蔣興然，陸士新

中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 腫瘤醫(yī)院＆腫瘤研究所國(guó)家分子腫瘤學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100021

誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞的研究進(jìn)展與應(yīng)用

蔣興然，陸士新

中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 腫瘤醫(yī)院＆腫瘤研究所國(guó)家分子腫瘤學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100021

分化成熟的體細(xì)胞可在體外被重編程為誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞，后者具有與胚胎干細(xì)胞相似的自我更新能力和發(fā)育多潛能性，同時(shí)避免了免疫排斥和倫理問(wèn)題。患者特異性的誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞將成為再生醫(yī)學(xué)、藥物篩選和毒理測(cè)試的理想工具。

誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞;體細(xì)胞重編程;發(fā)育多潛能性;分化

誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞 (induced pluripotent stem cells，iPSCs)是通過(guò)將特定的重編程因子導(dǎo)入體細(xì)胞從而產(chǎn)生一種具有與胚胎干細(xì)胞 (embryonic stem cells，ESCs)相似特征的細(xì)胞。由于ESCs在倫理和法律等方面受到限制，干細(xì)胞研究曾一度陷入危機(jī)，而此時(shí)不涉及人類胚胎的iPSCs的出現(xiàn)為干細(xì)胞研究領(lǐng)域注入了強(qiáng)大生機(jī)與活力，成為了ESCs最理想的替代者。iPSCs是當(dāng)前國(guó)際上的熱門研究領(lǐng)域，盡管在其誘導(dǎo)效率和安全性方面仍存在問(wèn)題，但相信隨著更多深入研究的進(jìn)行，iPSCs將擁有更廣闊的應(yīng)用前景。

iPSCs的研究進(jìn)展

iPSCs的產(chǎn)生 iPSCs的產(chǎn)生與體細(xì)胞重編程現(xiàn)象密不可分。在體細(xì)胞核移植、細(xì)胞融合等特定條件下，高度分化的體細(xì)胞關(guān)閉了體細(xì)胞特異性表達(dá)的基因，開啟了使細(xì)胞具有自我更新能力和發(fā)育多潛能性的基因，從而被重編程為具有ESCs特性的一類細(xì)胞。

2006年，日本Takahashi等［1］率先發(fā)現(xiàn)將Oct3/4、Sox2、c-Myc和Klf4 4個(gè)基因通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)轉(zhuǎn)入胎鼠成纖維細(xì)胞 (mouse embryonic fibroblast，MEF)或成年小鼠尾部成纖維細(xì)胞，可以誘導(dǎo)這些細(xì)胞發(fā)生重編程，獲得了細(xì)胞形態(tài)和分子遺傳特點(diǎn)與ESCs極其相似的新細(xì)胞，即iPSCs。

繼成功建立小鼠 iPSCs后，2007年，Takahashi等［2］和 Yu等［3］又分別將人的體細(xì)胞重編程為 iPSCs，使iPSCs的研究向前邁進(jìn)了重要一步。Takahashi等［2］利用此前在小鼠中建立的逆轉(zhuǎn)錄病毒系統(tǒng)，將Oct3/4、Sox2、c-Myc和Klf4 4種基因?qū)氤扇说某衫w維細(xì)胞，使其成功轉(zhuǎn)變?yōu)閕PSCs。與此同時(shí)，Yu等［3］則獨(dú)自確定了14種候選基因，經(jīng)過(guò)篩選，使用慢病毒介導(dǎo)表達(dá)Oct4、Sox2、Nanog和Lin28 4個(gè)因子，成功地將新生兒的成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)閕PSCs。

Park等［4］采用與 Takahashi等［2］相同的 4 種基因以及hTERT和SV40大T抗原基因，成功地將直接從志愿者身上提取的皮膚細(xì)胞重編程為iPSCs，意味著從任何健康人身上提取皮膚細(xì)胞產(chǎn)生iPSCs是可行的。

此外，多個(gè)研究小組分別在大鼠、猴和豬等物種中建立了誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞系［5-9］。這些研究成果說(shuō)明iPSCs的誘導(dǎo)技術(shù)應(yīng)用范圍較廣，可相對(duì)便利地在多物種中建立多潛能性細(xì)胞的細(xì)胞系，有助于建立人類疾病的多種動(dòng)物模型，為今后應(yīng)用iPSCs治療人類疾病的安全性和有效性提供了充分的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

iPSCs誘導(dǎo)技術(shù)的優(yōu)化 Takahashi等［2］和 Yu等［3］早期采用的四因子誘導(dǎo)方法產(chǎn)生 iPSCs的效率很低并含有潛在致癌因子 Klf4［10］和 c-Myc［11］，以及病毒載體可能引發(fā)的插入突變等，使得iPSCs在安全性上存在很大問(wèn)題。近年來(lái)，各國(guó)的研究小組主要從以下幾個(gè)方面進(jìn)行了改進(jìn)。

減少致癌因子使用，提高誘導(dǎo)效率:Nakagawa等［12］和 Wernig等［13］只用 Oct4、Sox2 和 Klf4 3 個(gè)因子成功誘導(dǎo)出iPSCs，降低了其成瘤性。Marson等［14］發(fā)現(xiàn)在培養(yǎng)基中加入可溶性Wnt3a后，可提高誘導(dǎo)產(chǎn)生iPSCs的效率。Feng等［15］則發(fā)現(xiàn)采用 Essrb、Oct4和Sox2 3個(gè)因子可成功誘導(dǎo)出小鼠的iPSCs。Esteban等［16］通過(guò)在培養(yǎng)基中添加維生素C，減輕了細(xì)胞衰老，使iPSCs誘導(dǎo)效率提高約 10倍。Lin等［17］將miR-302導(dǎo)入人黑素瘤細(xì)胞和前列腺癌細(xì)胞，將腫瘤細(xì)胞重編程為具有多潛能性的iPSCs。Judson等［18］則發(fā)現(xiàn) miR-291-3p、miR-294和 miR-295可提高 Oct4、Sox2和Klf4 3個(gè)因子的重編程效率。Kim等［19-20］只用1個(gè)因子Oct4，即可使人胎兒神經(jīng)干細(xì)胞和小鼠神經(jīng)干細(xì)胞重編程為iPSCs。最近，他們還發(fā)現(xiàn)染色體重塑復(fù)合物BAF通過(guò)影響多能性基因的表達(dá)而在重編程中發(fā)揮重要作用，在重編程過(guò)程中過(guò)表達(dá)Brg1和Baf155可以顯著提高體細(xì)胞轉(zhuǎn)化為iPSCs的效率［21］。

避免病毒導(dǎo)致的基因組DNA不穩(wěn)定:病毒可將外源基因整合入基因組DNA中，從而引發(fā)插入突變，產(chǎn)生致癌作用。因此，應(yīng)當(dāng)減少和盡量避免病毒載體的使用。Kaji等［22］和 Woltjen 等［23］以病毒的2A肽序列生成結(jié)合 Oct3/4、Sox2、c-Myc和Klf4 4種因子的多順?lè)醋虞d體，利用piggyBac轉(zhuǎn)座子將其送入細(xì)胞中，將人和小鼠成纖維細(xì)胞重編程為iPSCs，隨后通過(guò)順時(shí)表達(dá)轉(zhuǎn)座酶即可將外源因子從基因組DNA中除去。Yu等［24］利用非整合的附著體載體，將誘導(dǎo)因子導(dǎo)入人成纖維細(xì)胞使其重編程為iPSCs，停止藥物篩選后可進(jìn)一步分離出丟失這些附著體載體即不含轉(zhuǎn)基因序列的人iPSCs。另一種方法是利用由細(xì)胞穿膜肽與重編程因子融合表達(dá)形成的重組蛋白質(zhì)直接穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部，發(fā)揮重編程作用產(chǎn)生人和小鼠的iPSCs［25-26］。這種方法沒(méi)有使用病毒或其他載體導(dǎo)入外源DNA，從而避免了外源基因插入可能導(dǎo)致的基因組DNA不穩(wěn)定，使iPSCs更加安全可靠。

體細(xì)胞種類的選擇:不同的體細(xì)胞類型對(duì)iPSCs的產(chǎn)生效率和安全性有重要影響。Aoi等［27］發(fā)現(xiàn)由小鼠肝臟細(xì)胞和胃表皮細(xì)胞獲得的iPSCs比由胎鼠成纖維細(xì)胞獲得的iPSCs成瘤性要低。Aasen等［28］則發(fā)現(xiàn)以人角質(zhì)形成細(xì)胞為供體細(xì)胞，同樣用逆轉(zhuǎn)錄病毒來(lái)介導(dǎo)表達(dá) Oct4、Sox2、Klf4和 c-Myc，可使約1%的角質(zhì)形成細(xì)胞重編程獲得iPSCs，效率比用成纖維細(xì)胞作為供體細(xì)胞至少高100倍，并且誘導(dǎo)過(guò)程只需10 d，而使用其他供體細(xì)胞則需要數(shù)周。Li等［29］發(fā)現(xiàn)用同樣的誘導(dǎo)方法，使用孕婦產(chǎn)前診斷的羊水細(xì)胞可以更高效、快速地產(chǎn)生iPSCs，效率最高可達(dá)到1.525%，且使重編程時(shí)間縮短至6d。Sun等［30］發(fā)現(xiàn)人脂肪干細(xì)胞與皮膚成纖維細(xì)胞相比，更容易被誘導(dǎo)為iPSCs，效率是后者的20倍。脂肪干細(xì)胞內(nèi)Klf4、Klf2、Esrrb和c-Myc基因的表達(dá)水平明顯高于皮膚成纖維細(xì)胞可能是其更易于被誘導(dǎo)為iPSCs的原因。最近，3個(gè)研究小組同時(shí)分別從人外周血中分離單核細(xì)胞或T細(xì)胞，并將其誘導(dǎo)成為iPSCs，從血樣采集到獲得iPSCs的全過(guò)程在1個(gè)月內(nèi)即可完成，使得從臨床上獲得患者特異性的iPSCs變得更加便捷［31-33］。其中，日本 Seki等［32］利用溫度敏感型的仙臺(tái)病毒突變株將Oct3/4、Sox2、Klf4和c-Myc導(dǎo)入T細(xì)胞中，避免了外源基因整合入基因組，使獲得的iPSCs更加安全。相信隨著多種體細(xì)胞被成功重編程為iPSCs，以及對(duì)重編程機(jī)制的進(jìn)一步研究，將有望找到兼具高效、安全、易于取材等優(yōu)點(diǎn)的供體細(xì)胞。此外，Yoshida等［34］發(fā)現(xiàn)在重編程iPSCs的過(guò)程中，如果將培養(yǎng)環(huán)境氧濃度降低至5%，可有效提高iPSCs的誘導(dǎo)效率。綜上，為了更高效地獲得安全的iPSCs，可采取以下幾種方法:(1)根據(jù)不同的研究或治療目的選用適當(dāng)?shù)墓w細(xì)胞;(2)減少外源基因的數(shù)量和病毒等載體的使用，避免遺傳修飾;(3)加入小分子化合物和維生素C等，提高iPSCs的誘導(dǎo)效率;(4)在誘導(dǎo)過(guò)程中選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)環(huán)境如低氧濃度。

iPSCs的多潛能性鑒定 Takahashi等［1］最初獲得的iPSCs克隆在形態(tài)和多潛能特征標(biāo)記基因的表達(dá)上與ESCs克隆相似，在體外培養(yǎng)可形成擬胚體，具有形成畸胎瘤的能力，進(jìn)行囊胚注射可形成嵌合體小鼠胚胎，但在全基因表達(dá)譜與多潛能轉(zhuǎn)錄因子DNA甲基化譜方面與ESCs還存在較大的差異，不能形成成年嵌合體小鼠且沒(méi)有生殖系轉(zhuǎn)移能力。

經(jīng)過(guò)3個(gè)獨(dú)立研究小組的研究改進(jìn)，采用在ESCs的自我更新和多潛能性的維持中起關(guān)鍵作用的Oct4或Nanog基因作為激活系統(tǒng)進(jìn)行篩選時(shí)，獲得了真正的iPSCs，其全基因表達(dá)譜、DNA甲基化譜、組蛋白H3甲基化修飾以及X染色體的表觀遺傳狀態(tài)與ESCs幾乎一致，可以形成二倍體嵌合成年小鼠并傳遞至生殖系細(xì)胞中，并且通過(guò)該二倍體嵌合小鼠的繁殖得到了后代小鼠［35-37］。Meissner等［38］嘗試將iPSCs注射到小鼠四倍體囊胚 (僅提供營(yíng)養(yǎng)環(huán)境，無(wú)發(fā)育能力)中，獲得了14.5 d的活胚胎。Zhao等［39］和 Kang等［40］分別將 iPSCs注射入小鼠四倍體囊胚，再移植入代孕母鼠體內(nèi)，發(fā)育得到了完全來(lái)源于iPSCs的可以存活并具有繁殖能力的后代——用四倍體胚胎補(bǔ)償這一嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)一步證明了iPSCs的多潛能性。

最近，Liu等［41］和 Stadtfeld等［42］通過(guò)比較具有不同發(fā)育潛能的小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞系和胚胎干細(xì)胞系的轉(zhuǎn)錄譜，發(fā)現(xiàn)了可以用來(lái)評(píng)估小鼠干細(xì)胞多能性水平和小鼠iPSCs重編程完全性的基因組保守區(qū)Dlk1-Dio3，該區(qū)域在小鼠胚胎干細(xì)胞和可以產(chǎn)生四倍體胚胎補(bǔ)償小鼠的iPSCs中為激活狀態(tài)，而在不完全重編程的僅具有部分多能性的iPSCs中被異常沉默。該區(qū)域內(nèi)的基因簇和microRNA簇的激活程度與細(xì)胞的多能性水平呈正相關(guān)，并且在小鼠基因組中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)其他具有此類特性的區(qū)域，因此可作為評(píng)估小鼠干細(xì)胞和iPSCs多能性水平的分子標(biāo)記，對(duì)干細(xì)胞及iPSCs的多能性機(jī)制研究和臨床應(yīng)用具有重要的推進(jìn)作用。

iPSCs的應(yīng)用

iPSCs具有與ESCs相似的自我更新能力和發(fā)育多潛能性，且供體細(xì)胞的取材簡(jiǎn)單易行，避免了ESCs所涉及的倫理問(wèn)題和免疫排斥問(wèn)題。利用iPSCs誘導(dǎo)技術(shù)可以將患者體細(xì)胞重編程成為患者特異性iPSCs，作為疾病的細(xì)胞模型來(lái)開展發(fā)病機(jī)制、藥物篩選、毒理等一系列研究工作?；颊咛禺愋詉PSCs也可被人工誘導(dǎo)分化成多種體細(xì)胞類型，在細(xì)胞治療和再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域擁有廣泛、良好的應(yīng)用前景。

Hanna等［43］首次應(yīng)用iPSCs進(jìn)行了治療性研究。他們采用人源化鐮刀形紅細(xì)胞貧血癥小鼠動(dòng)物模型，取得其尾尖部皮膚的成纖維細(xì)胞后誘導(dǎo)產(chǎn)生個(gè)體化的iPSCs，通過(guò)同源重組方式將人野生型βA-珠蛋白基因替代了βS-珠蛋白基因，將該基因型正常的iPSCs在體外定向分化為造血祖細(xì)胞，移植入經(jīng)照射處理的患病小鼠體內(nèi)后可治療其鐮刀形紅細(xì)胞貧血癥。Raya等［44］從Fanconi貧血癥患者身上取得皮膚成纖維細(xì)胞，利用病毒將缺陷基因?qū)朐摷?xì)胞，隨后經(jīng)重編程作用獲得了遺傳修飾后的Fanconi貧血癥患者特異性iPSCs。這些iPSCs能夠分化形成表型正常的髓系和紅細(xì)胞系的造血祖細(xì)胞，但由于整個(gè)過(guò)程中使用了病毒載體，安全性不能保證，所以尚未應(yīng)用于臨床治療。Nishimura等［45］將小鼠iPSCs定向培育出聽(tīng)神經(jīng)祖細(xì)胞，隨后將其移植入新生幼鼠的內(nèi)耳耳蝸，1個(gè)月后移植入的多數(shù)細(xì)胞不斷發(fā)育成熟構(gòu)成了螺旋神經(jīng)節(jié)。螺旋神經(jīng)節(jié)的減少或消失會(huì)導(dǎo)致聽(tīng)力障礙，因此該成果為用iPSCs治療因聽(tīng)神經(jīng)數(shù)量減少導(dǎo)致的聽(tīng)力障礙奠定了基礎(chǔ)。最近，Tsuji等［46］將多株iPSCs誘導(dǎo)分化成的神經(jīng)球移植入NOD/SCID小鼠腦部進(jìn)行成瘤性檢測(cè)，篩選出安全的iPSCs，并將由這種安全的iPSCs誘導(dǎo)分化出的神經(jīng)球植入脊髓受損的小鼠體內(nèi)，促進(jìn)了小鼠運(yùn)動(dòng)功能的恢復(fù)且沒(méi)有導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。采用這種預(yù)先的安全性評(píng)估和篩選方法，為解決iPSCs在臨床應(yīng)用上的安全問(wèn)題提供了新的思路。這些研究成果均展現(xiàn)了iPSCs在臨床治療上潛在的巨大應(yīng)用價(jià)值。

多個(gè)研究小組分別建立了多種患者特異性的誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞系用于研究，如肌肉萎縮癥、亨廷頓病、唐氏綜合癥、1型糖尿病、帕金森氏病等［47-50］。其中，Dimos等［47］從罹患家族型肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化癥這種神經(jīng)退行性疾病的老年人皮膚成纖維細(xì)胞中誘導(dǎo)出了患者特異性的iPSCs，并成功地將其定向分化成為運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元，該成果提供了可靠的疾病體外細(xì)胞模型，可用于研究發(fā)病機(jī)制或篩選阻止神經(jīng)元退行藥物，還可以通過(guò)遺傳修飾糾正相關(guān)基因得到正常的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元用于細(xì)胞替代治療。Ebert等［48］則建立了脊髓性肌萎縮患者特異性iPSCs，并將其定向分化為運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元，隨著時(shí)間推移成功觀測(cè)到了這些神經(jīng)細(xì)胞出現(xiàn)的異常變化直到2個(gè)月后因疾病死亡。由于患者特異性iPSCs可以不斷地提供這種運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元，使得研究者可以在體外反復(fù)再現(xiàn)疾病發(fā)生發(fā)展直至死亡的全過(guò)程，在研究疾病的分子機(jī)制和研發(fā)新藥等方面有重大意義。

問(wèn)題與展望

提高iPSCs的誘導(dǎo)效率和安全性以使其應(yīng)用于臨床醫(yī)療是當(dāng)前研究的熱點(diǎn)，各種改進(jìn)方法層出不窮，未來(lái)甚至將有可能出現(xiàn)只須使用1種重組蛋白或是某些小分子化合物即可將體細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)閕PSCs的方法。只有對(duì)這些方法從安全和效率等方面進(jìn)行系統(tǒng)全面的比較和評(píng)估，才能挑選出獲得高質(zhì)量iPSCs的最佳方法。

Vierbuchen等［51］從iPSCs的重編程方法中受到啟發(fā)，篩選出3個(gè)神經(jīng)系統(tǒng)特異的轉(zhuǎn)錄因子，繞過(guò)了iPSCs，直接將小鼠成纖維細(xì)胞重編程為功能性神經(jīng)元。盡管這種繞過(guò)iPSCs的方法受限于需要從人體上大量獲取重編程所需的供體細(xì)胞，但這一有趣的研究成果仍舊為從體細(xì)胞直接培育各種組織細(xì)胞提供了新的思路。

同時(shí)，應(yīng)該注意到關(guān)于iPSCs還有一些主要問(wèn)題依然沒(méi)有得到很好的解答，如誘導(dǎo)體細(xì)胞重編程產(chǎn)生iPSCs的分子機(jī)制，以及iPSCs和ESCs在表觀遺傳修飾和基因表達(dá)譜方面的差異與它們的發(fā)育多潛能性和致癌性有著什么樣的關(guān)系等。最近，Li等［52］發(fā)現(xiàn)導(dǎo)入的Oct3/4、Sox2、c-Myc和Klf4 4種因子通過(guò)抑制維持間質(zhì)細(xì)胞特征的轉(zhuǎn)錄因子Snail以及TGF-β信號(hào)通路，并誘導(dǎo)E-cadherin等上皮細(xì)胞特性基因表達(dá)，抑制了成纖維細(xì)胞的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)而開啟了間質(zhì)上皮轉(zhuǎn)化，啟始了成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)槎酀撃芗?xì)胞的重編程過(guò)程。該研究對(duì)于闡明iPSCs的誘導(dǎo)機(jī)制是一個(gè)良好的開端。此外，iPSCs在癌癥研究中也將發(fā)揮出巨大作用。腫瘤細(xì)胞與多潛能細(xì)胞具有很多相似之處，都具有永生化特點(diǎn)，也都能成瘤。因此，iPSCs將有助于闡明永生化、癌變與重編程過(guò)程之間的重要聯(lián)系。

Marchetto等［53］發(fā)現(xiàn)將人的神經(jīng)干細(xì)胞轉(zhuǎn)化為iPSCs后，這些iPSCs仍攜帶著供體細(xì)胞的一些轉(zhuǎn)錄標(biāo)簽。而Hu等［54］通過(guò)比較 iPSCs和 ESCs分化為神經(jīng)上皮細(xì)胞和各種功能神經(jīng)元的能力，發(fā)現(xiàn)iPSCs表現(xiàn)出明顯的低效和更多的變異，不能忠實(shí)地重現(xiàn)ESCs的所有分化能力。以上結(jié)果說(shuō)明需要更深入地研究重編程產(chǎn)生的iPSCs與ESCs的異同，并探索出更有效的方法將iPSCs分化成臨床需要的細(xì)胞類型，應(yīng)用于建立疾病模型、藥物篩選、毒性檢測(cè)、細(xì)胞替代治療和再生醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域，加快從基礎(chǔ)研究向臨床應(yīng)用的轉(zhuǎn)化。

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Research Advances in Induced Pluripotent Stem Cells

JIANG Xing-ran，LU Shi-xin

State Key Laboratory of Molecular Oncology，Cancer Institute＆ Hospital，CAMS and PUMC，Beijing 100021，China

LU Shi-xin Tel/Fax:010-67712368，E-mail:shlu1212@gmail.com

Differentiated somatic cells can be directly reprogrammed into induced pluripotent stem(iPS)cells in vitro.Similarly to embryonic stem(ES)cells，iPS cells have pluripotency to differentiate into all cell types and capability to self-renew themselves indefinitely.Without immune rejection and ethical issues，patient-specific iPS cells promise to be an ideal tool for regenerative medicine，drug screening，and toxicity testing.

induced pluripotent stem cells;somatic cell reprogramming;pluripotency;differentiation Acta Acad Med Sin，2011，33(4):456-461

陸士新 電話/傳真:010-67712368，電子郵件:shlu1212@gmail.com

Q813

A

1000-503X(2011)04-0456-06

10.3881/j.issn.1000-503X.2011.04.022

國(guó)家自然科學(xué)基金 (30971448)和國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目 (973計(jì)劃)(2009CB521803)Supported by the National Natural Sciences Foundation of China(30971448)and the National Basic Research Program of China(973 Program)(2009CB521803)

2010-06-02)

(本文編輯:孔朝霞)