章麗霞，文 彬,2，黃一凡,2，劉 鈞,2△

（1.川北醫(yī)學(xué)院，四川南充 637000；2.川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科）

ERK2蛋白在宮頸癌中的表達(dá)及意義*

章麗霞1，文 彬1,2，黃一凡1,2，劉 鈞1,2△

（1.川北醫(yī)學(xué)院，四川南充 637000；2.川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科）

目的:研究ERK2蛋白在宮頸癌組織中的表達(dá)水平及其與宮頸癌生物學(xué)特性的關(guān)系。方法:采用免疫組化SP法，檢測(cè)80例宮頸癌組織及30例正常宮頸組織中ERK2蛋白的表達(dá)。結(jié)果:ERK2在宮頸癌中陽性表達(dá)率為75.00%，明顯高于正常宮頸組織的13.33%(P＜0.01)。ERK2陽性表達(dá)率與臨床分期、分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＜0.01，P＜0.05），與年齡、生育史及組織類型無關(guān)(P＞0.05）。結(jié)論:ERK2的表達(dá)與宮頸癌的生長(zhǎng)、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為關(guān)系密切，在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用。

宮頸癌；ERK2；免疫組織化學(xué)

1 材料與方法

1.1 一般資料 收集川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科2005年-2009年經(jīng)病理證實(shí)并手術(shù)切除的宮頸癌石蠟組織塊80例，所有患者術(shù)前均未接受放化療治療。年齡23-66歲，中位年齡44.3±9.70歲；鱗癌68例，腺癌12例；高分化12例、中分化58例、低分化為10例；根據(jù)FIGO臨床分期：Ⅰ期29例、Ⅱ期43例、Ⅲ期8例，并依據(jù)宮頸癌治療原則分為≤Ⅱa期40例，≥Ⅱb期40例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者20例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者60例；生育史≤5次者62例，＞5次者18例。選擇因子宮肌瘤全子宮切除的正常宮頸組織石蠟塊30例為對(duì)照組，年齡31-67歲。所選病例均有完整的臨床病理資料。

1.2 試劑與方法 兔抗人ERK2多克隆抗體(sc-154），工作濃度(1：200），購(gòu)于北京金杉生物公司；SP試劑盒購(gòu)自福建邁新生物技術(shù)有限公司。將常規(guī)石蠟包埋的蠟塊，厚度4μm連續(xù)切片，SP免疫組化法觀察ERK2蛋白的表達(dá)。免疫組化染色各步驟均按試劑盒說明書嚴(yán)格操作；已知陽性切片為陽性對(duì)照，以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定 以細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒為ERK2陽性細(xì)胞。兩人雙盲法觀察切片，采用半定量積分法[2]：每張切片隨機(jī)選取具有代表性的10個(gè)高倍視野(×400）進(jìn)行觀察計(jì)數(shù)，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)腫瘤細(xì)胞，陽性細(xì)胞數(shù)＜10%為0分，11%-30%為1分，30%-75%為2分，＞75%為3分；陽性強(qiáng)度無著色為0分，淡黃色為1分，黃色為2分，棕黃色為3分。染色強(qiáng)度與陽性細(xì)胞百分比的乘積≤1分為陰性，1-2分為弱陽性，2-4分為陽性，＞4分為強(qiáng)陽性。若兩人判斷結(jié)果相差2分則重新判定。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法 采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異顯著性的標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 ERK2在不同宮頸組織中的表達(dá)情況 見圖1-2。80例宮頸癌和30例正常宮頸組織ERK2陽性率分別為75.00%(60/80）和13.33%(4/30），兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=34.101，P＜0.01）。

圖1 宮頸鱗癌ERK2蛋白的表達(dá)

圖2 宮頸腺癌ERK2蛋白的表達(dá)

2.2 ERK2表達(dá)與宮頸癌臨床病理因素的關(guān)系 見附表。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者ERK2陽性率顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，臨床分期≥Ⅱb期顯著高于≤Ⅱa期，病理分化程度高、中、低3組間的表達(dá)差異有顯著性(P＜0.01，P＜0.05）。ERK2陽性率與宮頸癌患者年齡、生育史、組織類型無關(guān)(P＞0.05）。

附表 ERK2表達(dá)與宮頸癌臨床病理因素的關(guān)系(例數(shù)）

3 討論

ERK是80年代末期發(fā)現(xiàn)的一類絲氨酸/蘇氨酸激酶，是傳遞絲裂原信號(hào)的信號(hào)蛋白[3]。ERK家族有5個(gè)成員，包括ERK1-ERK5，其中ERK1和ERK2的分子量分別為44KDa和42KDa，是絲裂原活化蛋白激酶（Mitogenactivated protein kinases，MAPKs）/ERK通路中的兩個(gè)重要成員，屬于絲氨酸／蘇氨酸殘基的蛋白激酶，是細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)的重要途徑[3]。ERK1/2能將多種細(xì)胞外信號(hào)(如生長(zhǎng)因子、細(xì)胞因子、腫瘤啟動(dòng)因子等)通過磷酸化活化逐級(jí)傳遞至細(xì)胞核，并激活多種核轉(zhuǎn)錄因子，參與細(xì)胞的生長(zhǎng)、發(fā)育、分裂及分化等[4]。ERK1/2的活化形式是P-ERK1/2，進(jìn)入細(xì)胞核作用于Elk-1、c-myc、c-fos、c-jun、NF-κB等轉(zhuǎn)錄因子，可磷酸化核轉(zhuǎn)錄因子和其它蛋白激酶等多種底物，調(diào)節(jié)相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，進(jìn)而參與細(xì)胞的生長(zhǎng)、發(fā)育、分裂及細(xì)胞間的功能同步等多種生理過程，并在細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化等病理過程中起重要作用[4]。

本研究發(fā)現(xiàn)，ERK2在正常宮頸上皮中的陽性表達(dá)率為13.33%，在宮頸癌組織中的陽性表達(dá)率為75%，二者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；宮頸癌臨床分期≥Ⅱb期ERK2的陽性表達(dá)率明顯高于≤Ⅱa期(P＜0.05）。因此提示，ERK2與宮頸癌的發(fā)生有關(guān)。本研究還發(fā)現(xiàn)，宮頸癌中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者ERK2陽性率顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P＜0.05）；病理分化程度高、中、低3組間ERK2的表達(dá)率比較差異有顯著性(P＜0.01），中、低分化比較差異無顯著性(P＞0.05），可能與低分化病例偏少有關(guān)系，有待進(jìn)一步研究。同時(shí)發(fā)現(xiàn)，ERK2陽性率與宮頸癌患者年齡、生育史、組織類型無關(guān)(P＞0.05）。本研究結(jié)果表明，ERK2過量表達(dá)與腫瘤轉(zhuǎn)移、病理分級(jí)及臨床分期相關(guān)，與蘇連明等[5]在肝癌組織中的研究結(jié)果相似。

宮頸癌的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多因素的復(fù)雜過程，與其它惡性腫瘤一樣，是多基因異常改變的結(jié)果。本研究發(fā)現(xiàn)，ERK2在宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移過程中可能起著十分重要的作用，有可能成為宮頸癌癌基因治療的靶點(diǎn)。

[1]Webb CP,Van AL,Wigler MH,et a1.Signaling pathways in Rasmediated tumorigenicity and metastasis[J].Proc Natl Acad Sci USA,1998,95(15):8773-8778.

[2]Hao XP,Willis JE,Pretlow TG,et a1.Loss of fragile histidine triad expression in colorectal carcinomas and premalignant lesion[J]. Cancer Res,2000,60(1):18-21.

[3]Boulton TG,Nye SH,Robbins DJ,et al.ERKs:a family of protein-serine/threonine kinases that are activated and tyrosine phosphorylated in response to in insulin and NGF [J].Cell,1991, 65(4):663-675.

[4]Widmann C,Gibosn S,Jarpe MB,et a1.Mitogen activated protein kinase: conservation of a three kinase module from yeast to human[J]. Physiol Rev,1999,79(1):143-180.

[5]蘇連明，朱雯.ERK2蛋白在肝癌組織中的表達(dá)及臨床意義[J].牡丹江醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2009，30(6)：7-9.

EXPRESSION AND SIGNIFICANCE OF ERK2 PROTEIN IN HUMAN CERVICAL CARCINOMA

ZHANG Li-xia, WEN Bin, HUANG Yi-fan, et al
(North Sichuan Medical College, Sichuan Nanchong 637000, China)

Objective:To investigate expression of ERK2 protein in human cervical carcinoma, and its relationship with biological features of cervical carcinoma.Methods:SP immunohistochemical method was used to detect expressionof ERK2 in 80 cases cervical carcinoma and 30 cases normal cervix tissues.Results:The positive expression of ERK2 in cervical carcinoma was 75.00%, which was obviously higher than that in normal cervix tissue (13.33%, P＜0.01). The positive expression of ERK2 in cervical carcinoma had relations with clinical stage, differentiation degree and lymph node metastasis (P＜0.01, P＜0.05); and had no relations with age, childbearing history and pathological type (P＞0.05).Conclusions:The expression of ERK2 has close relations with biological behavior of cervical carcinoma, such as growth, infiltration and metastasis; and play important role in development of cervical carcinoma.

Cervical carcinoma; ERK2; Immunohistochemistry細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(Extracellular signal-regulated kinase，ERK）級(jí)聯(lián)是細(xì)胞內(nèi)重要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，可將細(xì)胞外刺激傳遞至細(xì)胞核，參與細(xì)胞的生長(zhǎng)、發(fā)育、分化等一系列生理過程，其異常表達(dá)在細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化和腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起重要作用[1]。本研究采用免疫組化SP法檢測(cè)ERK2蛋白在宮頸癌組織中的表達(dá)情況，探討其在宮頸癌發(fā)生、發(fā)展中的作用及臨床意義。

R737.33

A

1004-6879(2011）02-0117-03

2010-11-22）

* 四川省科技廳資助課題（07SG004-002）△ 通訊作者