(xì)胞,提高免疫容量的作用[1],但是0.2%～0.6%的添加量沒有差異。當(dāng)試驗(yàn)進(jìn)行到40 d時,試驗(yàn)組紅細(xì)胞數(shù)雖然仍有增加,試驗(yàn)組間仍不明顯(P＞0.05),與對照組相比差異極顯著(P＜0.01)。40 d時試驗(yàn)組所測得的紅細(xì)胞水平與20 d時相比未見明顯差異,這表明當(dāng)酸美酵素使用一段時間后能夠穩(wěn)定機(jī)體免疫系統(tǒng),自體調(diào)節(jié)免疫容量的平衡,防止免疫紊亂現(xiàn)象的發(fā)生。

試驗(yàn)進(jìn)行到第20天時,各試驗(yàn)組間的超氧化物歧化酶活性與對照組相比變化差異顯著(P＜0.05);試驗(yàn)進(jìn)行到第40天時,各試驗(yàn)組間的超氧化物歧化酶活性與對照組相比變化差異顯著(P＜0.05);試驗(yàn)組間20 d時與40 d時相比較差異顯著。這表明隨著使用酸美酵素時間的延長,SOD活性在進(jìn)一步增強(qiáng),從而刺激機(jī)體器官的生長發(fā)育,迅速進(jìn)行代謝。

3.3 豬瘟抗體水平的測定結(jié)果 見表4。

表4 豬瘟抗體水平的測定合格率 (%)

從試驗(yàn)檢測結(jié)果來看,25日齡仔豬豬瘟弱毒苗首免效果并不好,試驗(yàn)組與對照組均在43%左右波動。當(dāng)試驗(yàn)進(jìn)行到20 d時(60日齡2免前),發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)組的豬瘟抗體水平均有提升;對照組豬瘟抗體水平在下降(P＞0.05),試驗(yàn)組與對照組相比差異顯著(P＜0.05)。當(dāng)試驗(yàn)進(jìn)行到40 d時,試驗(yàn)組與對照組相比差異極顯著(P＜0.01)。

4 討論

4.1 試驗(yàn)結(jié)果表明,酸美酵素在改善仔豬生產(chǎn)性能方面的效果明顯。0.4%和0.6%的添加量對提高仔豬日增重、降低死亡率和發(fā)病率比0.2%的添加量有更為明顯的效果,同時降低了料肉比,提高了飼料報酬。

4.2 酸美酵素在提升免疫力方面需要時間較長,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,提升免疫球蛋白水平至少需要1個月以上。要連續(xù)使用不少于40 d,才能有效降低死淘率,控制在5%左右。當(dāng)然,科學(xué)合理的飼養(yǎng)管理操作對豬群整體水平的影響不可忽略,即使使用再好的藥物,但管理跟不上依然不會取得較好的效果。

4.3 紅細(xì)胞自身具有攜氧、運(yùn)輸氣體的功能外,還具有識別、粘附、殺傷抗原、清除循環(huán)免疫復(fù)合物和病原體、參與免疫調(diào)控等多種重要免疫功能。本試驗(yàn)進(jìn)行20 d和40 d時,試驗(yàn)A、B、C組的紅細(xì)胞數(shù)均比對照組高,差異明顯。這表明酸美酵素通過提升紅細(xì)胞數(shù)量增加了機(jī)體免疫容量,間接提升了組織器官的免疫功能。

超氧化物歧化酶就是正常組織細(xì)胞中存在的抗氧化酶,它能夠滅活自由基,具有保護(hù)細(xì)胞的功能。

試驗(yàn)結(jié)果表明：40日齡仔豬飼喂不同劑量的酸美酵素,在試驗(yàn)0～40 d過程中,豬血清內(nèi)SOD含量一直在不斷升高,與對照組相比,試驗(yàn)經(jīng)20 d時差異顯著(P＜0.05),達(dá)到40 d時差異極顯著(P＜0.01),但試驗(yàn)組間差異不明顯。從外觀上看,試驗(yàn)豬只精神活躍,主要是因?yàn)轶w內(nèi)各器官組織的細(xì)胞在α-甘露聚糖肽作用下活化能力加強(qiáng),組織代謝旺盛引起的,這也是試驗(yàn)組死淘率較低(5%左右)的原因,而對照組仔豬的精神狀況一般,死淘率超過10%。

4.4 在筆者實(shí)際工作過程中,發(fā)現(xiàn)很多規(guī)模場豬瘟抗體實(shí)際檢測水平均達(dá)不到合格標(biāo)準(zhǔn)。免疫不合格產(chǎn)生的原因可能是獸醫(yī)操作不規(guī)范、疫苗使用不合理以及應(yīng)激和飼養(yǎng)管理不善造成的。使用酸美酵素以后發(fā)現(xiàn)不僅提高了豬瘟免疫合格率(74%～85%),而且延緩了抗體水平下降速度,對保證豬群的穩(wěn)定,提高豬群有效生產(chǎn)力發(fā)揮出重要作用。

5 結(jié)語

添加不同劑量的酸美酵素對仔豬的生長性能和免疫調(diào)節(jié)有明顯的改善作用,其中0.4%～0.6%的添加量比0.2%的添加量效果更好。

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