吳亞楠,柳鵬,李強(qiáng),姜傳俊,李華

(大連海洋大學(xué)農(nóng)業(yè)部海洋水產(chǎn)增養(yǎng)殖學(xué)重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室,遼寧大連116023)

復(fù)方中草藥對(duì)仿刺參免疫力和抗病力的影響

吳亞楠,柳鵬,李強(qiáng),姜傳俊,李華

(大連海洋大學(xué)農(nóng)業(yè)部海洋水產(chǎn)增養(yǎng)殖學(xué)重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室,遼寧大連116023)

將以黃芪、黨參為主藥并加入另外5味中草藥所配伍的復(fù)方中草藥粉碎制劑,以質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為0%(對(duì)照組)、0.5%、1.5%和2.5%的劑量添加于基礎(chǔ)飼料中,連續(xù)投喂仿刺參Apostichopus japonicus 37 d,在試驗(yàn)開始后第1、2、3、4周采樣,測(cè)定仿刺參的腸、觸手、體壁、肌肉和體腔液中的抗菌活力及體腔細(xì)胞的吞噬活性;于試驗(yàn)開始后第4周,用仿刺參“化皮病”病原菌黃海希瓦氏菌Shewanella marisflavi以3.7×108個(gè)/mL的濃度在每頭仿刺參背部注射0.1 mL的菌懸液,每天觀察記錄死亡個(gè)體癥狀,統(tǒng)計(jì)死亡率,計(jì)算相對(duì)保護(hù)率(共觀察記錄7 d)。結(jié)果顯示:各組的抗菌活力均隨著用藥時(shí)間的延長(zhǎng)、用藥濃度的加大而升高,總體趨勢(shì)表現(xiàn)為2.5%添加組＞1.5%添加組＞0.5%添加組＞對(duì)照組;各用藥組仿刺參的體腔細(xì)胞吞噬能力均隨著用藥時(shí)間的延長(zhǎng)呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì),第2、3周達(dá)峰值,總體趨勢(shì)表現(xiàn)為1.5%添加組＞2.5%添加組＞0.5%添加組＞對(duì)照組;攻毒試驗(yàn)結(jié)果顯示,對(duì)照組仿刺參3 d后全部死亡,第7天各用藥組相對(duì)保護(hù)率依次為1.5%添加組＞0.5%添加組＞2.5%添加組,分別為30.0%、20.0%和10.0%。由此表明,該復(fù)方中草藥可以顯著提高仿刺參的免疫力和抗病力,以1.5%添加劑量組的效果最佳。

復(fù)方中草藥;仿刺參;吞噬作用;抗菌活力;相對(duì)保護(hù)率

海參不僅營(yíng)養(yǎng)豐富,且具有較高的藥用價(jià)值,是海洋中重要的食物和藥物資源[1]。中國(guó)在20世紀(jì)90年代掀起了仿刺參養(yǎng)殖熱潮,隨著養(yǎng)參業(yè)集約化程度的不斷加深,養(yǎng)殖環(huán)境的日益惡化,相繼出現(xiàn)了仿刺參免疫力下降、幼參生長(zhǎng)慢、成活率低等問(wèn)題,嚴(yán)重制約了該產(chǎn)業(yè)的持續(xù)穩(wěn)定發(fā)展[2]。近年來(lái)應(yīng)用免疫增強(qiáng)劑來(lái)提高水產(chǎn)動(dòng)物機(jī)體免疫力的研究應(yīng)運(yùn)而生,現(xiàn)已證明有200余種中草藥含有多種免疫活性物質(zhì),這些免疫活性物質(zhì)能調(diào)節(jié)動(dòng)物機(jī)體的免疫功能[3],中草藥已被廣泛地應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖中。目前有關(guān)海參免疫增強(qiáng)劑方面的研究已有一些報(bào)道,如向海參Holothuria glaberrima體腔中注射一定劑量的脂多糖能增強(qiáng)體腔細(xì)胞的吞噬活性[4];飼料中添加甘草酸可以提高仿刺參的非特異性免疫力和抗病力[5];穿心蓮、大青葉、金銀花等復(fù)方中草藥可以有效抑制或殺滅仿刺參病原菌,增強(qiáng)仿刺參非特異性免疫功能[6]。本試驗(yàn)中,作者以黃芪和黨參為主藥并加入另外5味中草藥制成復(fù)方中草藥制劑,研究了本復(fù)方中草藥制劑對(duì)仿刺參各組織的抗菌活力、體腔細(xì)胞吞噬力和機(jī)體抗病力的影響及作為仿刺參免疫增強(qiáng)劑的可行性,旨在將中草藥用于仿刺參養(yǎng)殖中,為仿刺參的綠色健康養(yǎng)殖提供保障。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗(yàn)用仿刺參Apostichopus japonicus購(gòu)于大連灣海珍品養(yǎng)殖場(chǎng),體質(zhì)量為3～5 g。將仿刺參置于PVC水槽(50 cm×35 cm×20 cm)內(nèi)暫養(yǎng)2周,每天投喂基礎(chǔ)飼料(以海藻粉為主),以仿刺參出現(xiàn)有規(guī)律攝食為馴化完成指標(biāo)。

復(fù)方中草藥配方為:以黃芪Astragalus menbranaceus、黨參Radix codonopsis pilosulae為主藥,甘草Glycyrrhiza uralensis、當(dāng)歸Angelica sinensis等5味中草藥為輔藥。所用中草藥購(gòu)自大連奇運(yùn)生大藥房,粉碎后過(guò)100目篩。將粉碎后的中草藥分別以質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%、1.5%、2.5%的比例添加到基礎(chǔ)飼料中,再用80目篩絹在海水中過(guò)濾后投喂。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)分組 試驗(yàn)分為基礎(chǔ)餌料組(對(duì)照組)和0.5%、1.5%、2.5%復(fù)方中草藥添加組,每組設(shè)3個(gè)平行,每個(gè)平行組放養(yǎng)30頭仿刺參。每天上午換水,下午投喂,所用海水為大連海洋大學(xué)愛尼養(yǎng)殖場(chǎng)的過(guò)濾海水,每次換水量約為總水量的1/3,連續(xù)充氣。

1.2.2 抗菌活力的測(cè)定 試驗(yàn)開始后,每周取樣1次,每次每組取仿刺參2頭,冰盤刨取觸手、體壁、肌肉和腸,收集體腔液。將所取的各組織稱重,按1∶10加入冷PBS緩沖液(pH為7.4)進(jìn)行勻漿,然后于4℃下以7 000 r/min離心20 min,取上清液測(cè)定。采用改進(jìn)的Hultmark等[7-8]的方法進(jìn)行測(cè)定。將樣品加入96孔酶標(biāo)板中,10 μL/孔,再往孔內(nèi)移加90 μL 0.1 mol/L的磷酸鉀緩沖液(pH 6.4),在490 nm下測(cè)定吸光值A(chǔ)1;然后加入100 μL磷酸鉀緩沖液,在490 nm下測(cè)定其吸光值A(chǔ)2。系統(tǒng)誤差(K)的計(jì)算公式為

將待測(cè)液(10 μL/孔)移入酶標(biāo)板相應(yīng)的孔后,向孔內(nèi)加入90 μL 0.1 mol/L的磷酸鉀緩沖液(pH為6.4),在630 nm下測(cè)定其吸光值A(chǔ)K;取出96孔板,向相應(yīng)列的孔內(nèi)分別移加100 μL大腸桿菌懸液,搖勻后在630 nm下測(cè)定其吸光值A(chǔ)0;在37℃下溫育30 min后,在490 nm下測(cè)定吸光值A(chǔ)?？咕盍?Ua)按下列公式計(jì)算:

(如果A0≤A,Ua值均以0作為結(jié)果)。

1.2.3 吞噬活性的測(cè)定 試驗(yàn)開始后每周取樣1次,每次每組取仿刺參2頭,于背部注射0.1 mL用無(wú)菌海水配制的干酵母Saccharomyces siccum細(xì)胞懸液(0.1 mg/mL),4 h后用注射器抽取體腔液滴片并計(jì)數(shù)。按下式公式計(jì)算吞噬率(Phagocytic percentage)和吞噬指數(shù)(Phagocytic index):

1.2.4 攻毒感染試驗(yàn) 感染用黃海希瓦氏菌Shewanella marisflavi為仿刺參“化皮病”的病原菌[9],由本實(shí)驗(yàn)室分離保存。投喂中草藥4周后,在仿刺參的背部注射黃海希瓦氏菌菌懸液(濃度為3.7×108個(gè)/mL,該濃度是依據(jù)本課題組前期的試驗(yàn)研究結(jié)果擬定的[9]),注射劑量為0.1 mL,每組注射10頭;以注射等量的無(wú)菌生理鹽水作為空白對(duì)照。觀察并記錄仿刺參死亡個(gè)體的癥狀,統(tǒng)計(jì)死亡率,依下式計(jì)算仿刺參的相對(duì)保護(hù)率(Relative percent survival)。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析,以P＞0.05表示相關(guān)性不顯著,以P＜0.05表示相關(guān)性顯著,并進(jìn)行Duncan多重比較。

2 結(jié)果

2.1 復(fù)方中草藥對(duì)仿刺參各組織抗菌活力的影響

2.1.1 腸 從圖1可見:隨著投喂時(shí)間的延長(zhǎng),不同濃度中草藥組仿刺參腸組織的抗菌活力均表現(xiàn)出穩(wěn)步增長(zhǎng)的趨勢(shì)。對(duì)4次采樣結(jié)果進(jìn)行方差分析,結(jié)果表明,中草藥對(duì)仿刺參腸組織抗菌活力的影響均顯著(P＜0.05),1.5%和2.5%添加組均顯著高于0.5%添加組和對(duì)照組(P＜0.05), 1.5%添加組的抗菌活力后期增長(zhǎng)迅速,2.5%添加組在整個(gè)投喂期間其腸組織抗菌活力最高。

2.1.2 觸手 從圖1可見:隨著投喂時(shí)間的延長(zhǎng),不同濃度中草藥組仿刺參觸手的抗菌活力均有小幅增長(zhǎng),其中2.5%添加組呈先升高后降低的趨勢(shì),并于第3周達(dá)峰值。方差分析結(jié)果表明,中草藥對(duì)仿刺參觸手抗菌活力的影響均顯著(P＜0.05)。1.5%和2.5%添加組均顯著高于0.5%添加組和對(duì)照組(P＜0.05),其中2.5%添加組更為顯著(P＜0.05)。

2.1.3 體壁 從圖1可見:隨著投喂時(shí)間的延長(zhǎng),不同濃度中草藥組仿刺參體壁抗菌活力逐漸呈小幅上升趨勢(shì)。經(jīng)方差分析,中草藥對(duì)仿刺參體壁抗菌活力的影響均顯著(P＜0.05),2.5%添加組均顯著高于其它試驗(yàn)組(P＜0.05)。

2.1.4 肌肉 從圖1可見:投喂期間,不同濃度中草藥組仿刺參肌肉的抗菌活力均高于對(duì)照組。方差分析結(jié)果表明,中草藥對(duì)仿刺參肌肉抗菌活力的影響均顯著(P＜0.05)。2.5%添加組顯著高于其它各組(P＜0.05),且隨著投喂時(shí)間的延長(zhǎng)無(wú)明顯的波動(dòng)。

2.1.5 體腔液 從圖1可見:前三周采集的樣品,各試驗(yàn)組仿刺參體腔液中的抗菌活力均隨中草藥添加量的升高而升高;第4周,各試驗(yàn)組體腔液中抗菌活力的大小依次為2.5%組＞0.5%組＞1.5%組＞對(duì)照組。方差分析結(jié)果表明,中草藥對(duì)仿刺參體腔液抗菌活力的影響均顯著(P＜0.05)。

圖1 復(fù)方中草藥對(duì)仿刺參腸、觸手、體壁、肌肉和體腔液抗菌活力的影響Fig.1 Influence of compound Chinese herbal medicine on antibacterial activity in intestine,tentacle, body wall,muscle,and coelomic fluid of sea cucumber Apostichopus japonicus

2.2 復(fù)方中草藥對(duì)仿刺參體腔細(xì)胞吞噬活性的影響

由圖2可知,投喂復(fù)方中草藥可明顯提高仿刺參體腔細(xì)胞的吞噬率,且隨著時(shí)間的延長(zhǎng),各濃度中草藥添加組的仿刺參體腔細(xì)胞吞噬率均表現(xiàn)為先升高后降低的趨勢(shì),于第2周達(dá)到峰值。方差分析結(jié)果顯示,各濃度組復(fù)方中草藥對(duì)仿刺參體腔細(xì)胞吞噬率均有顯著影響(P＜0.05)。對(duì)照組始終保持較低水平。第1周和第2周,1.5%添加組顯著高于其它各組(P＜0.05);第3周,2.5%組最高;第4周,1.5%和2.5%組顯著高于0.5%組和對(duì)照組(P＜0.05)。

由圖2可知,各試驗(yàn)組仿刺參體腔細(xì)胞的吞噬指數(shù)隨時(shí)間延長(zhǎng),均表現(xiàn)出一定的波動(dòng)趨勢(shì),但規(guī)律不明顯,而對(duì)照組較平穩(wěn)。方差分析結(jié)果表明,復(fù)方中草藥對(duì)仿刺參體腔細(xì)胞吞噬指數(shù)的影響均顯著(P＜0.05)。除第3周,0.5%添加組的吞噬指數(shù)較高外,第1周、第2周和第4周1.5%添加組的吞噬指數(shù)都顯著高于其它組(P＜0.05)。

2.3 攻毒試驗(yàn)

用含中草藥復(fù)方制劑的飼料投喂仿刺參4周后,再用黃海希瓦氏菌對(duì)各組仿刺參進(jìn)行人工感染。結(jié)果表明:第1天,對(duì)照組仿刺參表現(xiàn)為附著能力差,蜷縮在槽底,而3個(gè)不同濃度中草藥添加組的仿刺參仍有良好的活動(dòng)性,幾乎全附著在水槽側(cè)壁;對(duì)照組仿刺參在感染3 d后全部死亡,而攝食添加中草藥飼料的各組仿刺參死亡率較對(duì)照組均有所降低,復(fù)方中草藥對(duì)仿刺參相對(duì)保護(hù)率的影響結(jié)果見圖3。方差分析結(jié)果顯示,復(fù)方中草藥對(duì)仿刺參免疫保護(hù)率的影響顯著(P＜0.05)。感染第1天,0.5%添加組免疫保護(hù)率最低,為33.3%;第2天,2.5%添加組免疫保率小于其它2個(gè)添加組;第3天,1.5%添加組為30%并持續(xù)至最后,各組免疫保護(hù)率大小依次為0.5%添加組＞2.5%添加組＞1.5%添加組;第6天,各組免疫保護(hù)率均趨于平穩(wěn)并持續(xù)至試驗(yàn)結(jié)束,1.5%添加組＞0.5%添加組＞2.5%添加組,分別為30%、20%和10%。

圖2 復(fù)方中草藥對(duì)仿刺參體腔細(xì)胞的吞噬率和吞噬指數(shù)的影響Fig.2 Influence of compound Chinese herbal medicine on phagocytic percentage,and phagocytic index of coelomocytes in the sea cucumber

圖3 復(fù)方中草藥對(duì)仿刺參免疫保護(hù)率的影響Fig.3 Influence of compound Chinese herbal medicine on RPP of the sea cucumber

3 討論

本試驗(yàn)中按照中醫(yī)學(xué)的理論以黃芪、黨參為主藥,輔以甘草、當(dāng)歸,又以具抗菌、抗病毒等作用的3味藥佐之。結(jié)果表明,該中草藥復(fù)方制劑不僅可以提高仿刺參的非特異性免疫力,而且還可以提高仿刺參的抗病力,說(shuō)明該中草藥復(fù)方組方合理,效果顯著,可以在仿刺參養(yǎng)殖中推廣使用。

免疫促進(jìn)劑是指具有促進(jìn)或誘發(fā)宿主防御反應(yīng)、增強(qiáng)生物機(jī)體抗病能力的一類物質(zhì)。很多研究表明,多糖類[10-11]、外源凝集素[12]都可以作為海參的免疫增強(qiáng)劑,益生菌可以提高仿刺參幼參的消化酶活性和成活率,并有促生長(zhǎng)作用[13]。中草藥具有成本低、藥效好、無(wú)殘留的特點(diǎn),可作為免疫增強(qiáng)劑添加在仿刺參飼料中,對(duì)于提高仿刺參的非特異性免疫力、減少疾病的發(fā)生有一定作用。如孟慶大等[14]針對(duì)仿刺參腐皮綜合征篩選出由當(dāng)歸、川芎、刺五加、穿心蓮、大蒜、甘草等8味中藥組成的中草藥免疫增強(qiáng)劑,其具有較好的免疫增強(qiáng)作用。經(jīng)過(guò)前期篩選,本試驗(yàn)中設(shè)計(jì)了一組中藥復(fù)方,其主藥之一為黃芪。多糖是黃芪的主要活性成分之一,另外還含有黃酮、膽堿、氨基酸、蔗糖、微量葉酸及微量元素等物質(zhì)[15]。劉紅柏等[16]的研究證實(shí),黃芪能夠不同程度地增強(qiáng)史氏鱘的非特異性免疫力;而黃芪皂苷在抗氧化、抗衰老、抗腫瘤及增強(qiáng)免疫等方面也有顯著活性[17]。郭文婷等[18]以黃芪為主藥,配以霪羊藿、黨參、大黃等中草藥添加到飼料中投喂對(duì)蝦,發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)組蝦酚氧化酶、過(guò)氧化氫酶和抗菌活力都顯著高于對(duì)照組。

抗菌活力是水產(chǎn)動(dòng)物非特異性免疫的一個(gè)重要指標(biāo),能夠綜合反映機(jī)體應(yīng)對(duì)外來(lái)刺激時(shí)產(chǎn)生抗菌物質(zhì)的活性,也是衡量免疫功能和機(jī)體狀態(tài)的指標(biāo),反映了機(jī)體對(duì)外源微生物侵染的防御能力[19]。本試驗(yàn)中以黃芪、黨參為主藥投喂刺參,結(jié)果發(fā)現(xiàn):該復(fù)方可顯著提高仿刺參各組織的抗菌活力,其中腸組織中的抗菌活力提高幅度最為明顯,且各組織的抗菌活力以2.5%添加組的最高,1.5%組次之,而對(duì)照組在試驗(yàn)過(guò)程中始終處于相對(duì)較低的水平?？v觀整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程,隨著試驗(yàn)時(shí)間的延長(zhǎng),每組仿刺參各組織的抗菌活力均呈持續(xù)增長(zhǎng)趨勢(shì),說(shuō)明所用復(fù)方中草藥添加劑可明顯增強(qiáng)機(jī)體對(duì)外源微生物的防御能力,增進(jìn)仿刺參的非特異性免疫功能。

體腔細(xì)胞在抵御外來(lái)異物的侵入過(guò)程中顯得極為重要[20],體腔細(xì)胞的吞噬作用是機(jī)體免疫防御的主要手段[21]。中草藥對(duì)細(xì)菌和病毒的作用機(jī)理表現(xiàn)在,一部分中草藥是直接抵制作用于細(xì)菌和病毒,而其它大多數(shù)中草藥是增強(qiáng)器官組織的屏障防御及細(xì)胞的吞噬功能,對(duì)機(jī)體的機(jī)能紊亂進(jìn)行調(diào)整和增強(qiáng)機(jī)體對(duì)病害刺激的抵抗力[22]。Santiago等[4]向海參Holothuria glaberrima體腔中注射一定劑量的脂多糖,能增強(qiáng)體腔細(xì)胞的吞噬活性。Sun等[23]研究了黃芪多糖對(duì)仿刺參免疫的影響,結(jié)果表明,黃芪多糖能促進(jìn)仿刺參體腔細(xì)胞的吞噬能力。本試驗(yàn)中所用復(fù)方中草藥是以黃芪為主藥,經(jīng)過(guò)4周投喂,可明顯提高仿刺參體腔細(xì)胞的吞噬能力,這與Sun等[23]的研究結(jié)果相一致。仿刺參體腔細(xì)胞吞噬率的顯著增加是仿刺參免疫能力增強(qiáng)的重要標(biāo)志。簡(jiǎn)紀(jì)常等[24]也證實(shí),以黃芪為主藥,當(dāng)歸為輔藥配伍的中藥方劑,能明顯提高建鯉的吞噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的數(shù)量及血清中溶菌酶的活力。本試驗(yàn)結(jié)果表明,1.5%添加組效果最為明顯,投喂第2周中草藥各濃度組的仿刺參體腔細(xì)胞吞噬率均達(dá)峰值,各組仿刺參的體腔細(xì)胞吞噬力隨著時(shí)間的延長(zhǎng)先升高、后降低至平穩(wěn)。仿刺參體腔細(xì)胞的吞噬能力在第3周開始下降并保持平穩(wěn),其原因可能與長(zhǎng)時(shí)間投喂免疫增強(qiáng)劑有關(guān)。Chang等[25]認(rèn)為,在持續(xù)投喂免疫增強(qiáng)劑的情況下,機(jī)體免疫指標(biāo)由上升至高峰再轉(zhuǎn)為下降,是由于長(zhǎng)期投喂免疫增強(qiáng)劑而導(dǎo)致的“免疫疲勞”。

動(dòng)物機(jī)體免疫力的高低會(huì)直接影響其抗病力。已有文獻(xiàn)報(bào)道,在飼料中添加復(fù)合中草藥制劑能顯著提高凡納濱對(duì)蝦的抗病力[26]。鄒明泉等[27]應(yīng)用大黃、海藻碘及莨菪堿等多種中草藥防治魚病,經(jīng)室內(nèi)及室外生產(chǎn)性防治試驗(yàn)證明,對(duì)草魚出血病有療效,可使養(yǎng)殖魚類的成活率提高17.7%～30%。陳效儒等[5]通過(guò)注射仿刺參腐皮綜合征致病菌燦爛弧菌Vibrio splendidus進(jìn)行仿刺參的攻毒試驗(yàn),攻毒后14 d內(nèi)對(duì)照組累計(jì)發(fā)病率為38.3%,顯著高于200 mg/kg添加組(26.7%)。本試驗(yàn)結(jié)果顯示,對(duì)照組仿刺參在3 d內(nèi)全部死亡,感染后第7天, 0.5%與2.5%添加組相對(duì)保護(hù)率分別為20%、10%;1.5%添加組抗病效果較顯著,其相對(duì)保護(hù)率可達(dá)到30%,說(shuō)明飼料中添加復(fù)方中草藥制劑,可以明顯提高仿刺參的抗病能力。

綜上所述,所用復(fù)方中草藥制劑可以顯著提高仿刺參各組織的抗菌活力及仿刺參體腔細(xì)胞的吞噬能力。攻毒試驗(yàn)也進(jìn)一步證明,該復(fù)方中草藥制劑可明顯增強(qiáng)仿刺參的抗病力。由此說(shuō)明添加該復(fù)方中草藥制劑不但能增強(qiáng)仿刺參的非特異性免疫力,而且也能提高仿刺參抵抗病原菌的抗病力。綜合試驗(yàn)指標(biāo)的變化趨勢(shì),建議在生產(chǎn)中采用1.5%的劑量添加、投喂3周較好。關(guān)于此復(fù)方中草藥的具體作用機(jī)理以及各組分的確切作用還需進(jìn)一步研究。

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Effects of a compound Chinese herbal medicine on immunity and disease resistance in sea cucumber Apostichopus japonicus

WU Ya-nan,LIU Peng,LI Qiang,JIANG Chuan-jun,LI Hua
(Key Laboratory of Mariculture,Agriculture Ministry,PRC,Dalian Ocean University,Dalian 116023,China)

The sea cucumber Apostichopus japonicus was fed the diets containing a compound Chinese herbal medicine combined with Astragalus,and Codonopsis at a dose of 0%,0.5%,1.5%or 2.5%for 7,14,21 and 28 days,and were analysed for several immune parameters in different tissues.After acclimated for 28 days,the sea cucumber was injected 0.1 mL of bacterial suspension of Shewanella marisflavi in the back at concentration of 7×108cells/mL.The daily symptoms and mortality were recorded for 7 days to calculate the relative percent protection(RPP).The results showed that there were significant influence of Chinese herbal medicine on antibacterial activity(Ua)in different tissues and phagocytic function in coelomocytes(P＜0.05).The Ua was shown to increase with time proceeded and increase in concentration of the compound Chinese herbal medicine.There was a tendency of first increase and then decrease in phagocytic function in the coelomocytes,with the peak value at 14 or 21 days. Both the peak activities of Ua and PP in the coelomocytes were observed at the drug concentration of 1.5%,followed by at 2.5%,0.5%and then at 0%.The challenge test showed that the sea cucumber in the control group was all death 3 days after the infection while the relative percent protection was 30%in the 1.5%group,20%in the 0.5%group and 10%in the 2.5%group 7 days after the infection.It is suggested that the Chinese herbal medicine can significantly improve the immunity and disease resistance in the sea cucumber at the optimum concentration of 1.5%.

Chinese herbal medicine;Apostichopus japonicus;phagocytosis;antibacterial activity;relative percent protection

S948

A

2095-1388(2011)04-0338-06

2010-09-23

國(guó)家“十二五”科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2011BAD13B03);海洋公益性行業(yè)科研專項(xiàng)(200905020);國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(30800853);大連市科技攻關(guān)項(xiàng)目(2004B1NC030,2006B11NC109)

吳亞楠(1985-),女,碩士研究生。E-mail:jzlwnwyn@163.com

李華(1958-),女,教授。E-mail:lihua@dlou.edu.cn