南娟 翻譯 曹志成 校對(duì)

1天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院，天津市肺癌研究所，天津市肺癌轉(zhuǎn)移與腫瘤微環(huán)境重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室；2香港特別行政區(qū) 伊利沙伯醫(yī)院 臨床腫瘤科

“生物醫(yī)學(xué)研究的最新技術(shù)進(jìn)展使鑒定多種分子生物標(biāo)記物變得更加容易，有助于促進(jìn)癌癥篩查和檢測(cè)……通過允許醫(yī)生為患者制定個(gè)體化治療來提高癌癥治療的有效性和安全性?！?/p>

癌癥是當(dāng)今世界的主要致死原因。癌癥生物標(biāo)記物對(duì)于良好的治療效果和遠(yuǎn)期療效至關(guān)重要，并可降低病痛和疾病相關(guān)的社會(huì)支出。全世界惡性腫瘤的高負(fù)擔(dān)突顯了用以癌癥診斷、預(yù)后和療效預(yù)測(cè)的生物標(biāo)記物的未盡潛能。迫切需要新型策略以發(fā)現(xiàn)癌癥生物標(biāo)記物并將分子診斷從實(shí)驗(yàn)研究轉(zhuǎn)化至臨床實(shí)踐[1,2]。

生物醫(yī)學(xué)研究的最新技術(shù)進(jìn)展使鑒定多種分子生物標(biāo)記物變得更加容易，有助于促進(jìn)癌癥篩查和檢測(cè)，推進(jìn)藥物研發(fā)進(jìn)程，通過允許醫(yī)生為患者制定個(gè)體化治療來提高癌癥治療的有效性和安全性[3]。蛋白質(zhì)組學(xué)是用以鑒定癌癥生物標(biāo)記物和新型治療靶標(biāo)的具前景的技術(shù)。腫瘤蛋白質(zhì)組學(xué)的飛躍發(fā)展為腫瘤相關(guān)生物標(biāo)記物的發(fā)現(xiàn)開辟了新的途徑[4]。

診斷或早期檢測(cè)的生物標(biāo)記物

癌癥的早期檢測(cè)是提高惡性腫瘤總生存期的途徑之一。MALDI-TOF/TOF檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，與無瘤對(duì)照組相比，體積較?。ā? cm）的肝癌（hepatocellular carcinoma, HCC）患者的血清波形蛋白明顯過表達(dá)。進(jìn)一步研究證實(shí)波形蛋白單獨(dú)或與甲胎蛋白聯(lián)合均可作為檢測(cè)體積較小的HCCs的潛在替代標(biāo)記物[5]。對(duì)HCC組織進(jìn)行基于二維凝膠電泳的比較蛋白質(zhì)組學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，苯酚磺基轉(zhuǎn)移酶（sulfotransferase,SULT1A1）的下調(diào)與晚期國際抗癌聯(lián)盟分期和高血清甲胎蛋白水平密切相關(guān)。SULT1A1可能是篩查早期HCC的有效生物標(biāo)記物，并有助于預(yù)測(cè)HCC患者的臨床療效[6]。

一項(xiàng)采用標(biāo)準(zhǔn)免疫蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)和Luminex為基礎(chǔ)的直接捕捉免疫念珠試驗(yàn)的基于多種腫瘤相關(guān)自身抗體（包括膜聯(lián)蛋白I、膜聯(lián)蛋白II、熱休克蛋白70-9B、肌苷-5-單磷酸脫氫酶、磷酸甘油酸變位酶和ubiquillin）的血液檢測(cè)可從高危人群中篩查出早期非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）。這6個(gè)生物標(biāo)記物聯(lián)合的誤分類率僅為7%[7]。此外，對(duì)不同分期的膀胱癌患者尿樣的同位素標(biāo)記相對(duì)和絕對(duì)定量（isobaric tag for relative and absolute quantitation,iTRAQ）檢測(cè)表明，載脂蛋白A-I（apolipoprotein A-I,APOA1）是膀胱癌早期篩查的潛在生物標(biāo)記物。敏感性和特異性分別為84%和94%[8]。

最近，美國食品藥物管理局（Food and Drug Administration, FDA）批準(zhǔn)了一種卵巢腫瘤的分流方法OVA1TM，標(biāo)志著蛋白標(biāo)記物從實(shí)驗(yàn)室走向臨床進(jìn)程中的里程碑。當(dāng)與臨床評(píng)估（如影像和體格檢查）聯(lián)合時(shí)，這一基于免疫測(cè)定的分析方法（包括2-微球蛋白、APOA1、CA125、轉(zhuǎn)鐵蛋白和轉(zhuǎn)甲蛋白）在惡性腫瘤高危女性人群中具有陽性預(yù)測(cè)價(jià)值。OVA1評(píng)分可幫助醫(yī)生決定惡性腫瘤高?；颊呤欠窨蓮霓D(zhuǎn)診至婦科腫瘤治療中獲益[9]。

預(yù)后或轉(zhuǎn)移的生物標(biāo)記物

預(yù)后或轉(zhuǎn)移的生物標(biāo)記物通過鑒別具有不同風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體，有助于癌癥患者的分組治療。最近鑒定出了許多可提供重要預(yù)后信息的生物標(biāo)記物。在一項(xiàng)卵巢漿液性交界性腫瘤和卵巢漿液性癌的全蛋白質(zhì)組的比較研究中，過氧化物氧還酶1（peroxiredoxin 1, PRDX1）的過表達(dá)與漿液性癌的總生存期較短明顯相關(guān)。另一項(xiàng)多變量Cox分析中，PRDX1陽性癌細(xì)胞數(shù)＞50%的漿液性癌患者的相對(duì)死亡風(fēng)險(xiǎn)為8.74。這些結(jié)果提示，PRDX1是卵巢漿液性癌的有效預(yù)后生物標(biāo)記物[10]。對(duì)比良性膀胱尿路上皮組織和移行細(xì)胞癌，膀胱癌相關(guān)蛋白的高表達(dá)預(yù)示著患者預(yù)后不良，提示此蛋白染色模式的分類可能具有預(yù)后價(jià)值。而且，與單一標(biāo)記物相比，膀胱癌相關(guān)蛋白和脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白（adipocyte fatty-acid binding protein, A-FABP）的聯(lián)合與疾病分級(jí)和/或分期的相關(guān)度更為密切[11]。

“預(yù)后或轉(zhuǎn)移的生物標(biāo)記物通過鑒別具有不同風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體，有助于癌癥患者的分組治療?！?/p>

采用激光顯微切割、精確質(zhì)量數(shù)和保留時(shí)間標(biāo)簽蛋白質(zhì)組學(xué)，有研究報(bào)道肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌（intrahepatic cholangiocarcinoma, ICC）中的不同蛋白位于各種潛在的腫瘤發(fā)生的通路上。通過組織微陣列分析發(fā)現(xiàn)，70%的ICC患者中波形蛋白表達(dá)增多，而對(duì)照組中未見其表達(dá)。這些結(jié)果提示，波形蛋白在ICC的侵襲中發(fā)揮作用，而且是其不良預(yù)后的基礎(chǔ)[12]。有研究對(duì)腦膜瘤組織實(shí)施SELDI-TOF質(zhì)譜技術(shù)（mass spectrometry, MS）分析以期發(fā)現(xiàn)組織侵襲/浸潤的新型標(biāo)記物。磷酸化波形蛋白的增加可能成為鑒別浸潤性腦膜瘤和非浸潤性腦膜瘤的標(biāo)記物。敏感性和特異性分別為86.7%和100%[13]。

對(duì)于NSCLC，通過SELDI-TOF MS檢測(cè)血清淀粉樣蛋白A（serum amyloid A, SAA）發(fā)現(xiàn)，與生存期≥5年的患者相比，生存期＜5年的患者的SAA明顯增高。SAA水平的增高有可能成為預(yù)測(cè)NSCLC預(yù)后的非侵襲性生物標(biāo)記物[14]。SELDI-TOF MS檢測(cè)還發(fā)現(xiàn)，載脂蛋白A-II和SAA是判定轉(zhuǎn)移性腎臟細(xì)胞癌患者生存期的獨(dú)立因素。這兩種蛋白聯(lián)合乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase, LDH）、體力狀況和轉(zhuǎn)移位點(diǎn)數(shù)目形成了新型預(yù)后生存模型。與目前使用的紀(jì)念斯隆-凱特靈癌癥研究中心（Memorial Sloan-Kettering Cancer Centre）風(fēng)險(xiǎn)模型相比，基于蛋白的模型可能提高對(duì)總生存期的預(yù)測(cè)[15]。

細(xì)胞培養(yǎng)中的氨基酸穩(wěn)定同位素標(biāo)記與液相色譜（liquid chromatography, LC）-MS/MS分析發(fā)現(xiàn)，TIMM17A（mitochondrial import inner membrane translocase subunit Tim17-A）是乳腺癌的預(yù)后因子。TIMM17A的表達(dá)水平與腫瘤進(jìn)展和生存期直接相關(guān)。過表達(dá)和siRNA敲除試驗(yàn)證實(shí)了TIMM17A在乳腺癌中的致癌活性[16]。一種基于LC-MS/MS的無標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)方法用以比較原發(fā)性結(jié)直腸癌（colorectal cancer, CRC）及其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移細(xì)胞的差異分泌蛋白質(zhì)組。免疫組織化學(xué)的分析結(jié)果顯示，CRC中的生長分化因子15或三葉因子3的過表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。它們有可能成為預(yù)測(cè)CRC轉(zhuǎn)移的生物標(biāo)記物[17]。

鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma, NPC）細(xì)胞分泌蛋白質(zhì)組和組織轉(zhuǎn)錄組分析顯示，治療前的血清cystatin A水平越高，則NPC患者的淋巴結(jié)分期越高且預(yù)后越差。Cystatin A可調(diào)節(jié)離體NPC細(xì)胞的遷移和侵襲[18]。有研究發(fā)現(xiàn)，NPC患者的真核翻譯起始因子4G1（eukaryotic translation initiation factor 4 γ1, EIF4G1）的表達(dá)越高，則總生存期越短。采用shRNA敲除EIF4G1的表達(dá)，不僅可明顯抑制細(xì)胞周期進(jìn)程、增殖、遷移、侵襲和集落形成，而且可顯著抑制在體異種移植瘤的生長[19]。

生物標(biāo)記物對(duì)治療效益的預(yù)測(cè)

腫瘤生物標(biāo)記物的另一重要方面是它們?yōu)檫x擇更具靶向性的治療方法提供了預(yù)測(cè)價(jià)值。蛋白質(zhì)組學(xué)分析顯示，14-3-3σ和maspin的下調(diào)，以及GRP78和Mn-SOD的上調(diào)，均與NPC的放療耐受顯著相關(guān)。在識(shí)別放療耐受的NPC患者的放療敏感度中，四種蛋白聯(lián)合應(yīng)用的敏感性和特異性分別為90%和80%。而且，放療耐受細(xì)胞通過過表達(dá)14-3-3σ可部分逆轉(zhuǎn)對(duì)電離輻射的耐受[20]。治療前活檢標(biāo)本的蛋白質(zhì)組學(xué)和免疫組織化學(xué)分析顯示，對(duì)新輔助放療或紫杉醇治療呈現(xiàn)病理完全緩解的乳腺癌患者的免疫信號(hào)分子α-defensin呈過表達(dá)。對(duì)術(shù)前接受基于紫杉醇治療的腫瘤患者的大樣本分析顯示，手術(shù)時(shí)的α-defensins與治療效果相關(guān)[21]。

反相蛋白陣列檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，EGF受體（EGF receptor,EGFR）和兩種TGF-β通路蛋白（c-jun-NH2-激酶和Smad3）與晚期漿液性卵巢癌患者化療后CA125的正?；嚓P(guān)。在晚期漿液性卵巢癌中，TGF-β通路信號(hào)可能作為化療耐受的標(biāo)記物而發(fā)揮重要作用[22]。

“腫瘤蛋白質(zhì)組學(xué)揭示腫瘤發(fā)生的復(fù)雜分子事件以及控制臨床上重要的腫瘤行為，如侵襲、轉(zhuǎn)移和對(duì)治療耐受，提供巨大前景?！?/p>

一項(xiàng)I期劑量遞增研究在轉(zhuǎn)移性CRC患者血漿和組織樣本中評(píng)估了西妥昔單抗療效的生物標(biāo)記物[23]。藥物蛋白質(zhì)組學(xué)和藥物基因組學(xué)分析顯示，僅KRAS野生型腫瘤患者有效，而且與KRAS突變型腫瘤相比，KRAS野生型患者的無進(jìn)展生存期更長。這些結(jié)果證實(shí)，KRAS野生型的轉(zhuǎn)移CRC患者更易從西妥昔單抗治療中獲益[23]。在采用西妥昔單抗或EGFR酪氨酸激酶抑制劑治療的CRC患者中，腫瘤EGFR配體RNA水平亦與VeriStrat特征［Biodesix（布魯姆菲爾德，科羅拉多州，美國）提供的基于8種不同的m/z特征的血清MALDI分類檢測(cè)］預(yù)測(cè)的生存期顯著相關(guān)，聯(lián)合KRAS突變狀態(tài)可提高對(duì)生存期的預(yù)測(cè)。生物標(biāo)記物的聯(lián)合為鑒別更易獲益于EGFR抑制劑治療的不同腫瘤類型的患者提供了臨床實(shí)踐方法[24]。采用VeriStrat?分析厄洛替尼一線治療晚期肺癌患者的II期研究的生物標(biāo)本發(fā)現(xiàn)，VeriStrat狀態(tài)和EGFR突變與生存期顯著相關(guān)，而KRAS突變與生存期無關(guān)。VeriStrat被證實(shí)是野生型EGFR且不伴有KRAS突變的患者采用厄洛替尼一線治療后生存期的有效預(yù)測(cè)因子[25]。

挑戰(zhàn)與展望

盡管近幾十年來分子生物標(biāo)記物的發(fā)現(xiàn)急劇增加，但將這些生物標(biāo)記物轉(zhuǎn)化為更有效的患者治療和更良好的療效仍存挑戰(zhàn)。研發(fā)臨床上有效的癌癥生物標(biāo)記物還有許多障礙，包括與分析前參數(shù)及潛在癌癥生物標(biāo)記物驗(yàn)證相關(guān)的技術(shù)難題，以及將這些癌癥生物標(biāo)記物轉(zhuǎn)化為臨床實(shí)踐的研發(fā)、評(píng)估與聯(lián)合篩查或診斷測(cè)試相關(guān)的挑戰(zhàn)[3]。

新興的組學(xué)技術(shù)正廣泛地用于癌癥研究和生物標(biāo)記物的探索[26]。高通量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的近期進(jìn)展以前所未有的速度為人類腫瘤的分子分析提供了新的機(jī)遇。腫瘤蛋白質(zhì)組學(xué)揭示腫瘤發(fā)生的復(fù)雜分子事件以及控制臨床上重要的腫瘤行為，如侵襲、轉(zhuǎn)移和對(duì)治療耐受，提供巨大前景[4]。隨著新的和改進(jìn)的蛋白質(zhì)芯片技術(shù)的出現(xiàn)，讓研發(fā)可靠并準(zhǔn)確地預(yù)測(cè)癌癥治療效果的生物標(biāo)記物變得可行[27]?？梢灶A(yù)見，未來蛋白生物標(biāo)記物應(yīng)用可能需要微型化和自動(dòng)技術(shù)。多種生物標(biāo)記物的聯(lián)合可使檢測(cè)更為精確。已有生物標(biāo)記物聯(lián)合新型分子標(biāo)記物將會(huì)是研發(fā)癌癥管理的治療診斷方法的新興趨勢(shì)。分子癌癥生物標(biāo)記物在轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)中不斷向前發(fā)展，但距離成功還有漫漫長路。

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