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飼料中β-興奮劑檢測方法的研究進(jìn)展

2011-02-12 18:14陜西理工學(xué)院化學(xué)與環(huán)境科學(xué)學(xué)院陶亮亮
中國飼料 2011年21期
關(guān)鍵詞:倫特羅瘦肉精興奮劑

陜西理工學(xué)院化學(xué)與環(huán)境科學(xué)學(xué)院 陶亮亮

陜西理工學(xué)院生物科學(xué)與工程學(xué)院 寇 慶 梁咪娟

俗稱的“瘦肉精”實(shí)際上就是β-腎上腺素興奮劑,簡稱 β-興奮劑(β-agonist)或 β-激動劑(湛嘉等,2009;Martin,2002),主要包含 7 種物質(zhì):鹽酸克倫特羅(傳統(tǒng)瘦肉精)、萊克多巴胺、沙丁胺醇、硫酸特布他林、硫酸沙丁胺醇、西巴特羅、鹽酸多巴胺。在飼料中添加β-興奮劑能使禽畜肌肉比例提高,增大禽畜的瘦肉率,因此β-興奮劑一度被用于畜牧生產(chǎn)(Cheng 等,2009;李杰,2003;楊志凌和林映才,2003)。然而β-興奮劑在內(nèi)臟中積累較嚴(yán)重,并可通過食物鏈進(jìn)入人體,嚴(yán)重危害身體健康(賈強(qiáng)等,2005;Adrin 等,2005;尹靖東等,1998)。以往國家執(zhí)法人員多檢測鹽酸克倫特羅,近年來萊克多巴胺也被列入檢測范圍,其余5種則極少被檢測。目前對β-腎上腺素興奮劑的檢測方法主要分5大類:簡易檢驗(yàn)法、色譜技術(shù)、免疫分析、生物傳感器法和生物芯片法,本文主要這幾種檢測方法進(jìn)行介紹。

1 簡易檢驗(yàn)法

對于養(yǎng)殖場或者屠宰場在屠宰前的生豬,可以通過外表觀察進(jìn)行初步判斷,一般食用 “瘦肉精”的生豬皮毛光亮,后臀結(jié)實(shí)、突出且外形飽滿,呼吸頻率加快,四肢不同程度的顫抖,嚴(yán)重者臥地不起,通過這些表現(xiàn)在生豬屠宰前即可做出初步的判斷。對于屠宰后的生豬也可做宰后簡易檢驗(yàn),首先從感官進(jìn)行判斷,喂食 “瘦肉精”后的豬肉顏色鮮艷并且較深,纖維比較疏松,脂肪層薄,瘦肉與脂肪間或有黃色液體流出,后肢與腹部之間的脂肪層內(nèi)分布較密集的毛細(xì)血管,顏色深的部位呈現(xiàn)出充血狀態(tài)。也可通過酸堿試紙檢測,正常肉類多呈中性或弱堿性,而喂食“瘦肉精”的肉類偏酸性。

2 高效液相色譜法

高效液相色譜法(HPLC)在測定一些對熱不穩(wěn)定和強(qiáng)極性的β-興奮劑類物質(zhì)方面顯示出較好的效果,目前的趨勢是將HPLC和質(zhì)譜(MS)系統(tǒng)聯(lián)用,以實(shí)現(xiàn)分析過程的自動化。HPLC法采用高壓泵和高效固定相結(jié)合的高靈敏度的紫外檢測器、電化學(xué)檢測器和質(zhì)譜檢測器。應(yīng)用HPLC法檢測鹽酸克倫特羅時無需衍生過程,利用β-興奮劑分子能夠與固定相C8或C18分子相互作用,結(jié)合反相柱即可檢測出β-興奮劑類物質(zhì)。正是因?yàn)镠PLC法具有專屬性好、選擇性強(qiáng)、檢測精確度較高,而且假陽性率低等優(yōu)點(diǎn),我國目前已將HPLC法作為檢測鹽酸克倫特羅的半確證性方法,此法目前的最低檢測范圍為1~15 ng/g。但是HPLC法在實(shí)際應(yīng)用中受到一定的限制,主要是因?yàn)榇朔ㄋ璧臉悠诽幚頃r間長、檢測過程繁瑣、要求專門的技術(shù)人員進(jìn)行操作等問題 (苗虹等,2010;安洪澤等,2008)。

3 氣相色譜-質(zhì)譜法

氣相色譜-質(zhì)譜法(GC-MS)把色譜的高效快速分離能力與質(zhì)譜高靈敏度的定性分析能力相結(jié)合,因此其既適合單組分測定,也適合在多組分同時存在的情況下對某種特定的組分進(jìn)行定性或定量分析,是非常有效、準(zhǔn)確而又靈敏的方法(孔瑩等,2006; 吳平谷和虞曉珍,2005;Jose 等,2005)。Batioens等(1996)用 GC-MS-MS 法對豬、牛和羊的肌肉、肝臟等組織中殘留的“瘦肉精”進(jìn)行檢測,結(jié)果顯示最低檢測標(biāo)準(zhǔn)為2 ng/g;Fente等(1999)使用GC-MS法對牛毛中殘留的“瘦肉精”進(jìn)行檢測,結(jié)果顯示最低檢測標(biāo)準(zhǔn)為5 ng/g;另外,GCMS法與HPLC法相比,檢測靈敏度更高,假陽性率更低。Biancotto等(1999)通過對鹽酸克倫特羅分子中的羥基進(jìn)行硅烷化衍生,然后GC-MS方法檢測最低檢測標(biāo)準(zhǔn)為0.12 ng/mL。Abukhalaf等(2000)用GC-MS分別在尿液及血液中的最低檢測標(biāo)準(zhǔn)分別為0.15 ng/mL和0.12 ng/mL。

4 毛細(xì)管區(qū)帶電泳法

當(dāng)傳統(tǒng)的液相色譜法分離的離子化樣品的分離與分析出現(xiàn)困難時,毛細(xì)管區(qū)帶電泳法(CE)的優(yōu)越性就顯示出來了,CE法適用于那些其分離效率可達(dá)幾百萬理論板塔數(shù)的檢測任務(wù)。Gausepohl等(1998)應(yīng)用CE技術(shù)檢測人尿中鹽酸克倫特羅的殘留,使用pH 3.3的磷酸鹽緩沖液,最低檢測限達(dá)到0.5 ng/mL,而且精確度和準(zhǔn)確度均已符合生物樣品中殘留物的檢測標(biāo)準(zhǔn)。王偉宇等(2008)采用小型化毛細(xì)管電泳-電化學(xué)檢測技術(shù)測定了豬尿和豬飼料中的克倫特羅、萊克多巴胺和沙丁胺醇, 檢測限為1.20×10-7~ 2.06×10-7g/mL,進(jìn)一步證實(shí)了CE法簡單且有效。CE法的主要優(yōu)點(diǎn)是靈活性大,操作簡單、重復(fù)性強(qiáng)、精度高,所需樣品量少,并且CE法對檢測中所需的緩沖液的組成和pH值、檢測用毛細(xì)管的種類和型號、以及檢測中的電場波形等都可以調(diào)節(jié),這些可調(diào)節(jié)的參數(shù)大大拓展了CE法的應(yīng)用范圍。但是,目前CE法在分析樣品過程中同樣也存著一些亟待解決的問題,檢測時間長和缺乏合適的檢測器是制約該法應(yīng)用的主要瓶頸,但不可否認(rèn)的是隨著這些困難的克服,CE法將會具有更高的研究價值和應(yīng)用前景。

5 酶聯(lián)免疫吸附法

目前,酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)(ELISA)被認(rèn)為是檢測鹽酸克倫特羅較高效的免疫分析方法。ELISA法的原理是利用抗原和抗體特異性結(jié)合和酶的高效催化作用,將辣根過氧化物酶與克倫特羅結(jié)合,形成酶與偶聯(lián)克倫特羅的復(fù)合物。將包被的抗體固定于載體上,使其與特異性的抗克倫特羅抗體結(jié)合,將酶偶聯(lián)克倫特羅和待測克倫特羅同時加入,二者會與克倫特羅抗體發(fā)生競爭性結(jié)合,經(jīng)過洗滌后加入底物,經(jīng)充分反應(yīng)后,可依據(jù)有色物的顏色變化程度來對待測克倫特羅進(jìn)行計(jì)量。如果兩者中待測克倫特羅數(shù)量多,那么被結(jié)合的酶偶聯(lián)克倫特羅數(shù)量則少,這樣有色物的量就少,最后可用比色法測定樣品中的克倫特羅含量(高彬文等,2009;胥傳來等,2005)。我國在使用ELISA法檢測鹽酸克倫特羅方面的研究起步較晚,但近幾年發(fā)展較快,目前采用單克隆抗體技術(shù)已成功開發(fā)出檢測試劑盒,在特異性方面與國外同類產(chǎn)品相當(dāng),并且檢測靈敏度可達(dá)到農(nóng)業(yè)部監(jiān)督檢測標(biāo)準(zhǔn)值0.5×10-9的要求。

6 生物傳感器技術(shù)

生物傳感器(BS)是近年來發(fā)展起來的一種可以用于分析檢測β-激動劑類物質(zhì)的高效的新型設(shè)備。BS是由生物活性物質(zhì)作為敏感元件再結(jié)合適當(dāng)?shù)膿Q能器及輸出顯示裝置所構(gòu)成的分析工具。BS法的原理是當(dāng)傳感器的分子識別部分與被識別物質(zhì)相接觸后,通過引發(fā)化學(xué)變化、光變化和熱變化,來直接誘導(dǎo)產(chǎn)生電信號,進(jìn)一步利用電學(xué)測量方法進(jìn)行檢測、控制和輸出結(jié)果的方法。1967年Updike等制出了第一個生物傳感器用于檢測葡萄糖。Traynor等(2003)采用表面等離子體共振生物傳感器對肝臟組織的β-激動劑類物質(zhì)進(jìn)行的檢測取得了令人滿意的效果。未來的生物傳感器需要與計(jì)算機(jī)緊密結(jié)合,能夠自動采集和處理數(shù)據(jù),更加科學(xué)準(zhǔn)確地呈現(xiàn)數(shù)據(jù),實(shí)現(xiàn)采樣、進(jìn)樣、顯示、分析等的自動化,同時,芯片技術(shù)將整合進(jìn)傳感器,以實(shí)現(xiàn)檢測系統(tǒng)的集成化。

7 生物芯片技術(shù)

生物芯片技術(shù)(biochip)是生命科學(xué)領(lǐng)域中迅速崛起的一項(xiàng)高新技術(shù),是在玻璃片、硅片等材料上固定樣本,通過微加工技術(shù)以實(shí)現(xiàn)對核酸、蛋白質(zhì)、化合物等準(zhǔn)確、快速、高通量的檢測(Wang等,2006;Walsh 和 Chang,2004)。 與傳統(tǒng)的檢測方法相比,生物芯片的突出優(yōu)點(diǎn)是能夠在短時間內(nèi)分析大量的被檢分子,如飼料中違規(guī)添加劑和獸藥殘留的檢測、微生物的檢測和動植基因突變的檢測等(Bertram等,2004)。目前的獸藥殘留蛋白質(zhì)免疫芯片檢測系統(tǒng),能夠在幾分鐘內(nèi)檢測出飼料、肉品、乳品中的添加劑殘留量。飼料或肉類中的違規(guī)添加劑一般是小分子化學(xué)物質(zhì),檢測時可用快速提取儀進(jìn)行提取,與抗體混合放置芯片上,通過抗原抗體發(fā)生競爭性免疫反應(yīng),再經(jīng)激光共聚焦掃描儀掃描,最后通過計(jì)算機(jī)自動判斷是否超標(biāo)(Wang 等,2006;Walsh 等 2004)。 目前此生物芯片系統(tǒng)可對包括β-激動劑、鏈霉素、磺胺二甲嘧啶等進(jìn)行檢測。

8 小結(jié)

目前,HPLC、GC-MS、CE 方法對 β-興奮劑的最低檢測限均在0.5 ng/g左右,并且檢測過程耗時長,必須要由專業(yè)人員來操作,所用的儀器價格昂貴,而且不能進(jìn)行現(xiàn)場檢測。而免疫學(xué)法中的ELISA法的最低檢測限為0.05 ng/g,靈敏度和精確度都符合農(nóng)業(yè)部的標(biāo)準(zhǔn),但假陽性率高是一直未能解決的難題,而且ELISA法也不能進(jìn)行現(xiàn)場檢測。因此,如果能找到一種檢測耗時短、準(zhǔn)確度高、靈敏度高、自動化水平很高、無需專業(yè)人員操作的檢測方法將具有非常廣闊的應(yīng)用前景,預(yù)計(jì)未來幾年開發(fā)這種檢測方法的研究必將成為熱點(diǎn)。

[1]安洪澤,張素霞,沈建忠,等.高效液相色譜法測定飼料中三種β-興奮劑[J].中國飼料,2008,2:34 ~ 38.

[2]高彬文,張素霞,梁永紅,等.化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測豬尿中萊克多巴胺殘留[J].中國畜牧獸醫(yī),2009,36 (8):27 ~ 29.

[3]賈強(qiáng),張振玲,王筱芬.“瘦肉精”毒性作用及檢測方法研究進(jìn)展[J].職業(yè)與健康,2005,21 (2):202 ~ 203.

[4]孔瑩,邱月明,李鵬,等.固相萃取氣相色譜-質(zhì)譜同時測定豬肉中4種β-激動劑類藥物殘留量[J].分析測試學(xué)報(bào),2006,25(2):63 ~ 66.

[5]李杰.瘦肉精殘留危害與動物性食品安全[J].中國飼料,2003,4:31~32.

[6]苗虹,鄒建宏,范賽,等.高效液相色譜-離子阱質(zhì)譜法測定尿液中β2-受體激動劑及 β2-受體阻斷劑[J].色譜,2010,28(6):572 ~ 578.

[7]王偉宇,張玉蓮,邢曉平,等.小型化毛細(xì)管電泳-電化學(xué)檢測法測定豬尿和豬飼料中的 β-興奮劑[J].色譜,2008,26:228 ~ 231.

[8]吳平谷,虞曉珍.氣相色譜-質(zhì)譜法同時測定動物尿樣中的4種β-興奮劑[J].色譜,2005,23(6):684 ~ 685.

[9]胥傳來,彭池方,郝凱,等.化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫方法檢測克倫特羅殘留[J].分析化學(xué),2005,33 (5):699 ~ 702.

[10]楊志凌,林映才.β-激動劑的作用機(jī)理及其在畜禽體內(nèi)的組織殘留[J].獸藥與飼料添加劑,2003,8:20 ~ 22.

[11]尹靖東,齊廣海,霍啟光.飼料中使用β-興奮劑的安全性評述[J].中國飼料,1998,20:6 ~ 8.

[12]湛嘉,俞雪鈞,李佐卿,等.豬尿中26種性激素與13種β2激動劑的同時測定[J].分析測試學(xué)報(bào),2009,28 (10):1133 ~ 1137.

[13]Abukhalaf I K,Deutsch D A,Parks B A,et al.Comparative analytical quantitation of clenbuterol in biologicalmatries using GC-MS and EIA[J].Biomed Chromatogr,2000,14:99 ~ 105.

[14]Adrin C E F,Leslie C D.Dermination of β-agonists in liver and retina by liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J].Journal of AOAC international,2005,88(1):61 ~ 69.

[15]Batioens P,Courtheyn D,Huber F,et al.Gas Chromatographic Tandem Mass Spectrometric analysis of clenbuterolresidues in faeces[J].Journal of Chromatography A,1996,750:(1 ~ 2):133 ~ 139.

[16]Bertram G K,Angelika S,Richard D,et al.Automated microarray system for the simultaneous detection of antibiotics in milk[J].Anal Chem,2004,76:646~654.

[17]Biancotto G,Angeletti R,Traldi P,et al.Positive chemical ionization and tandem mass spectrometric fragmentation for he gaschromatographic analysis of agonists using the ion trap technique[J].J Mass Spectrom,1999,34:1346 ~1353.

[18]Cheng J C,Lee W C,Wu Y T,et al.Distribution of blood-muscle for clenbuterol in rat using microdialysis[J].Int J Pharm,2009,372(1/2):91 ~ 96.

[19]Fente C A,Vazquez B I,F(xiàn)ranco C,et al.Determinationof clenbuterol residues in bovine hair by using diphasicdialysis and gas chromatographymass spectrometry[J].Journal of Chro-matography B,1999,726:133 ~ 139.

[20]Gausepohl C,Blaschke G.Stereoselective determination of clenbuterol in human urine by capillary electrophoresis[J].Journal of Chromatography B:Biomedical Sciences and Applications,1998,713:443 ~ 446.

[21]Jose B,Patricia M,Miguel M.Dtermination of clenbuterol,tactopamine and zilpaterol in liver and urine by liquid chromatography tandem mass spectrometry[J].Analytica Chimica Acta,2005,529:199 ~ 205.

[22]Martin Y.Influence of the storage conditions on the concentration of clenbuterol in cattle urine samples[J].Analytica Chimica Acta,2002,452(1):115~122.

[23]Traynor I M,Crooks S R H,Bowers J,et al.Detection of multi-β-agonist residues in liver matrix by use of a surface plasma resonance biosensor[J].Analytica Chimica Acta,2003,483:187 ~ 191.

[24]Walsh D P,Chang Y T.Recent Advances in Small Molecule Microarrays:Applications and Technology[J].Comb Chem High Throughput Screening,2004,7:557 ~ 564.

[25]Wang J,Uttamchandani M,Li P S,et al.Activitybased high-throughput profiling of metalloprotease inhibitors using small molecule microarrays[J].Chem Commun,2006,12:717 ~ 719.

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