許星鴻, 閻斌倫, 鄭家聲, 邵營澤, 徐加濤, 徐國成, 周 盟, 周 黎

(1. 淮海工學(xué)院 江蘇省海洋生物技術(shù)重點建設(shè)實驗室, 江蘇 連云港 222005; 2. 中國海洋大學(xué) 海洋生命學(xué)院, 山東 青島, 266003)

日本蟳血細(xì)胞及血液生化指標(biāo)的研究

許星鴻1, 閻斌倫1, 鄭家聲2, 邵營澤1, 徐加濤1, 徐國成1, 周 盟1, 周 黎1

(1. 淮海工學(xué)院 江蘇省海洋生物技術(shù)重點建設(shè)實驗室, 江蘇 連云港 222005; 2. 中國海洋大學(xué) 海洋生命學(xué)院, 山東 青島, 266003)

以光鏡和電鏡觀察了日本蟳(Charybdis japonica)血細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu), 分析了各類血細(xì)胞的大小、數(shù)量比例及功能, 并測定了不同發(fā)育時期及饑餓狀態(tài)的日本蟳血清主要生化指標(biāo)。結(jié)果表明： 日本蟳血細(xì)胞可分為4種類型, 從小到大依次為： 無顆粒細(xì)胞、小顆粒細(xì)胞、中間型細(xì)胞和大顆粒細(xì)胞; 其核質(zhì)比分別為： 53.23%、33.64%、24.50%和19.45%; 數(shù)量比例分別為： 4.78%、42.69%、36.57%和15.96%。雌蟹血細(xì)胞密度顯著高于雄蟹, 而細(xì)胞大小在不同性別之間差異不顯著。吞噬能力從強到弱依次為中間型細(xì)胞、大顆粒細(xì)胞和小顆粒細(xì)胞, 無顆粒細(xì)胞無吞噬能力。鰓中血細(xì)胞表現(xiàn)出更為活躍的吞噬作用。生長期雌蟹血清中總蛋白、葡萄糖和總膽固醇含量均高于雄蟹, 成熟期雄蟹血清總蛋白含量高于雌蟹。雌蟹抱卵后, 血清中維持較高的總蛋白和總膽固醇水平。饑餓 7 d的日本蟳血細(xì)胞密度及血清總蛋白、葡萄糖、總膽固醇含量明顯下降, 谷丙轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶等酶活性顯著降低, 而肌酐和尿素氮含量明顯增加, 日本蟳血清中含有球蛋白。

日本蟳(Charybdis japonica); 血細(xì)胞; 血液生化指標(biāo); 吞噬能力; 饑餓

甲殼動物缺乏脊椎動物的特異性免疫機制, 其免疫防御反應(yīng)是通過血細(xì)胞的吞噬、包掩、凝集和溶菌等作用于病原體, 同時血細(xì)胞受此激發(fā)而釋放出多種免疫因子于血漿中, 在兩者共同作用下達到免疫效果[1-2]。因此, 甲殼動物血淋巴的研究對于養(yǎng)殖生產(chǎn)中的病理診斷及病害防治工作具有重要的參考意義。日本蟳(Charybdis japonica)隸屬于甲殼綱(Crustacea)梭子蟹科(Portunidae), 俗稱靠山紅、石閘蟹等, 廣泛分布于中國各海區(qū)[3], 為經(jīng)濟價值較高的海產(chǎn)蟹類[4]。關(guān)于日本蟳血液學(xué)的研究已有一些報道, 趙青松等[5]對 東海產(chǎn)日本蟳血細(xì)胞的形態(tài)及數(shù)量做了初步研究, 張紅霞等[6]分析了重金屬離子對日本蟳血淋巴抗氧化酶活力的影響, 樊廷俊等[7]分 離純化了日本蟳血藍(lán)蛋白, 并研究了脂多糖等免疫促進劑對日本蟳酚氧化酶活性及血細(xì)胞的影響[8]。本實驗 采用光鏡和電鏡對日本蟳血細(xì)胞進行了細(xì)致觀察, 分析了各類血細(xì)胞的大小、數(shù)量比例及功能,并對不同發(fā)育時期及饑餓狀態(tài)的日本蟳血清主要生化指標(biāo)進行了測定, 以豐富該領(lǐng)域的基礎(chǔ)資料,為日本蟳的組織病理、病害防治及繁殖生理等研究提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

實驗用日本蟳分批購買于連云港海產(chǎn)品市場：生長期雌、雄各 10只, 取材于 3月上旬, 體質(zhì)量(69.53±8.47)g; 成熟期雌、雄各60只, 取材于5月上旬, 體質(zhì)量(110.28±13.39)g; 抱卵蟹 10只, 取材于 5月下旬, 體質(zhì)量(93.72±7.15)g。發(fā)育分期方法另文發(fā)表[9]。采用生態(tài)閉路循環(huán)養(yǎng)殖系統(tǒng)暫養(yǎng)7 d后用于實驗, 鹽度25, pH8.0, 水溫15℃, 連續(xù)充氣, 一日投喂 2次鮮活貝類。饑餓實驗組選取成熟期日本蟳, 雌雄各半, 除不投喂外, 其他暫養(yǎng)條件相同。下述實驗材料未標(biāo)明發(fā)育時期者均取自成熟期。

1.2 方法

1.2.1 血樣采取與計數(shù)

用無菌注射器先吸取 10%海水甲醛[5]0.2 mL,再從日本蟳第三步足基關(guān)節(jié)處抽取等量血液, 充分混勻后, 用血球計數(shù)板計數(shù), 計算出血細(xì)胞密度。雌蟹、雄蟹及饑餓實驗組測定數(shù)均為10只。

1.2.2 血涂片制作、觀察與測量

以抗凝劑和血液的等量混合液按常規(guī)法涂片。采用 ACD-福爾馬林混合液[10]作抗凝劑, 瑞-姬混合染色液[11]染色10 min, 血涂片于Nikon E1000顯微鏡下觀察、攝影。雌、雄蟹測定數(shù)均為10只, 每只蟹制作血涂片3張。每張涂片隨機選取約200個血細(xì)胞進行分類計數(shù)[10], 對不同的血細(xì)胞隨機選取20個,進行細(xì)胞體和細(xì)胞核的測量。核質(zhì)比按下列公式計算： 核質(zhì)比＝(平均核長徑×平均核短徑)/(平均細(xì)胞長徑×平均細(xì)胞短徑)。

1.2.3 超微結(jié)構(gòu)觀察

電鏡觀察材料取自成熟期雌蟹。取血方法同1.2.1, 抽取0.5 mL血液, 注入已裝有0.5 mL 4%戊二醛的離心管中, 輕搖使其混勻, 2 000 r/min離心5 min, 棄上清, 再加入新的4%戊二醛預(yù)固定(4℃),1%鋨酸后固定, 梯度乙醇脫水, Epon812環(huán)氧樹脂包埋。LKB-Nova超薄切片機切片, 醋酸鈾和檸檬酸鉛雙染色, 日本電子JEM-1200EX型透射電鏡觀察、攝影。另取鰓, 切成 1 mm3組織塊, 制作超薄切片, 透射電鏡觀察血細(xì)胞在機體器官內(nèi)的自然生理狀態(tài)。

1.2.4 血細(xì)胞吞噬能力的研究

實驗用大腸桿菌(Escherichia coli)和節(jié)桿菌(Arthrobacter)由淮海工學(xué)院微生物實驗室提供。將菌種分別接種在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上, 30℃培養(yǎng)48 h, 無菌生理鹽水洗下后, 配成濃度為108個/mL的菌懸液,4℃貯存?zhèn)溆?。取雌、雄蟹?只, 以ACD為抗凝劑等比分別從各蟹取0.5 mL血液后混合均勻。取1 mL該混合液, 加入100 μL菌懸液, 混勻后于30℃孵育1 h。常規(guī)涂片, 鏡檢計數(shù)。吞噬率＝有吞噬作用的血細(xì)胞數(shù)/隨機選取的100個血細(xì)胞×100%, 各類血細(xì)胞吞噬率＝有吞噬作用的各類血細(xì)胞數(shù)/隨機選取的100個有吞噬作用的血細(xì)胞總數(shù)×100%。

1.2.5 血液生化指標(biāo)測定

分別對生長期、成熟期、已抱卵和饑餓7 d的日本蟳血液生化指標(biāo)進行測定, 各期測定數(shù)均為10只(饑餓實驗組為雌、雄各5只)。用無菌注射器于每只蟹各抽取1.5～2 mL血液, 4℃放置1 h后, 5 000 r/min冷凍離心15 min, 取上清液, 采用BECKMAN CX5全自動生化分析儀測定。

1.3 數(shù)據(jù)處理

各實驗均重復(fù)3次, 實驗數(shù)據(jù)用“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。采用SPSS16.0軟件進行數(shù)據(jù)處理, 并進行t檢驗或單因子方差分析(One-way ANOVA), LSD多重比較和Duncan檢驗。

2 結(jié)果

2.1 日本蟳的血細(xì)胞密度

成熟期雌性日本蟳血細(xì)胞密度為(3.75±0.56)×107個/mL, 顯著高于雄蟹的(2.48±0.43)×107個/mL,平均(3.11±0.81)×107個/mL。饑餓7 d后, 雌、雄蟹的血細(xì)胞密度均明顯下降, 分別為(1.33±0.36)×107個/mL 和(0.79±0.24)×107個/mL, 平均(1.06±0.41)×107個/mL。

2.2 日本蟳血細(xì)胞的分類及形態(tài)

通過對光鏡和透射電鏡所觀察到的圖像分析,根據(jù)細(xì)胞質(zhì)中顆粒的有無、大小、折光性、染色特性及核質(zhì)比, 將日本蟳血細(xì)胞分為4種類型： 無顆粒細(xì)胞、小顆粒細(xì)胞、中間型細(xì)胞和大顆粒細(xì)胞。

2.2.1 無顆粒細(xì)胞

光鏡下無顆粒細(xì)胞多為圓形或橢圓形, 核質(zhì)比大, 平均可達 53.23%。一薄層淡藍(lán)色細(xì)胞質(zhì)圍繞著藍(lán)紫色細(xì)胞核, 胞質(zhì)中沒有明顯顆粒, 但含有一些深藍(lán)色絮狀物(圖1-1)。

電鏡觀察可見, 細(xì)胞核內(nèi)異染色質(zhì)呈斑塊狀,緊貼核膜內(nèi)側(cè), 核仁1～2個、體積較大。胞質(zhì)中有少量體積較小的線粒體和液泡, 游離核糖體含量豐富(圖 1-2)。

2.2.2 小顆粒細(xì)胞

光鏡下觀察, 小顆粒細(xì)胞以橢圓形為主, 也見有近三角形。細(xì)胞質(zhì)比無顆粒細(xì)胞略多, 核質(zhì)比平均為 33.64%。胞質(zhì)中有少量藍(lán)色小顆粒, 沒有折光性(圖 1-3)。

超微結(jié)構(gòu)顯示, 細(xì)胞質(zhì)中的顆粒形狀各異, 有圓形、橢圓形、棒狀及啞鈴狀等; 大小不等, 多介于0.1～0.3 μm。小顆粒電子密度較低。胞質(zhì)中有較多的液泡, 線粒體體積較大。異染色質(zhì)也多靠近核膜分布, 但沒有無顆粒細(xì)胞的集中(圖1-4)。

2.2.3 中間型細(xì)胞

光鏡下中間型細(xì)胞體積較大, 多為橢圓形, 也有呈梨形、梭形。細(xì)胞核常偏于細(xì)胞一側(cè), 且核質(zhì)比較小, 平均24.50%。細(xì)胞質(zhì)中既有較大的藍(lán)色顆粒,也有紅棕色的小顆粒, 多數(shù)顆粒具有折光性(圖1-5)。

圖1 日本蟳血細(xì)胞的光鏡及電鏡觀察Fig. 1 Hemocytes in crab Charybdis japonica under light and electron microscope

電鏡下觀察, 細(xì)胞質(zhì)中的顆粒數(shù)量比小顆粒細(xì)胞多, 大小從0.1～0.9 μm不等, 大、小顆粒的數(shù)量比例相當(dāng)。胞質(zhì)中還含有豐富的線粒體、液泡及游離核糖體, 糙面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)主要分布在核外膜附近。核內(nèi)染色質(zhì)以常染色質(zhì)為主, 核仁1個、位置靠近核膜(圖1-6)。

2.2.4 大顆粒細(xì)胞

光鏡下觀察, 大顆粒細(xì)胞形態(tài)多樣, 有橢圓形、子彈形及不規(guī)則形。細(xì)胞核偏于細(xì)胞一側(cè), 平均核質(zhì)比僅 19.45%。細(xì)胞質(zhì)中的顆粒多數(shù)染成藍(lán)色, 體積大且折光性強, 也含有少量紅色小顆粒(圖1-7)。

超微結(jié)構(gòu)顯示, 細(xì)胞質(zhì)中的顆粒絕大多數(shù)在 0.5 μm以上, 最大顆粒長徑可達1.1 μm。其他特征類似于中間型細(xì)胞, 但胞質(zhì)中的液泡體積較大(圖1-8)。

2.2.5 鰓中的血細(xì)胞形態(tài)

鰓中的血細(xì)胞也能明顯分成上述 4種類型, 但與抽取外周血離心得到的血細(xì)胞相比, 除無顆粒細(xì)胞形態(tài)相似外, 3種有顆粒細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)均有一定差異。小顆粒細(xì)胞(圖 1-9)形狀不規(guī)則, 向四周伸出數(shù)個短小的偽足, 部分偽足中也包含著小顆粒; 核質(zhì)分布特點與前述相同, 但核形狀較不規(guī)則。中間型細(xì)胞(圖1-10)和大顆粒細(xì)胞(圖1-11)均伸出粗大的偽足, 進行著吞噬作用。這兩類細(xì)胞的胞質(zhì)中基本不含有前述的液泡, 但有體積較大的殘余體; 顆粒明顯增多, 尤其中間型細(xì)胞中的顆粒數(shù)量增加了近兩倍,占據(jù)了細(xì)胞大部分空間。

2.3 日本蟳血細(xì)胞的大小與數(shù)量比例

從表1可見, 日本蟳4種類型血細(xì)胞從小到大依次為： 無顆粒細(xì)胞、小顆粒細(xì)胞、中間型細(xì)胞和大顆粒細(xì)胞, 除了雄蟹無顆粒細(xì)胞的長徑明顯大于雌蟹之外, 細(xì)胞大小在不同性別之間差異不顯著。4類血細(xì)胞所占的數(shù)量比例從大到小依次為： 小顆粒細(xì)胞、中間型細(xì)胞、大顆粒細(xì)胞和無顆粒細(xì)胞, 雌蟹的小顆粒細(xì)胞明顯少于雄蟹, 而大顆粒細(xì)胞比雄蟹的多, 無顆粒細(xì)胞和中間型細(xì)胞數(shù)量比例的性別差異不顯著。

表1 日本蟳血細(xì)胞的大小與數(shù)量比例Tab. 1 The sizes and percentages of hemocytes in Charybdis japonica

2.4 日本蟳血細(xì)胞的吞噬能力

在血細(xì)胞和細(xì)菌體外孵育實驗中, 可以觀察到在細(xì)菌的刺激下, 日本蟳血細(xì)胞對細(xì)菌的吸附(圖1-12)、吞噬(圖1-13, 1-14)及血細(xì)胞之間的凝集現(xiàn)象(圖1-12, 1-15)。沒有觀察到無顆粒細(xì)胞的吞噬現(xiàn)象。

在30℃、1 h的反應(yīng)時間內(nèi), 日本蟳血細(xì)胞對大腸桿菌和節(jié)桿菌的菌懸液的吞噬率分別為62.33%和52.93%。以中間型細(xì)胞吞噬能力最強, 在所有發(fā)生吞噬作用的血細(xì)胞中, 對兩種菌懸液的吞噬率分別為54.87%和52.13%; 其次是大顆粒細(xì)胞, 吞噬率分別為 27.40%和 29.54%; 小顆粒細(xì)胞的吞噬能力相對較低, 吞噬率分別為17.73%和18.33%。

2.5 日本蟳的血液生化指標(biāo)

由表2可知, 日本蟳從生長期到成熟期, 血清中總蛋白、葡萄糖、總膽固醇、肌酐和尿酸等含量升高, 谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶活性增強, 而尿素氮含量減少, 堿性磷酸酶活性有所下降。在生長期, 雌蟹血清的總蛋白、葡萄糖和總膽固醇含量均高于雄蟹。當(dāng)發(fā)育至成熟期, 雄蟹血清的總蛋白含量反而高于雌蟹, 但雌蟹血清的葡萄糖和總膽固醇含量依然顯著高于雄蟹。雌蟹抱卵后, 血清中葡萄糖、甘油三酯、高密度脂蛋白含量顯著降低, 而總蛋白、低密度脂蛋白、肌酐含量升高。饑餓 7 d 的日本蟳血清總蛋白、葡萄糖、總膽固醇含量明顯下降, 谷丙轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶等酶活性顯著降低, 而肌酐和尿素氮含量明顯增加。

表2 不同性別和發(fā)育階段及饑餓7 d的日本蟳血液生化指標(biāo)Tab. 2 Blood biochemical indices of male and female at different development stages in Charybdis japonica and the effects of starvation(mean±S.D)

3 討論

3.1 日本蟳血細(xì)胞的類型、結(jié)構(gòu)與功能

目前對甲殼動物血細(xì)胞的分類方法主要有兩種：一種是分3類[12-14]－透明細(xì)胞(或無顆粒細(xì)胞)、半顆粒細(xì)胞(或小顆粒細(xì)胞)和顆粒細(xì)胞(或大顆粒細(xì)胞);另一種是分 4類[10,15]－無顆粒細(xì)胞、小顆粒細(xì)胞、中間型細(xì)胞和大顆粒細(xì)胞。趙青松等[5]通過顯微觀察,將東海產(chǎn)日本蟳的血細(xì)胞分成了無顆粒細(xì)胞、小顆粒細(xì)胞和大顆粒細(xì)胞 3種類型, 本研究認(rèn)為黃海產(chǎn)日本蟳的血細(xì)胞除了這 3類血細(xì)胞外, 還存在著一種中間型細(xì)胞, 其顆粒大小從0.1～0.9 μm不等, 分別與小顆粒細(xì)胞和大顆粒細(xì)胞中的顆粒相似, 同周凱等[10]對鋸緣青蟹及陸宏達等[15]對中華絨螯蟹的血細(xì)胞研究結(jié)論一致。

脊椎動物 B淋巴細(xì)胞在接觸抗原后, 會多次分裂并分化為漿細(xì)胞, 產(chǎn)生免疫球蛋白, 參與機體體液免疫[16]。陳平等[17]在研究對蝦時發(fā)現(xiàn)了類似細(xì)胞的存在, 稱之為“漿樣細(xì)胞”, 認(rèn)為其能合成原始的免疫球蛋白,具有體液免疫的萌芽。日本蟳無顆粒細(xì)胞“核質(zhì)比大”的特征類似于脊椎動物的淋巴細(xì)胞,同時又具有漿細(xì)胞的特點－細(xì)胞核內(nèi)異染色質(zhì)呈斑塊狀、核糖體豐富, 且缺乏吞噬能力, 其功能值得深入研究。

3類顆粒細(xì)胞均具有吞噬功能。從體外的血細(xì)胞和細(xì)菌孵育實驗結(jié)果看, 以中間型細(xì)胞吞噬能力最強, 其次是大顆粒細(xì)胞、小顆粒細(xì)胞的吞噬能力相對較低。小顆粒細(xì)胞伸出的偽足較短小, 說明其主要是吞噬較小的物質(zhì)。中間型細(xì)胞和大顆粒細(xì)胞的偽足粗大, 且胞質(zhì)內(nèi)含較多的液泡和消化殘體, 結(jié)構(gòu)特征與其較強的吞噬功能相符。

在細(xì)菌的刺激下, 可以觀察到日本蟳血細(xì)胞對細(xì)菌的吸附及血細(xì)胞凝集成團的現(xiàn)象。Smith等[18]認(rèn)為甲殼類動物的血細(xì)胞在未受到感染等刺激的情況下, 大多數(shù)免疫因子如抗細(xì)菌蛋白、酚氧化酶等在血細(xì)胞內(nèi)處于非活性狀態(tài), 受到感染等刺激后通過調(diào)節(jié)血細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的釋放, 使這些免疫因子激活,從而影響著血細(xì)胞團的形成和包裹的作用。日本蟳通過血細(xì)胞的凝集, 對細(xì)菌進行吸附、包裹和吞噬,使細(xì)菌得以清除,顯示了日本蟳血細(xì)胞具有的非特異性免疫功能。

與從步足基部取得的血細(xì)胞相比, 日本蟳鰓中的血細(xì)胞表現(xiàn)出更為活躍的吞噬作用。鰓作為呼吸器官, 鰓腔中的血竇與外界水環(huán)境只隔著一層上皮細(xì)胞, 極易受到水體中細(xì)菌等病原的侵襲, 所以鰓中血細(xì)胞較強的吞噬功能構(gòu)成了蟹體抗感染的重要防線。

3.2 日本蟳血液生化指標(biāo)

對甲殼動物血液生化指標(biāo)的研究報道較少。和三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)[19]相比, 日本蟳血清中的總蛋白、血糖和肌酐等含量較高, 酶活性較低, 兩者總膽固醇、尿素氮的含量相近。

血漿中總蛋白及白蛋白等指標(biāo)可反應(yīng)機體營養(yǎng)和代謝狀態(tài)[20]; 膽固醇是皮質(zhì)類激素和性激素的前體, 和機體物質(zhì)代謝、性腺發(fā)育密切相關(guān)[21]; 血糖水平則受棲息環(huán)境、活動性及餌料等多種因素的影響[22]。處于生長期的雌性日本蟳血清中總蛋白、葡萄糖和總膽固醇含量均高于雄蟹, 表明雌蟹性腺發(fā)育時, 機體的代謝比雄蟹旺盛, 且需要更多的營養(yǎng)物質(zhì), 這和卵母細(xì)胞發(fā)育、卵黃大量合成積累有關(guān)。發(fā)育至成熟期, 由于卵母細(xì)胞內(nèi)對蛋白質(zhì)的貯存,造成雄蟹血清的總蛋白含量反而高于雌蟹, 但雌蟹較高的血糖和總膽固醇含量可以保證其繁殖活動對能量的需求及較高的激素水平。日本蟳為分批產(chǎn)卵類型, 雌蟹抱卵后, 血清維持較高的總蛋白和總膽固醇含量可以給卵巢的進一步發(fā)育提供充足的營養(yǎng)來源。

中華絨螯蟹(Eriocheir sinensis)雌性血淋巴總蛋白水平成熟后會顯著下降[23], 而本研究發(fā)現(xiàn)雌性日本蟳成熟后的血清總蛋白會略有升高, 可能與種類差異有關(guān)。一般認(rèn)為甲殼動物體液不具有免疫球蛋白, 缺乏抗體介導(dǎo)的免疫反應(yīng)[2]。本實驗在日本蟳血清中測出了球蛋白, 三疣梭子蟹的血清中也發(fā)現(xiàn)有球蛋白[19]。隨著生長發(fā)育的進展, 日本蟳血清中球蛋白含量有一定升高, 其球蛋白特性及免疫機制有待于進一步研究。

3.3 饑餓對日本蟳血液的影響

日本蟳饑餓 7 d后, 血清總蛋白、球蛋白、葡萄糖、總膽固醇含量及血細(xì)胞密度等明顯下降, 谷丙轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶等酶活性亦顯著降低, 表明其代謝強度及免疫力均減弱。魚類饑餓后的血液生化指標(biāo)變化規(guī)律有一定差異, 奧利亞羅非魚(Oreochromis aureus)饑餓 1周后紅細(xì)胞、葡萄糖和甘油三酯含量下降顯著, 但血清總蛋白下降不明顯, 至饑餓2周后才顯著下降[24]; 而鱸魚(Lateolabrax japonicus)饑餓1周后的血清總蛋白甚至有所增加, 第2周回落, 至第4周才顯著下降[25]。這可能是因為魚類比蟹類貯存有較多的糖原和脂肪, 饑餓時動物首先動用的是血糖,然后是脂類, 最后是蛋白, 所以饑餓初期魚類的血清總蛋白含量沒有明顯下降。肌酐是肌酸和磷酸肌酸代謝最終產(chǎn)物, 其含量與肌肉活動量相關(guān)[20]。饑餓后的日本蟳血清中肌酐含量升高, 可能是其覓食活動增加所致。

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Hemocytes and blood biochemical characterization ofCharybdis japonica

XU Xing-hong1, YAN Bin-lun1, ZHENG Jia-sheng2, SHAO Ying-ze1, XU Jia-tao1,XU Guo-cheng1, ZHOU Meng1, ZHOU Li1
(1. Jiangsu Key Laboratory of Marine Biotechnology, Huaihai Institute of Technology, Lianyungang 222005, China;2. College of Marine Life Sciences, Ocean University of China, Qingdao 266003, China)

Jun., 26, 2010

Charybdis japonica; hemocyte; blood biochemical value; phagocytic capacity; starvation

In order to provide data for tissue pathology, disease control, and reproductive physiological research ofCharybdis japonica, this paper reported the hemocytes and the blood biochemical characterization ofCharybdis japonica. With light and electronic microscopes, four types of hemocytes, including agranular hemocyte (AG), small granular hemocyte (SG), intermediate granular hemocyte (IG) and large granular hemocyte (LG), were classified according to their granular existence, granular size, refractivity, staining characters, and nuclear-cytoplasmic ratio. The nuclear-cytoplasmic ratios were 53.23%(AG), 33.64%(SG), 24.50%(IG) and 19.45% (LG), respectively. Among these hemocytes, the percentages of AG, SG, IG and LG were 4.78%, 42.69%, 36.57%, and 15.96%, respectively. The female crab had higher density of hemocytes than the male, but there was no significant difference in cell size. The phagocytic capacity of hemocytes from strong to weak were IG, LG and SG. AG had no phagocytic capacity. The hemocytes in gill had big pseudopodia and abundant residual body suggesting they could be more active in phagorytosis. In the developing phase, the values of total protein(TP), glucose(GLU) and cholesterin(CHOL) of female were higher than those of male,but the male crabs in maturation had more TP than the female. After spawning, the female crabs could maintain high levels of TP and CHOL. After starvation for seven days, the values of density of hemocytes, TP, GLU,and CHOL decreased obviously and there were lower activities of alanine aminotransferase(ALT) and alkaline phosphatase(ALP) than before, but the levels of creatinine(CREA) and usea nitrogen(BUN) increased. Globin was found in the blood serum ofCharybdis japonica.

Q959.223

A

1000-3096(2011)08-0051-07

2010-06-26;

2011-08-21

江蘇省海洋生物技術(shù)重點建設(shè)實驗室開放課題(Z2007HS006); 江蘇省科技廳蘇北科技發(fā)展計劃項目(BN2010026)

許星鴻(1970-), 女, 江蘇省泰興人, 副教授, 碩士, 主要從事海洋動物發(fā)育生物學(xué)研究, 電話： 0518-85835092, E-mail：xhxu119@163.com

致謝：中國海洋大學(xué)海洋生命學(xué)院姜明老師和青島醫(yī)學(xué)院電鏡室譚金山老師對本工作給予大力支持和幫助, 謹(jǐn)致謝忱。

譚雪靜)