何選林， 王群英

(湖南省永州市藥品檢驗(yàn)所，湖南永州425100)

喉咽清口服液主要由土牛膝、馬蘭草、車前草、天名精等中藥組成，輔料為蔗糖、防腐劑，具有清熱解毒、利咽止痛的作用［1］。土牛膝中含有黃酮苷、氨基酸、有機(jī)酸、酚類、揮發(fā)油及生物堿等成分［2］，《中國藥典》2010版一部該品種采用高效液相色譜法測定喉咽清口服液中蛻皮甾酮，該方法提取時(shí)雜質(zhì)太多，影響蛻皮甾酮的分離，導(dǎo)致測定的含量偏低，本實(shí)驗(yàn)修改了提取的溶劑，該法簡單、快速、結(jié)果直觀。并通過生產(chǎn)廠家提供的6批樣品進(jìn)行了比較。結(jié)果表明改進(jìn)法準(zhǔn)確有效。

1 儀器與試藥

Waters高效液相色譜系統(tǒng)1525泵，2996紫外檢測器(美國)，Empowers工作站。蛻皮甾酮對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號11638-200402)，喉咽清口服液樣品(規(guī)格每支10 mL，為某公司生產(chǎn)的6批產(chǎn)品080605、080607、080608、080704、080706、080801);乙腈為色譜純、重蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱為Hypersil-ODS C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以乙腈-水(20 ∶80)為流動相;檢測波長為 248 nm;柱溫 室溫，進(jìn)樣量 20 μL。在此條件下［3］67，［4-9］，色譜圖見圖1，蛻皮甾酮的保留時(shí)間為7.8 min，理論塔板數(shù)按蛻皮甾酮計(jì)算為6 800。

圖1 高效液相色譜圖

2.2 對照品溶液制備 精密稱取蛻皮甾酮對照品30 mg，置50 mL的量瓶中，加乙醇適量，振搖使蛻皮甾酮溶解，并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液貯備液。

2.3 供試品溶液的制備 取本品25 mL，置具塞錐形瓶中，加正丁醇25 mL，超聲30 min，放冷后，濾過，用乙醇10 mL分?jǐn)?shù)次洗滌容器及殘?jiān)?，合并濾液和洗液蒸干，殘?jiān)右掖既芙獠⑥D(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，作為供試品溶液。

2.4 陰性對照溶液的制備 精密稱取處方中除土牛膝的細(xì)粉(約相當(dāng)于蛻皮甾酮3 mg)，置具塞錐形瓶中，加正丁醇25 mL，超聲30 min，放冷后，濾過，用乙醇10 mL分?jǐn)?shù)次洗滌容器及殘?jiān)?，合并濾液和洗液蒸干，殘?jiān)右掖既芙獠⑥D(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，作為陰性對照溶液。

2.5 線性關(guān)系考察 精密量取對照品溶液貯備液1、2、3、5、10 mL溶液分別置50 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(X)，峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，求得回歸方程:Y=7 680.2+674 256.4X，r=0.999 96，結(jié)果表明，當(dāng)進(jìn)樣量為 20 μL 時(shí)，蛻皮甾酮在12～120 μg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，呈良好的線性關(guān)系。

2.6 精密度考察 取2.2項(xiàng)下質(zhì)量濃度為60 μg/mL的對照品溶液，依法測定，記錄連續(xù)5次的峰面積，RSD為0.98%。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同份樣品按2.11項(xiàng)測定蛻皮甾酮5次，含蛻皮甾酮質(zhì)量濃度為62.4 μg/mL，RSD為0.66%;結(jié)果表明重復(fù)性好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同份樣品分別在0、4、8、12、16 h測定蛻皮甾酮，質(zhì)量濃度為59 μg/mL，RSD為0.61%;結(jié)果表明穩(wěn)定性好。

2.9 陰性對照試驗(yàn) 取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液按本實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)樣為20 μL，色譜圖見圖1，在本實(shí)驗(yàn)條件下陰性對照無干擾。

2.10 回收率試驗(yàn) 精密稱取已測定的同一批樣品9份，分別精密加入對照品適量，按2.3項(xiàng)制備樣品，依法測定回收率，結(jié)果見表1。

表1 樣品的回收率測定結(jié)果

2.11 樣品測定 取本品25 mL，置具塞錐形瓶中，加正丁醇25 mL，超聲30 min，放冷后，濾過，用乙醇10 mL分?jǐn)?shù)次洗滌容器及殘?jiān)?，合并濾液和洗液蒸干，殘?jiān)右掖既芙獠⑥D(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，作為供試品溶液。分別吸取供試品溶液與對照品溶液各20 μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖見圖1B，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算質(zhì)量濃度與法定方法質(zhì)量濃度［3］1159比較結(jié)果見表2。

表2 樣品測定結(jié)果(n=3)

3 討論

3.1 色譜條件的選擇 本實(shí)驗(yàn)選用了較為常用的C18柱和以乙腈-水(20∶80)為流動相;檢測波長為248 nm，得到良好的分離效果，且配置簡單。

3.2 檢測波長 經(jīng)紫外掃描蛻皮甾酮在247.6 nm處有最大吸收故選擇在248 nm測定。

3.3 溶劑的選擇 本測定，先采用法定方法只用乙醇稀釋，測定分離不太好，后采用甲醇、50%甲醇、50%乙醇及本法采用正丁醇提取，乙醇溶解。經(jīng)試驗(yàn)，本實(shí)驗(yàn)配制的溶液在16 h內(nèi)進(jìn)樣并無任何變化且分離好。

3.4 檢測濃度 根據(jù)線性范圍的計(jì)算，本實(shí)驗(yàn)選擇了60 μg/mL，在此質(zhì)量濃度條件下定量測定。

［1］國家食品藥品監(jiān)督管理局.WS3-036(Z-009)-2005(Z)咽清口服液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)［S］.2005.

［2］張丹雁.廣東土牛膝化學(xué)成分的初步研究［J］.中國民族民間醫(yī)藥雜志，1999，(4):232-234.

［3］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:2010年版一部［S］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

［4］劉志剛，鄧偉杰，孫維峰，等.HPLC測定泄?jié)岢苑街惺硎氃碥赵⑼懫ょ尥浚跩］.中成藥，2010，32(2):243-246.

［5］張翠英，梁生旺，張廣強(qiáng).不同產(chǎn)地牛膝中蛻皮甾酮的含量測定［J］. 中國藥學(xué)雜志，2001，36(10):699-700.

［6］宋閆軍，尚聰敏.牛膝及三妙丸中脫皮甾酮的薄層掃描測定［J］.河南中醫(yī)藥學(xué)刊，2000，15(6):9-10.

［7］張 英，韋 異，粟 暉，等.超聲提取反相高效液相色譜法測定牛膝中蛻皮甾酮［J］.光譜實(shí)驗(yàn)室，2002，19(5):668-671.

［8］李文莉，汪文濤，雷玉萍，等.RP-HPLC測定脈絡(luò)寧注射液中蛻皮甾酮的含量［J］.華西藥學(xué)雜志，2001，(16):382-383.

［9］劉 姣，周亞球，彭超懷.懷牛膝蛻皮甾酮的含量測定［J］.安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，24(3):43-44.