吳毅芳 周常義 蘇文金 張志剛 蘇國(guó)成

隨著食品安全引起的社會(huì)問題被廣泛關(guān)注，人們健康安全意識(shí)的逐步提高，抗生素、促生長(zhǎng)素等與日常飲食息息相關(guān)的添加劑的生產(chǎn)和使用備受爭(zhēng)議。在這種情況下，對(duì)綠色畜禽產(chǎn)品的大量需求促進(jìn)了微生態(tài)制劑在畜禽養(yǎng)殖過(guò)程中的應(yīng)用和相關(guān)新型制劑的開發(fā)生產(chǎn)。

本試驗(yàn)中使用的發(fā)酵制劑為復(fù)合L-色氨酸發(fā)酵微生態(tài)制劑，以枯草芽孢桿菌、多肽、蛋白酶、L-色氨酸、豆腐渣為主要成分，旨在實(shí)現(xiàn)豆腐渣、玉米漿等工業(yè)下腳料二次利用的同時(shí)，獲得既能平衡日糧氨基酸又具有益生效應(yīng)、生產(chǎn)成本較低的微生態(tài)制劑。本試驗(yàn)通過(guò)改變制劑在基礎(chǔ)日糧中的添加比例，考察該制劑對(duì)土雞生長(zhǎng)性能和非特異性免疫活性的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

復(fù)合L-色氨酸發(fā)酵微生態(tài)制劑（本實(shí)驗(yàn)室制得）；基礎(chǔ)日糧（直接從飼料店購(gòu)得適合雛雞食用的小雞飼料）；雞苗（從雞苗場(chǎng)購(gòu)得1日齡土雞120羽）；溶菌酶檢測(cè)試劑盒（南京建成公司購(gòu)得）；實(shí)驗(yàn)室常用檢測(cè)制劑。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)分組及飼喂方式

土雞苗分成4組，每組30羽。A組飼喂基礎(chǔ)日糧；B組飼喂95%的基礎(chǔ)日糧和5%發(fā)酵制劑混合物；C組飼喂90%的基礎(chǔ)日糧和10%發(fā)酵制劑混合物；D組飼喂85%的基礎(chǔ)日糧和15%發(fā)酵制劑混合物。

從2日齡開始在B、C、D 3組日糧中添加適量的發(fā)酵制劑直到7日齡，作為適應(yīng)期。

1.2.2 檢測(cè)方法

從7日齡開始對(duì)各組日糧按比例混合后飼喂，每日早晚飼喂兩次，每次飼喂時(shí)間為2 h，每日稱取各組日糧消耗量。8日齡、17日齡、27日齡時(shí)每組分別取樣6只進(jìn)行稱重、解剖試驗(yàn)。獲取各試驗(yàn)組的肝臟、小腸上段內(nèi)容物及糞便，對(duì)各組料肉比[1]、消化酶[2]、溶菌酶[3]、肝臟器官指數(shù)[4]、腸道及糞便中的大腸桿菌和乳酸桿菌[5]進(jìn)行比較。

1.2.3 測(cè)定指標(biāo)

1.2.3.1 料肉比

料肉比=每組飼料總消耗量/每組總增重量。

1.2.3.2 消化酶

消化酶主要針對(duì)腸道中蛋白酶和纖維素酶進(jìn)行檢測(cè)，取每個(gè)小腸上段內(nèi)容物0.5 g于50 ml離心管中，添加9.5 ml生理鹽水稀釋，置于37℃搖床150 r/min震蕩30 min后，參照Cüneyt Suzer[2]的方法進(jìn)行測(cè)定。

1.2.3.3 溶菌酶

詳見南京建成公司溶菌酶檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書。

1.2.3.4 肝臟器官指數(shù)

肝臟器官指數(shù)=肝臟重量/體重。

1.2.3.5 大腸桿菌及乳酸桿菌檢測(cè)

通過(guò)選擇性培養(yǎng)基（伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基和MC培養(yǎng)基）對(duì)以上兩種菌進(jìn)行活菌平板計(jì)數(shù)。小腸上段內(nèi)容物樣品以及糞便樣品的制法同1.2.3.2。

2 結(jié)果分析與討論

2.1 發(fā)酵制劑對(duì)土雞生產(chǎn)性能的影響（見表1）

表1 發(fā)酵制劑對(duì)土雞生產(chǎn)性能的影響

由表1可知，B、C、D 3個(gè)試驗(yàn)組的料肉比均比對(duì)照組A有所下降，階段二料肉比均與對(duì)照組差異顯著（P＜0.05）。階段一即8日齡到17日齡，由于肉雞羽毛尚未發(fā)育完全，需要消耗較多的能量以維持體溫，另外戶外養(yǎng)殖期間氣溫較低等因素導(dǎo)致階段一料肉比較高。階段二即18日齡到27日齡，由于肉雞羽翼逐漸豐滿，維持體溫所需能量相對(duì)較少，試驗(yàn)組逐漸適應(yīng)添加了發(fā)酵制劑的日糧口味和養(yǎng)殖環(huán)境以及發(fā)酵制劑促進(jìn)消化吸收作用逐步凸顯等原因，3個(gè)試驗(yàn)組階段二的料肉比均較階段一有所減少，其中B組下降最為顯著，為10.7%。未添加發(fā)酵制劑的對(duì)照組階段二的料肉比比階段一提高了9%。27日齡時(shí)，B、C、D 3組料肉比分別相對(duì)A組下降了19.4%、16.1%和15.5%。理論上，發(fā)酵制劑促消化吸收能力與枯草芽孢桿菌、蛋白酶、多肽、L-色氨酸等營(yíng)養(yǎng)成分相關(guān)，階段一3個(gè)試驗(yàn)組的料肉比相對(duì)對(duì)照組有所下降，說(shuō)明發(fā)酵制劑在促進(jìn)土雞消化吸收方面具有一定程度的滯后性。由此可推斷，蛋白酶、多肽、L-色氨酸等成分在提高日糧吸收利用率方面起一定的作用。但其后料肉比顯著降低，關(guān)鍵是由于枯草芽孢桿菌在腸道中的定植以及相關(guān)消化酶的分泌，促進(jìn)飼料中大分子的蛋白、纖維和脂肪在腸道中的再次分解和吸收，同時(shí)多肽促進(jìn)氨基酸吸收的協(xié)同作用進(jìn)一步提高了營(yíng)養(yǎng)成分的吸收率，從而導(dǎo)致料肉比的下降。

2.2 發(fā)酵制劑對(duì)土雞消化道能力的影響（見表2）

表2顯示在雛雞生長(zhǎng)的前27日齡，對(duì)照組腸道中的蛋白酶、纖維素酶酶活隨著日齡的增長(zhǎng)逐漸降低并趨于穩(wěn)定（總體上變化程度逐漸減?。＠碚撋显撝笜?biāo)將穩(wěn)定在一個(gè)適宜的水平直到生長(zhǎng)后期隨著動(dòng)物機(jī)能的衰退而進(jìn)一步降低。A組腸道蛋白酶活性27日齡時(shí)下降到8日齡36.6%，B、C、D 3組分別達(dá)到8日齡時(shí)的66.1%、79.6%、66.7%，蛋白酶的下降程度與對(duì)照組相比差異顯著（P＜0.05）。其中B、C兩組的蛋白酶下降程度不及A組的50%。階段一中，蛋白酶和纖維素酶主要來(lái)源于日糧。表2中17日齡的纖維素酶和蛋白酶數(shù)據(jù)反映出3個(gè)試驗(yàn)組與對(duì)照組蛋白酶活性差異顯著，3個(gè)試驗(yàn)組蛋白酶降低程度不及對(duì)照組，說(shuō)明日糧中的蛋白酶在胃酸性環(huán)境下具有一定程度的穩(wěn)定性，即通過(guò)胃消化酶的作用后仍具有活性，有效增加腸道中蛋白酶作用效果，促進(jìn)未完全分解的蛋白物質(zhì)的消化吸收。階段二中3個(gè)試驗(yàn)組的蛋白酶主要來(lái)自定植于腸道中的枯草芽孢桿菌的分泌和日糧供給。A、B、C、D 4組27日齡時(shí)纖維素酶活性分別是8日齡的42.9%、113.9%、90.7%和64.2%。階段二纖維素酶來(lái)自于定植后的枯草芽孢桿菌的分泌以及日糧的補(bǔ)充，導(dǎo)致B、C兩組纖維素酶活性有所提高，前者對(duì)纖維素酶活性的提高具有關(guān)鍵作用。D組纖維素酶和蛋白酶活性的下降，可能由于添加發(fā)酵制劑含量過(guò)高，一定程度上改變了蛋白質(zhì)、纖維素等營(yíng)養(yǎng)成分的平衡，纖維素?cái)z取量比對(duì)照組有所下降并超過(guò)某一臨界點(diǎn)導(dǎo)致了D組纖維素酶活性整體偏低。

表2 發(fā)酵制劑對(duì)土雞腸道消化能力的影響（U/g）

2.3 發(fā)酵制劑對(duì)土雞非特異免疫活性的影響（見表3）

表3 發(fā)酵制劑對(duì)土雞非特異免疫活性的影響

本試驗(yàn)中考察非特異性免疫力指標(biāo)為血清中溶菌酶含量和肝臟指數(shù)。表3中，對(duì)照組溶菌酶含量隨日齡的增加不斷提高，17日齡時(shí)各組溶菌酶含量分別達(dá)到8日齡的3.92倍、4.54倍、4.66倍和4.25倍，試驗(yàn)組和對(duì)照組差異顯著（P＜0.05）。27日齡時(shí)各組溶菌酶含量分別達(dá)到8日齡的4.25倍、4.64倍、4.67倍和4.61倍，試驗(yàn)組與對(duì)照組差異顯著（P＜0.05）。由此推測(cè)，發(fā)酵制劑的添加可提前激活機(jī)體非特異性免疫活性，使機(jī)體溶菌酶含量迅速達(dá)到穩(wěn)定閾值。表3中免疫器官指數(shù)即肝臟指數(shù)則隨日齡的增加不斷下降，27日齡時(shí)各組免疫器官指數(shù)分別為8日齡的65.7%、67.6%、70.5%和74.7%，試驗(yàn)組與對(duì)照組相比差異不顯著（P＞0.05）。綜上所述，試驗(yàn)組的非特異性免疫活性高于對(duì)照組，證明該發(fā)酵制劑有利于提高機(jī)體非特異性免疫力，可一定程度上促進(jìn)機(jī)體非特異性免疫力提前達(dá)到穩(wěn)定閾值。由階段一與階段二溶菌酶活性及免疫器官指數(shù)的變化程度可推測(cè)發(fā)酵制劑中的多肽是提高非特異性免疫的有效成分。多肽與枯草芽孢桿菌均能提高機(jī)體免疫力，但二者作用機(jī)理不同。目前關(guān)于二者作用機(jī)理的研究和探討還處于初步階段，未有成熟的理論體系和實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證說(shuō)明。多肽對(duì)于免疫力的提高作用可能與其參與體液循環(huán)有關(guān)，階段一由于雛雞個(gè)體較小，血液流量小，從日糧中吸收的多肽相對(duì)濃度較高，一定程度上加快了機(jī)體免疫力提高的速度。

2.4 發(fā)酵制劑對(duì)土雞腸道微生物菌群的影響（見表4）

表4 發(fā)酵制劑對(duì)土雞腸道微生物菌群的影響（×105CFU/g）

由表4可知，腸道中的大腸桿菌和乳酸桿菌數(shù)量隨日齡的增加逐漸減少。這可能與腸道長(zhǎng)度和質(zhì)量的增加有關(guān)，長(zhǎng)度的增長(zhǎng)使微生物的分布逐漸擴(kuò)散開，一定程度上降低了分布密度。另外，由于所取腸道為上段，接近胃部，隨著日齡的增長(zhǎng)，胃部和腸道上部消化能力的逐漸完善，腸道上端環(huán)境中存在的蛋白酶、酸堿消化液等均不利于微生物的生長(zhǎng)繁殖，故大腸桿菌和乳酸桿菌密度隨著日齡的增長(zhǎng)逐漸減小，理論上將趨于穩(wěn)定。糞便中的菌群首先來(lái)源于腸道，其次是空氣和環(huán)境。表4顯示糞便中的相關(guān)菌密度高于腸道上段，這是由于糞便中來(lái)自于腸道的菌群主要來(lái)自于腸道中段和下段，這些部位的菌密度由于腸道生存環(huán)境的改善而有所提高，高于腸上段菌群密度。表4中，試驗(yàn)組17 d、27 d B、C、D 3組的腸道和糞便中的大腸桿菌數(shù)均顯著低于對(duì)照組（P＜0.05)，而乳酸桿菌數(shù)則顯著高于A組（P＜0.05）。兩種菌群數(shù)量變化主要由于腸道中氧氣的變化，即枯草芽孢桿菌的定植及其需氧特性，降低了腸道中的氧氣濃度，促進(jìn)了乳酸桿菌的生長(zhǎng)，同時(shí)抑制了大腸桿菌。

3 結(jié)論

本試驗(yàn)考察了自制復(fù)合L-色氨酸微生態(tài)制劑對(duì)土雞生長(zhǎng)性能和非特異性免疫等生理活性的影響。通過(guò)試驗(yàn)既驗(yàn)證了復(fù)合L-色氨酸微生態(tài)制劑具有降低土雞料肉比、提高非特異性免疫、促進(jìn)腸道益生菌生長(zhǎng)等生理作用，也為該制劑日后生產(chǎn)實(shí)踐中粗蛋白、纖維素等相關(guān)比例的調(diào)整提供了依據(jù)，即粗蛋白濃度過(guò)高、纖維素濃度過(guò)低均可最終提高料肉比，降低經(jīng)濟(jì)效益。通過(guò)綜合比較，以添加5%制劑的混合日糧為最佳配方，該添加比例能平衡日糧中的氨基酸、顯著降低土雞的料肉比、提高非特異性免疫活性、有效促進(jìn)其腸道益生菌的生長(zhǎng)，滿足了微生態(tài)制劑對(duì)于提高生長(zhǎng)性能、提高經(jīng)濟(jì)效益的基本要求。今后可以其中L-色氨酸含量、多肽含量、枯草芽孢桿菌數(shù)為基準(zhǔn)，調(diào)整混合日糧中的粗蛋白、纖維素比例，以實(shí)現(xiàn)更高的經(jīng)濟(jì)效益。

[1] 吳健.微生態(tài)制劑代替抗生素對(duì)肉用仔雞生產(chǎn)性能影響的研究[J].中國(guó)家禽,2009,31(11):55-56.

[2] Cüneyt Suzer,Deniz ?oban,H.Okan Kamaci.Lactobacillus spp.bacteria as probiotics in gilthead sea bream(Sparus aurata,L.)larvae:Effects on growth performanceanddigestiveenzyme activities[J].Aquaculture,2008(280):140-145.

[3] Yanbo Wang,Ziqiang Tian,Jiangtao Yao,et al.Effect of probiotics,Enteroccus faecium,on tilapia(Oreochromis niloticus)growth performance and immune response[J].Aquaculture,2008(277):203-207.

[4] 李勃.枯草芽孢桿菌發(fā)酵豆粕生產(chǎn)大豆活性多肽的研究[D].南京農(nóng)業(yè)大學(xué),2006.

[5] 熊文,蔣哲峰,蔣云生,等.雙歧桿菌與乳酸桿菌在腎衰大鼠胃腸道不同部位的定植及其對(duì)小分子毒素的分解[J].中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2009,34(1):35-39.