李 永,王志玲,郝二軍

(1.河南教育學(xué)院化學(xué)系,河南鄭州 450046;2.河南師范大學(xué)化學(xué)與環(huán)境科學(xué)學(xué)院,河南新鄉(xiāng) 453007)

拉米夫定中有機(jī)溶劑殘留量的頂空氣相色譜法測(cè)定

李 永1,王志玲1,郝二軍2

(1.河南教育學(xué)院化學(xué)系,河南鄭州 450046;2.河南師范大學(xué)化學(xué)與環(huán)境科學(xué)學(xué)院,河南新鄉(xiāng) 453007)

建立了拉米夫定中有機(jī)溶劑甲醇和丙酮?dú)埩袅康拿?xì)管頂空氣相色譜分析法.殘留溶劑甲醇和丙酮的檢測(cè)限分別為3.4μg/L和2.3μg/L,線性關(guān)系良好 (r均大于 0.999),平均回收率分別為 101.1%和100.9%.該方法測(cè)量操作簡(jiǎn)單,結(jié)果靈敏、準(zhǔn)確,重現(xiàn)性好,適用于拉米夫定中殘留有機(jī)溶劑的測(cè)定.

拉米夫定;有機(jī)溶劑殘留量;頂空氣相色譜法;測(cè)定

拉米夫定(Lamivudine)商品名為賀普丁,化學(xué)名為(2R-順式)-4-氨基 -1-(2-羥甲基 -1,3-氧硫雜環(huán)戊 -5-基)-1H-嘧啶 -2-酮,其結(jié)構(gòu)式如圖 1.

圖1 拉米夫定的結(jié)構(gòu)式

拉米夫定是一種核苷類似物,對(duì)乙型肝炎病毒 (HBV)有特異的抗病毒活性.它通過(guò)抑制病毒DNA的合成來(lái)迅速而強(qiáng)有力地抑制 HBV的復(fù)制,其抑制作用持續(xù)于整個(gè)治療過(guò)程.該藥可以顯著改善肝臟的壞死炎癥性病變、減輕或阻止肝臟纖維化的發(fā)展,并使血清轉(zhuǎn)氨酶降至正常,主要用于乙肝、乙型肝炎病毒復(fù)制的慢性乙型肝炎病人的治療[1-3].在拉米夫定的合成及純化過(guò)程中,廣泛使用了丙酮、甲醇作溶劑,其中甲醇屬第二類溶劑,即應(yīng)限制使用的溶劑,因此必須建立有效的方法對(duì)其中的有機(jī)溶劑殘留加以控制.頂空進(jìn)樣氣相色譜分析是一種非常簡(jiǎn)便的分析方法,可直接把樣品放入頂空瓶中分析而免除樣品的前處理步驟,且干擾少,圖譜簡(jiǎn)單,適用于液體或固體樣品中痕量低沸點(diǎn)化合物的分析[4].本文建立了頂空毛細(xì)管氣相色譜法,測(cè)定拉米夫定中有機(jī)溶劑甲醇和丙酮的殘留量,操作簡(jiǎn)便,重現(xiàn)性好,結(jié)果準(zhǔn)確可靠[5-7].

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

美國(guó)Varian CP 3800氣相色譜儀;火焰離子化檢測(cè)器 (F ID).

藥品拉米夫定由河南天方藥業(yè)股份有限公司提供,批號(hào)分別為:100201、100202、100203;甲醇、丙酮等試劑均為分析純(天津市化學(xué)試劑一廠).

1.2 色譜條件

色譜柱:PEG-20M(35 m×0.32 mm,0.18μm);進(jìn)樣口溫度:150℃;檢測(cè)器溫度:220℃;載氣:高純 N2;流速:0.8 mL/ min;程序升溫:起始溫度 50℃保持 2 min,升溫速度為 40℃/min,升至 100℃,保持 5 min,然后升至 200℃結(jié)束.

1.3 頂空條件

分別取標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣品溶液 3.0 mL于 10 mL頂空瓶中,用 PTFE/硅橡膠密封墊密封,于 70℃恒溫,平衡時(shí)間 40 min,然后用氣密針抽取 1.0 mL頂空瓶氣相部分,注入色譜儀進(jìn)行分析.

1.4 溶液制備

標(biāo)準(zhǔn)溶液配制:精密稱取甲醇和丙酮樣品適量,置于 100 mL容量瓶中,加蒸餾水溶解并稀釋至刻度,搖勻,作為儲(chǔ)備液(各組分濃度均約為 5 mg/mL).精密量取上述混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液適量,置于 5 mL容量瓶中,依次用蒸餾水稀釋并定容,得一系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液.

樣品溶液配制:用分析天平準(zhǔn)確稱取拉米夫定原藥 1.0 g,置于 10 mL容量瓶中,加蒸餾水溶解并定容,即得每 1 mL中約含 100 mg的溶液作為供試液.

2 結(jié)果與討論

2.1 方法的線性關(guān)系和檢測(cè)限實(shí)驗(yàn)

準(zhǔn)確量取不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液 3 mL于 10 mL頂空瓶中,加蓋密封,在上述色譜條件下分別進(jìn)行頂空進(jìn)樣分析,甲醇和丙酮的標(biāo)準(zhǔn)色譜圖見圖 2.

以甲醇和丙酮的質(zhì)量濃度 (C)為橫坐標(biāo),峰面積(A)為縱坐標(biāo)進(jìn)行回歸計(jì)算,得各有機(jī)溶劑的線性回歸方程,結(jié)果見表 1.由表 1可見,甲醇和丙酮在0.1～0.3μg/mL范圍內(nèi),峰面積與溶劑質(zhì)量濃度的線性關(guān)系良好.按信噪比S/N為 3∶1計(jì),測(cè)得甲醇和丙酮的最低檢測(cè)濃度分別為 3.4μg/L和 2.3μg/L.

2.2 精密度實(shí)驗(yàn)

精密量取標(biāo)準(zhǔn)溶液,進(jìn)行頂空分析,平行進(jìn)樣 6次,計(jì)算得各溶劑濃度與其峰面積比值的RSD分別為 0.7%和 0.8%.

2.3 加樣回收率實(shí)驗(yàn)

精密稱取 0.1 g拉米夫定樣品(批號(hào) 100201),置于頂空瓶中,準(zhǔn)確量取并加入標(biāo)準(zhǔn)品溶液 3 mL,加蓋密封,搖勻.在上述色譜條件下頂空進(jìn)樣測(cè)定,得各溶劑甲醇和丙酮的平均回收率分別為 101.1%和 100.9%.

2.4 拉米夫定樣品測(cè)定

準(zhǔn)確稱取拉米夫定樣品 0.1 g,置于頂空瓶中,精密加入 3 mL蒸餾水使樣品完全溶解,搖勻.在上述色譜條件下,頂空進(jìn)樣測(cè)定,根據(jù)峰面積計(jì)算樣品中各個(gè)有機(jī)溶劑的殘留量,結(jié)果見表 2.

圖2 丙酮和甲醇的典型 GC色譜圖

表 1 殘留溶劑回歸方程與線性范圍

表2 拉米夫定中有機(jī)溶劑殘留量檢查

檢測(cè)結(jié)果表明 3個(gè)批號(hào)樣品中甲醇均未檢出,丙酮的含量分別為 687 mL/m3、629 mL/m3、658 mL/m3,均低于人用藥品注冊(cè)技術(shù)要求國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì)(I CH)規(guī)定的殘留限度 0.3%和 0.5%.

3 結(jié)論

本文建立了抗病毒藥物拉米夫定中殘留有機(jī)溶劑甲醇和丙酮的頂空氣相色譜測(cè)定方法,在選定的氣相色譜條件下,結(jié)果重現(xiàn)性好、靈敏度高,方法簡(jiǎn)便易行,可對(duì)生產(chǎn)過(guò)程進(jìn)行有效監(jiān)控,并對(duì)優(yōu)化生產(chǎn)工藝、進(jìn)一步提高產(chǎn)品質(zhì)量具有指導(dǎo)意義.

[1] 張國(guó),曾繁典,王天才.抗乙肝新藥拉米夫定的研究進(jìn)展[J].中國(guó)新藥雜志,2001,10(2):96-99.

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[3] 張兆穎.拉米夫定臨床研究進(jìn)展[J].抗感染藥學(xué),2005,2(1):4-6.

[4] 陳蘇偉,潘勇琴,蔡紀(jì)青.中、美、英三國(guó)藥典中有機(jī)溶劑殘留量測(cè)定法的比較[J].海峽藥學(xué),2006,18(5):83-84.

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Determ ination of ResidualOrganic Solvents in Lam ivudine by Headspace Gas Chromatography

L I Yong1,WANG Zhi-ling1,HAO Er-jun2

(1.Department of Chem istry,Henan Institute of Education,Zhengzhou450046,China;2.College of Chem istry and Environm ental Sciences,Henan Nor mal University,Xinxiang453007,China)

A headspace gas chromatographymethod for dete rmination of residual organic solvents-methyl alcohol and acetone in Lamivudine was established.The detection l imits were 3.4μg/L for methyl alcohol and 2.3μg/L for acetone.The calibration curves of two solventswere linear(r>0.999).The average recoveries of methyl alcohol and acetone were 101.1%and 100.9%,respectively.Thismethod is s imple,accurate and sensitive with good reproducibility.It could be used for the dete rmination of the residual organic solvents in Lamivudine.

Lamivudine;residual organic solvents;headspace gas chromatography;dete rmination

O623

A

1007-0834(2010)04-0029-02

10.3969/j.issn.1007-0834.2010.04.010

2010-10-12

國(guó)家自然科學(xué)基金 (21042004);河南省教育廳自然科學(xué)研究項(xiàng)目 (2010B150008)

李 永(1979—),男,河南沈丘人,河南教育學(xué)院化學(xué)系副教授,博士,研究方向:手性合成和超分子化學(xué).