文穎娟,苗海東,張喜德,許愛英,王 江
潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis,UC)又稱慢性非特異性潰瘍性結(jié)腸炎,是一種病因不明的直腸和結(jié)腸炎性病變,具有病程漫長、反復發(fā)作、并發(fā)癥多、預后較差等特點,臨床表現(xiàn)為腹痛、腹瀉、伴濃液黏血便、里急后重等。現(xiàn)代研究表明,UC主要由多種原因?qū)е聶C體和腸道免疫功能紊亂,產(chǎn)生炎癥反應,形成潰瘍造成;病變限于黏膜及黏膜下層[1]。而葛根芩連湯(組成:葛根 15g,甘草 6g,黃芩 9g,黃連9g)是中藥治療腹瀉的經(jīng)典方劑,它早在張仲景·《傷寒論》中就用來治療濕熱所致的腹瀉和痢疾。
本實驗擬通過建立UC大鼠模型,觀察通過葛根芩連湯及其拆方干預實驗性UC大鼠結(jié)腸組織中MTL、VIP的效用,進而探討葛根芩連湯對實驗性UC大鼠MTL、VIP的影響機制,以期探索葛根芩連湯干預UC的作用機制以及君臣配伍在組方中的作用。
葛根芩連湯(組成:葛根 15g,甘草 6g,黃芩 9g,黃連 9g,葛根、甘草、黃芩、黃連的比例為 5∶2∶3∶3)、葛根芩連湯去葛根方(組成:甘草 6g,黃芩 9g,黃連9g,甘草、黃芩、黃連的比例為 2∶3∶3)、葛根芩連湯去黃連方(組成:葛根 15g,甘草 6g,黃芩9g,葛根、甘草、黃芩的比例為5∶2∶3)、葛根芩連湯去葛根和黃連方(甘草 6g,黃芩 9g,甘草、黃芩的比例為2∶3)、葛根芩連湯去黃芩方(組成:葛根 15g,甘草 6g,黃連 9g,葛根、甘草、黃連的比例為 5∶2∶3)、葛根芩連湯去甘草方(組成:葛根 15g,黃芩 9g,黃連 9g,葛根、黃芩、黃連的比例為5∶3∶3),以上中藥均購自陜西省咸陽市和諧大藥房,在陜西中醫(yī)學院中藥制劑室按常規(guī)煎法熬制成湯液,并分別濃縮成含生藥4.07g/ml、2.50g/ml、3.13g/ml、1.57g/ml、3.13g/ml、3.44g/ml的濃縮藥液備用。
健康SD大鼠(SPF級)120只,雌雄各半,體重180~220g,由陜西省西安市西安交通大學醫(yī)學院實驗動物中心提供(許可證編號 SCXK(陜)2007-001。給予基礎飼料適應性喂養(yǎng)1周,隨機分為A組(正常組)、B組(病理組)、C組(葛根芩連湯全方組)、D組(葛根芩連湯去葛根組)、E組(葛根芩連湯去黃連組)、F組(葛根芩連湯去葛根和黃連組)、G組(葛根芩連湯去黃芩組)、H組(葛根芩連湯去甘草組),每組各15只,各組體重統(tǒng)計學比較無顯著差異。
5%2-4-6TNBS購自上海達瑞化學品公司;乙醇、水合氯醛均購自湖北大學化工廠;碘125I胃動素放射免疫分析藥盒、碘125I血管活性腸肽放射免疫分析藥盒均購自北京普爾偉業(yè)生物科技有限公司。TG16-W型微量高速離心機購自湘儀離心機儀器有限公司;HH.W21.H20電熱恒溫水箱購自天津斯泰特儀器有限公司;SN-697全自動雙探頭放射免疫γ計數(shù)儀(上海原子核研究所日環(huán)儀器一廠)。
基礎飼料適應性喂養(yǎng)1周后,A組繼前喂養(yǎng)。其余各組參考文獻[2、3]采用三硝基本磺酸(TNBS)/乙醇法建立UC模型;禁食24 h(不禁水),10%水合氯醛腹腔麻醉,將TNBS 100 mg/kg+50%乙醇按照1∶1的比例混合,按1 ml/只用橡膠輸液管由大鼠肛門輕緩注入深約8 cm腸腔內(nèi)留置,次日即出現(xiàn)精神差、濕便等潰瘍性結(jié)腸炎癥狀,表明造模成功。
造模后各組大鼠等條件下飼養(yǎng),按成人每天1劑的藥量換算為大鼠每天每千克體重的用量,即給藥劑量均相當于臨床用量的6.25倍。具體用量如下:C組按4.07g/kg/d藥物灌服葛根芩連湯水煎液,D組按2.50g/kg/d藥物灌服葛根芩連湯去葛根水煎液,E組按3.13g/kg/d藥物灌服葛根芩連湯去黃連水煎液,F(xiàn)組按1.57g/kg/d藥物灌服葛根芩連湯去葛根和黃連水煎液,G組按3.13g/kg/d藥物灌服葛根芩連湯去黃芩水煎液,H組按3.44g/kg/d藥物灌服葛根芩連湯去甘草水煎液(注:考慮到藥物損失最后一位小數(shù)采用進位法,如C組計算值4.0625灌胃按4.07計算用藥量,其他各組均同),B組即模型組按每10 g體重0.2 ml灌服蒸餾水。7組均每天灌服2次,連續(xù)4周后停藥。各組用藥過程中觀察大鼠飲食、精神、活動度、飲水、濕便多少等情況。
各組大鼠腹腔麻醉后斷頸處死,剖開腹腔,摘取距回盲部2cm處的結(jié)腸組織100mg,縱行剖開,4℃生理鹽水沖洗,濾紙吸干,盡快加入1ml生理鹽水碾磨,制成 10%的組織勻漿,4℃3000r/min離心15min,留取上清液,-20℃保存待測。
放射免疫方法檢測結(jié)腸組織中MTL、VIP的含量,檢測方法參照試劑盒說明書,其單位為 pg/ml。
采用統(tǒng)計軟件SPSS10.0處理,實驗數(shù)據(jù)均以平均值±標準差(珋x±s)表示,組間均數(shù)比較采用單因素方差分析。
連續(xù)給藥4周后,各組用藥過程中觀察大鼠情況簡述如下:A組(正常組)大鼠精神活躍、動作敏捷、飲水、飲食良好、體重強加明顯。B組(模型組)大鼠懶動、扎堆、拱背、飲水多、飲食較其他各組少、體重沒有增加甚至減輕、腹部有體毛脫落、大便為黏液稀便。C組大鼠精神較好、飲水、飲食正常、體重有所增加、給藥1周后黏液稀便消失。其他各組癥狀差別不明顯,與C組比較其他各組大鼠精神差、飲水多、飲食少、活動差、體重增加不明顯、稀便程度不一。
表1顯示,與A組(正常組)比較,B組、C組、D組、E組、F組、G組、H組實驗大鼠結(jié)腸組織中MTL的含量均明顯高于 A組;與 B組(模型組)比較,C組、D組、E組、F組、G組、H組實驗大鼠結(jié)腸組織中MTL的含量顯著降低(C組 P<0.01,D組 P<0.05,E 組 P <0.05,F(xiàn)組 P <0.05,G 組 P <0.01,H組 P<0.01)。
表1顯示,與A組(正常組)比較,B組、C組、D組、E組、F組、G組、H組實驗大鼠結(jié)腸組織中 VIP的含量均明顯高于 A組;與 B組(模型組)比較,C組、D組、E組、F組、G組、H組實驗大鼠結(jié)腸組織中 VIP的含量顯著降低(C組 P<0.01,D組 P<0.05,E 組 P <0.05,F(xiàn)組 P <0.05,G 組 P <0.01,H組 P<0.01)。
胃動素(MTL)是由十二指腸黏膜分泌、由22個氨基酸殘基組成的多肽。作為消化道運動激素,MTL直接作用于消化道平滑肌的細胞受體,MTL可引起胃和上部小腸產(chǎn)生消化間期綜合肌電Ⅲ相,誘發(fā)強力收縮和小腸明顯的分節(jié)運動,這種運動周期性發(fā)生,每次持續(xù)約25 min,并向小腸遠端傳播,從而縮短小腸傳遞時間,并將胃腸內(nèi)殘渣、脫落的細胞碎片和細菌等清除干凈,起著“清道夫”的作用。MTL可引起十二指腸、回腸、結(jié)腸的收縮運動,使結(jié)腸的壓力和電活動增強。胃動素的水平受進餐和進餐種類以及胃腸道消化過程和消化期間胃容量的擴大,小腸活動狀態(tài)和十二指腸內(nèi)酸度等其他消化道激素的影響。UC病理狀態(tài)下MTL升高可能由于結(jié)腸黏膜炎癥作用使下消化道蠕動增快,機體為調(diào)節(jié)內(nèi)外平衡,胃小腸以適應結(jié)腸運動,故MTL分泌和釋放增加[4]。
表1 各組UC大鼠MTL和VIP的含量(珋x±s)
血管活性腸肽(Vasoactiveintestinalpeptide,VIP)由said51等[5]于1970年從豬小腸中分離出來的一種由28個氨基酸組成的直鏈肽,屬胰高血糖素、胰泌素家族。在生物體內(nèi),它既作為胃腸道激素,又是神經(jīng)肽。VIP能促進胰腺的水分及碳酸氫鹽分泌,有利于胃腸黏膜黏液屏障的形成和修復,并可刺激腸液的分泌,抑制胃酸及胃泌素分泌,從而降低消化性潰瘍的發(fā)生率,促進潰瘍的修復。VIP與胃腸運動主要抑制性介質(zhì)之一的NO關系密切。VIP能促進NO合成引起環(huán)行肌舒張,NO則能使VIP易于釋放。VIP不僅可抑制胃腸的運動,而且可降低胃腸的緊張。最近有研究揭示,VIP是神經(jīng)系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)之間相互作用的一種信號分子,在局部黏膜炎癥時可促進VIP的產(chǎn)生[5]。
綜合分析本實驗結(jié)果,病理組大鼠結(jié)腸組織中MTL、VIP均明顯高于其他各組。其中C組(葛根芩連湯全方組)、G組(葛根芩連湯去黃芩組)、H組(葛根芩連湯去甘草組)對大鼠結(jié)腸組織中 MTL、VIP的影響最明顯,與C組(葛根芩連湯全方組)對大鼠結(jié)腸組織中 MTL、VIP的影響比較,E組(葛根芩連湯去黃連組)、F組(葛根芩連湯去葛根和黃連組)對大鼠結(jié)腸組織中MTL、VIP的影響不明顯?,F(xiàn)代藥理研究表明,在降低腸道推進率和減少UC大鼠炎性指數(shù)的影響中,以黃連和葛根作用為主,黃芩能拮抗黃連的作用,炙甘草與黃芩黃連配伍后能增強黃連的作用[6,7]。結(jié)合本實驗對 UC大鼠結(jié)腸組織中MTL、VIP影響最明顯的藥組是葛根、黃連、炙甘草的組合。葛根芩連湯對UC大鼠MTL的影響可能是通過對結(jié)腸黏膜炎癥的修復使消化道蠕動減緩,胃小腸為適應結(jié)腸運動,隨之減少 MTL分泌和釋放;葛根芩連湯通過修復UC大鼠結(jié)腸組織中結(jié)腸黏膜炎癥,使結(jié)腸黏膜炎癥減少,VIP的分泌隨之減少。
中醫(yī)認為,潰瘍性結(jié)腸炎是以胃腸氣機阻滯、濕熱濁邪堆積為主的泄瀉,臨床以恢復胃腸運動、促進濁邪排除為治療目的。葛根芩連湯方中的君藥葛根輸肌以散,調(diào)暢氣機,緩解腹痛,并促進腸道運動以排泄糟粕;黃連祛除濕熱之邪,以解除壅滯于腸道的濁邪,緩解腸道阻力亦促進腸道運動;黃芩以祛除肝膽濕熱為主,此處以去除筋膜阻滯,促進胃腸筋膜組織運動,進而協(xié)助胃腸運動;甘草補益中氣,為腸道的運動提供物質(zhì)基礎,又和調(diào)諸藥。全方中君、臣藥物的配伍作用尤為突出,在方中占重要地位。結(jié)合本實驗葛根、黃連、炙甘草的組合能夠很好地恢復胃腸運動,清除病理產(chǎn)物和結(jié)腸組織炎癥,促進濁邪排除。這3味藥主要歸脾胃經(jīng),而“脾主肌肉”,故葛根、黃連、炙甘草的組合以及以此為主組成的葛根芩連湯可能是通過作用于結(jié)腸肌層,調(diào)節(jié)MTL、VIP的分泌,進而修復結(jié)腸黏膜,恢復胃腸動力,以治療潰瘍性結(jié)腸炎。
[1] 鄭 禮,高振強,王淑仙.大鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型的實驗研究[J].中國藥理學通報,1998,14(4):370-372.
[2] Zheng L,Gao ZQ,Wang SX.A chronic ulcerative colitis model inrats.World J Gastroenterol,2000,6:150.
[3] 王 皓,歐陽欽,胡仁偉.三硝基苯磺酸結(jié)腸炎動物模型的建立[J].胃腸病學,2001,6(1):7.
[4] 黃裕新,許才級,馮英明,等.胃動素在人體13種體液中含量分析[J].中華消化雜志,1994,14(2):96-95.
[5] Said SI,Mutt V polypeptide with broad activity:isolation from small intesti Seienee,1970;169(951):1217-8.
[6] 王 磊,譚曉梅,王 莉,等.葛根芩連湯中黃連不同配伍對G6PD缺陷的痢疾桿菌感染大鼠紅細胞滲透脆性的影響[J].中藥藥理與臨床,2009,25(2):1-2.
[7] 羅佳波,譚曉梅,余林中,等.葛根芩連湯配伍規(guī)律的研究[J].中草藥,2005,36(4):512-518.