田莉 辛娟

宮頸癌組織中Survivin表達(dá)及其對(duì)細(xì)胞增殖活性的影響

田莉 辛娟

宮頸腫瘤;增殖細(xì)胞核抗原;Survivin;免疫組織化學(xué)

宮頸癌是最常見的女性生殖系統(tǒng)腫瘤，其局部侵襲力強(qiáng)，其浸潤和轉(zhuǎn)移直接影響患者的治療和預(yù)后。增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)能反映細(xì)胞增殖活性。Survivin是迄今發(fā)現(xiàn)最強(qiáng)的凋亡抑制因子，研究表明Survivin與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)［1］。我們應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)宮頸癌組織中Survivin和PCNA基因的表達(dá)，為臨床治療及提高患者的生存率提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 取自鄭大一附院病理科2009年存檔的38例住院患者手術(shù)切除宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織石蠟標(biāo)本，術(shù)前均未接受放療和化療。年齡30～74歲，平均53歲。參照國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)1995年修訂的臨床分期標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰa期5例，Ⅰb期9例，Ⅱa期11例，Ⅱb期13例。其中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者25例，無轉(zhuǎn)移者13例。病理分化程度：高分化16例，中分化11例，低分化11例;另取10例正常宮頸組織作為對(duì)照。

1.2 Survivin和PCNA檢測(cè) 采用免疫組織化學(xué)SP法，SP試劑盒購于北京中山生物技術(shù)有限公司，用兔抗人Survivin多克隆抗體(武漢博士德生物工程有限公司)檢測(cè)Survivin的表達(dá)，PCNA單克隆抗體(Zymed公司產(chǎn)品)檢測(cè)PCNA的表達(dá)，嚴(yán)格按照說明書操作。已知陽性宮頸癌切片作為陽性對(duì)照，PBS緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照。結(jié)果判定：以細(xì)胞漿中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞，400倍鏡下計(jì)數(shù)500個(gè)細(xì)胞，≥10%為陽性，＜10%為陰性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行分析。計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)分析。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

PCNA免疫組化陽性細(xì)胞為胞核著色，宮頸癌組PCNA標(biāo)記指數(shù)(10.2% ～71.6%)高于正常組(＜5%)(P＜0.05)。在中、晚期組中PCNA的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，分化程度越差，PCNA表達(dá)越高。Survivin蛋白陽性染色顆粒主要定位于腫瘤細(xì)胞胞漿內(nèi)，宮頸癌組Survivin蛋白陽性表達(dá)率61.3%顯著高于正常組0%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。Survivin蛋白陽性表達(dá)率：淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組73.2%顯著高于無淋巴轉(zhuǎn)移組(46.3%)，Ⅰ期組(48.0%)高于Ⅱ組(70.4%)(均P＜0.05)。Survivin陽性表達(dá)與PCNA標(biāo)記指數(shù)呈顯著正相關(guān)(r=0.537，P＜0.05)。

3 討論

多細(xì)胞生物體細(xì)胞數(shù)量恒定取決于細(xì)胞增殖與凋亡間的動(dòng)態(tài)平衡，破壞平衡可導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。在惡性腫瘤病變中，細(xì)胞增殖和凋亡同時(shí)增加，但增殖速率明顯大于凋亡速率［2］。Survivin具有強(qiáng)大的凋亡抑制功能，其異常表達(dá)與多種人類腫瘤的發(fā)生發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān)［3］。本研究顯示，Survivin在正常宮頸組織中不表達(dá)，宮頸癌中Survivin表達(dá)率顯著高于正常宮頸組織，提示Survivin基因的表達(dá)發(fā)生在宮頸癌惡性轉(zhuǎn)化的早期，表明Survivin基因與宮頸癌的發(fā)生有關(guān)。對(duì)Survivin蛋白的檢測(cè)可作為早期宮頸癌的輔助診斷。本研究證實(shí)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組Survivin蛋白陽性表達(dá)率顯著高于無淋巴轉(zhuǎn)移組，Ⅱ期組高于Ⅰ期組，隨臨床分期增加及淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移，Survivin蛋白陽性表達(dá)率逐漸升高。提示Survivin基因不但參與原位腫瘤形成過程的調(diào)節(jié)，促進(jìn)其發(fā)展，可能還參與癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移過程的調(diào)節(jié)，在轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮作用。

PCNA是DNA聚合酶的輔助因子，參與DNA的合成并在細(xì)胞周期中起重要的調(diào)控作用。研究發(fā)現(xiàn)，PCNA與許多惡性腫瘤病理分級(jí)、臨床分期及淋巴結(jié)或臟器轉(zhuǎn)移有關(guān)，并可用于臨床診斷、指導(dǎo)治療以及預(yù)后評(píng)估［4］。本研究發(fā)現(xiàn)宮頸癌患者PCNALI與正常宮頸組相比有顯著性差異，提示細(xì)胞的異常增殖對(duì)腫瘤的發(fā)生發(fā)展起了重要作用。本研究中PCNA的陽性表達(dá)與宮頸癌的浸潤深度有關(guān)，分期越晚PCNA的表達(dá)越高。這提示宮頸癌一旦浸潤轉(zhuǎn)移后，癌細(xì)胞增殖活性大大增加，惡性程度明顯增高。本研究發(fā)現(xiàn)Survivin、PCNA在宮頸癌組織中的表達(dá)中隨著病理分期越高表達(dá)指數(shù)明顯增高，兩者呈正相關(guān)。PCNA蛋白檢測(cè)可直接反映細(xì)胞合成代謝及增殖狀態(tài)，Survivin基因在宮頸癌組織中的表達(dá)可能抑制了異常突變的細(xì)胞的凋亡，從而擾亂了細(xì)胞生長和凋亡途徑，促使細(xì)胞逃離生長監(jiān)控，兩者相互協(xié)同，可能造成了宮頸癌浸潤、轉(zhuǎn)移，至于其詳細(xì)機(jī)制還有待于進(jìn)一步研究。

［1］ 張改鳳.宮頸癌中Survivin基因表達(dá)及臨床意義.山東醫(yī)藥，2006，46(29)：33-34.

［2］ 徐紅梅，趙麗晶，梁作文.宮頸癌差異表達(dá)蛋白的相關(guān)性研究.中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2010，14(10)：1535-1538.

［3］ 朱華，楊孝軍，施錚錚.凋亡抑制基因Survivin在宮頸癌和癌前病變中的表達(dá)及其意義.中國醫(yī)師雜志，12(4)：541-543.

［4］ 梁瑩瑩，李琦，李晶.Survivin和bcl-2蛋白在宮頸病變中的表達(dá)及其意義.中國癌癥防治雜志，2010，2(3)：186-188.

450000 鄭州澍青醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校

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