賈萬忠

（中國農(nóng)業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所，家畜疫病病原生物學國家重點實驗室，甘肅省動物寄生蟲病重點實驗室，農(nóng)業(yè)部獸醫(yī)公共衛(wèi)生重點開放實驗室，甘肅蘭州 730046）

棘球蚴?。ㄓ址Q包蟲?。┦怯杉纳谌苿游锏募?qū)俳{蟲的幼蟲——棘球蚴寄生在牛、羊、人等多種哺乳動物的臟器內(nèi)而引起，是一類危害嚴重的人獸共患寄生蟲病。人體棘球蚴病年手術病例2 000余例，病畜高達3 000萬頭（只），每年新發(fā)病畜700余萬頭（只），年經(jīng)濟損失近10億元。包蟲病流行區(qū)人群平均患病率為1.08%，主要分布在內(nèi)蒙古、四川、西藏、甘肅、青海、寧夏、新疆等7個?。ㄗ灾螀^(qū)）的牧區(qū)和半農(nóng)半牧區(qū)，受威脅人口為6 600萬。

一、病原學

棘球?qū)俳{蟲在分類學上隸屬于扁形動物門、絳蟲綱、帶科，分布范圍廣、寄生宿主多、幼蟲階段呈多樣性。近兩個世紀以來，世界各地學者對其進行了大量研究。在過去，由于缺乏分類的統(tǒng)一規(guī)則，導致了命名上的混亂，曾先后報導過至少16個種及13個亞種。后來，通過對棘球?qū)俳{蟲及其種間變異和種內(nèi)變異的廣泛研究，到目前為止，棘球?qū)俳{蟲被公認的有5個獨立種，即細粒棘球絳蟲，幼蟲期為囊性棘球蚴；多房棘球絳蟲，幼蟲期為泡狀棘球蚴；伏氏棘球絳蟲，幼蟲期為多囊性棘球蚴；少節(jié)棘球絳蟲，幼蟲期也是多囊性棘球蚴；石渠棘球絳蟲。這5個種無論在成蟲和幼蟲期形態(tài)，還是在宿主分布上都有較大差別，其中前3個種為人獸共患病的病原體，而少節(jié)棘球絳蟲和石渠棘球絳蟲尚未有感染人體的報道。

盡管如此，棘球?qū)俳{蟲的分類仍存在著爭議，因為棘球?qū)俳{蟲種（株）變異現(xiàn)象廣泛存在，尤其是細粒棘球絳蟲和多房棘球絳蟲又存在不同蟲株或亞種。不同蟲株在對人的致病性、宿主范圍、流行病學等方面存在差異。在基因水平上進行細粒棘球絳蟲和多房棘球絳蟲分型，對疫苗、診斷試劑及抗寄生蟲藥物的研制和開發(fā)等具有重要意義。在我國已發(fā)現(xiàn)的細粒棘球絳蟲基因型有兩個： G1 ( Sheep strain，綿羊株 )，人、綿羊和牛為中間宿主；G6 (駱駝株，Camel strain) 人、牛和駱駝為中間宿主。

二、流行特征與現(xiàn)狀

本病呈世界性分布，但在畜牧業(yè)為主的國家多見，如澳大利亞、阿根廷、法國南部、土耳其、意大利等國。在我國則以新疆、青海、西藏、寧夏、內(nèi)蒙、甘肅、四川等多見，云南、河北、東北各省等也有散發(fā)病例。

（一）流行特征

1.傳染源。本病的主要傳染源為狗，狼、狐、豺等也可為終宿主，在它們經(jīng)常出沒的地方可造成棘球蚴病的流行。在流行區(qū)的羊群中常有包蟲病存在，而居民常以羊或其它家畜內(nèi)臟喂狗，使狗有吞食包蟲囊的機會，感染常較嚴重，腸內(nèi)寄生蟲數(shù)可達數(shù)百至數(shù)千，其妊娠節(jié)片具有活動能力，可爬在皮毛上，并引起肛門發(fā)癢當狗舐咬時把節(jié)片壓碎，糞便中蟲卵常污染全身皮毛，如與其密切接觸則甚易遭至感染。牧區(qū)感染犬排出的蟲卵對環(huán)境的污染通常較重：犬糞中蟲卵量大，隨動物的活動以及塵土、風、水等播散，導致蟲卵嚴重污染環(huán)境。蟲卵對外界低溫、干燥及化學藥品有很強抵抗力。在2℃水中能活2.5年，在冰中可活4個月，經(jīng)過嚴冬（-12℃～-14℃)仍保持感染力。一般化學消毒劑不能殺死蟲卵。

2.傳播途徑。直接感染主要由于與狗密切接觸其皮毛上蟲卵污染手指后經(jīng)口感染。若狗糞中蟲卵污染蔬菜或水源，尤其人畜共飲同一水源也可造成間接感染。家犬和野生動物的的感染則常因以病畜內(nèi)臟喂狗，或?qū)⑵潆S地亂拋致使野犬、狼、豺等受到感染，從而又加重羊、牛感染，使流行愈趨嚴重。在干旱多風地區(qū)，蟲卵隨風飄揚也有經(jīng)呼吸道感染的可能。

3.易感人群。感染主要與環(huán)境衛(wèi)生以及不良衛(wèi)生習慣有關，患者以農(nóng)民與牧民為多，兄弟民族遠較漢族為多。因包蟲囊生長緩慢一般在兒童期感染，至青壯年期才出現(xiàn)明顯癥狀。男女發(fā)病率無明顯差別。

（二）流行現(xiàn)狀 中國是世界上棘球蚴病流行最嚴重的國家之一，主要流行區(qū)在中國西部和北部廣大農(nóng)牧地區(qū)，即新疆、青海、甘肅、寧夏、西藏、內(nèi)蒙古和四川7省區(qū)，其次是陜西、山西和河北部分地區(qū)。另外，在東北三省、河南、山東、安徽、湖北、貴州和云南等省有散發(fā)病例。迄今中國已有23個省、市、區(qū)證實有當?shù)馗腥镜牟∪?。?jù)幾個重點流行省區(qū)的不完全統(tǒng)計，中國受棘球蚴病威脅的人口約5 000萬，患病人數(shù)約為50萬～60萬，人群中最易感染者是學齡前兒童（新疆15 289例病人中，15歲以下者占32.1%）。主要動物中間宿主綿羊的感染率在3.3%～90%，家犬的感染率在7%～71%。隨著西部大開發(fā)戰(zhàn)略的實施，對本病的防治日益成為重要的任務。

三、診斷技術

中間宿主棘球蚴病的診斷依據(jù)是從幾乎所有器官，特別是肝和肺中查出棘球蚴。犬和其它肉食動物棘球絳蟲診斷的依據(jù)是從其糞便或小腸中檢出棘球絳蟲或特異性抗原。

（一）中間宿主棘球蚴病的診斷臨床上對包蟲病的診斷應綜合流行病學、臨床學、病理學、病原學和血清學等多方面的信息和資料進行確診。

1.臨床診斷。了解動物是否來自流行區(qū)，對診斷有一定參考意義。確診應以病原學結(jié)果為依據(jù)，如經(jīng)剖解從肝臟、肺等占位性病變中檢出棘球蚴碎片或原頭蚴等。在顯微鏡下查到粉皮樣狀物，頭節(jié)或小鉤可做出確定診斷。肉眼可以在許多器官中直接觀察到棘球蚴，但對大動物如綿羊和牛，必須用手觸摸或剖開觀察。豬、綿羊和山羊可感染細頸囊尾蚴，當細粒棘蚴和細頸囊尾蚴這兩種幼蟲在肝臟中都存在時，應特別注意區(qū)別。豬蛔蟲也可在肝臟形成“白斑”。對野生動物和嚙齒動物鑒別診斷時，應與其它絳蟲蚴如豆狀囊尾蚴、泡尾帶絳蟲蚴等進行鑒別診斷。

樣本經(jīng)福爾馬林固定后，可用常規(guī)組織學染色。棘球絳蟲中絳期的一個特征是：在結(jié)締組織之下具有過碘雪夫氏反應（PAS）的無細胞堆積層（有或無核的生發(fā)層）。帶有核的生發(fā)膜可作為棘球蚴的特征性結(jié)構(gòu)。在育囊內(nèi)或在棘球砂中的原頭節(jié)的存在也具有棘球?qū)俚脑\斷特征。冷凍或保存于70%乙醇中的原頭節(jié)或蚴組織中獲得DNA都可以進行棘球蚴種及基因型的鑒別診斷，此方法不僅準確而且可靠，但是需要一定的實驗條件和技術手段。

2.免疫學診斷。家畜包蟲病的生前診斷可以應用卡索尼氏（Casoni）變態(tài)反應或者血清學診斷方法。皮內(nèi)試驗抗原多使用經(jīng)過雙層濾紙過濾的棘球蚴囊液。皮內(nèi)變態(tài)反應在動物頸部進行，皮內(nèi)注射抗原0.2 ml，于注射后5～15 min，注射局部紅腫，直徑達0.7～2 cm，即為陽性；若于24 h不呈反應者為陰性。本反應的陽性率較高，但是一般只有70%的準確性。對動物包蟲病的診斷很少采用本方法。

世界動物衛(wèi)生組織（OIE）的《世界動物衛(wèi)生法典》和《哺乳動物、禽、蜜蜂A類和B類疾病診斷試驗和疫苗標準手冊》指出，在國際貿(mào)易中OIE目前尚未建議使用指定方法和替代方法。對動物棘球蚴病診斷和流行病學基線調(diào)查主要使用剖檢法。在我國，推薦使用的診斷方法為《動物棘球蚴病診斷技術的標準》（NY/T1466-2007）。本標準由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出，中國農(nóng)業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所負責起草，動物活體診斷主要使用間接血球凝集試驗（IHA）和酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。這些方法仍需要在應用中進行進一步改進和完善。在被感染的羊的血清中可以檢測到針對六鉤蚴、囊液和原頭節(jié)的抗體，但是由于不能鑒別流行期和早期感染，而且用于人的免疫學試驗對動物缺乏敏感性和特異性，同時棘球絳蟲和其他帶屬絳蟲和感染可能存在交叉反應，所以這些方法還不能代替剖檢，其實際應用受到極大限制。

（二）終末宿主棘球絳蟲成蟲的診斷 棘球?qū)俳{蟲的終末宿主要是狗、貓、狐貍、狼等食肉類動物，成蟲寄生于其小腸內(nèi)，蟲卵或者蟲體隨糞便排出，污染食物、飲水和周圍環(huán)境。感染棘球絳蟲的終末宿主是棘球蚴病的重要傳染源，所以及時、準確地檢測流行區(qū)終末宿主棘球絳蟲的感染情況和對感染動物進行強制驅(qū)蟲或者淘汰，對控制棘球蚴病的流行、綜合防控措施實施和防治效果的評價等具有十分重要的意義。世界衛(wèi)生組織（WHO）和動物衛(wèi)生組織（OIE）推薦的常規(guī)的檢測方法“檳榔堿瀉下法”和“剖檢法”，可作為犬科動物感染棘球絳蟲檢測方法的“金標準”，因費時費力且檢出率低，所使用檳榔堿藥品多為原料藥，迫切需要開發(fā)犬科動物棘球絳蟲感染檢測新方法、創(chuàng)制新的檢測試劑盒。

對犬棘球絳蟲的診斷是檢查犬的糞便，可結(jié)合檳榔堿瀉下法進行。同時，必須做棘球絳蟲成蟲的分離鑒定工作，查到棘球絳蟲的成蟲、成熟節(jié)片和蟲卵即可確診。但其排出的孕節(jié)和蟲卵要注意與多頭帶絳蟲和泡狀帶絳蟲等孕節(jié)和蟲卵進行鑒別?？傮w來講，犬棘球絳蟲的診斷較為困難，因為所有絳蟲的蟲卵在形態(tài)上很相似?，F(xiàn)在可應用PCR技術鑒定各種帶科絳蟲卵，一些以簡化和改進終末宿主群體流行病學診查和可以診斷活動物細粒棘球絳蟲和多房棘球絳蟲感染為目的的PCR/DNA檢測方法已經(jīng)建立。此外，由于棘球?qū)俳{蟲節(jié)片很小，在糞便中不易發(fā)現(xiàn)，很容易被忽視而造成漏診，應特別注意。

WHO和OIE建議使用檳榔堿瀉下法和小腸剖檢法兩種方法用于犬棘球絳蟲的診斷。此外，正在開發(fā)診斷犬、狐貍等感染棘球絳蟲的新方法，并且已有一些試劑盒供應市場。這些方法主要包括糞抗原ELISA檢測，血清抗體ELISA檢測等。糞抗原ELISA方法是用捕獲抗體檢測特異性抗原為基礎的，有較高的特異性，與其它帶屬絳蟲基本上無交叉反應，但宿主荷蟲量超過100條時，敏感性達92%以上。目前，分子生物學方法如PCR技術正在逐漸地應用于糞便中蟲體碎片或/蟲卵DNA檢測上，相信它們今后將成為犬糞便中絳蟲檢測的重要手段。

（三）剖檢 被檢動物處死后，需盡快取出小腸，并結(jié)扎兩端。將新鮮小腸切成數(shù)段，浸泡于溫鹽水中待檢查。切開浸于鹽水中30 min，釋放蟲體。腸內(nèi)容物沖洗到另一容器中，用刮片刮取腸壁，病料煮沸后過篩沖洗除去顆粒，沖下來的內(nèi)容物和碎屑置于黑色器皿中，用放大鏡和光學顯微鏡做蟲體計數(shù)。棘球絳蟲一般位于小腸前段1/3處腸段。蟲體保存可用5%～10%的冷福爾馬林或FAA固定液（甲醛-已醇-冰醋酸溶液）。可以刮取小腸黏膜，對黏附物在解剖顯微鏡進行下進行鏡檢或者對黏附物進行涂片，固定染色，在光學顯微鏡下檢查蟲體，進行確診。樣品要用4%福爾馬林鹽水溶液固定和防腐，也可冷藏（4℃）和冷凍（-20℃）保存供以后檢查。

四、防治技術

1.加強健康教育，宣傳、普及棘球蚴病知識，提高全民的防病意識，在生產(chǎn)和生活中加強個人防護，避免感染。人與犬、貓等動物接觸時，應注意個人衛(wèi)生，嚴防感染。

2.棘球蚴病必須采用綜合性防制措施，加強衛(wèi)生法規(guī)建設和衛(wèi)生檢疫，強化群眾的衛(wèi)生行為規(guī)范，嚴禁用患畜的臟器喂犬及任意拋棄,應銷毀或深埋處理以防被犬或其他肉食獸食入。加強對屠宰場和個體屠宰戶的檢疫，及時處理病畜內(nèi)臟。

3.強化動物防疫監(jiān)督力度。動物防疫監(jiān)督機構(gòu)應加強其執(zhí)法力度，對涉及棘球蚴等對人畜有重大危害的疫病嚴格執(zhí)法，特別要加強對屠宰場和個體屠宰的檢疫。豬要圈養(yǎng)，不要放牧。此外，要加大外調(diào)動物及動物產(chǎn)品的檢疫力度，防止外來病原入侵，保障畜產(chǎn)品安全。

4.定期為家犬、牧犬驅(qū)蟲，以減少傳染源。衛(wèi)生部在1992年頒布了中國包蟲病防治規(guī)劃，經(jīng)過在流行區(qū)多年的實施，已取得明顯效果，許多地方的家犬和綿羊的感染率都已迅速下降。

5.將狗、貓的糞便進行無害化處理，防止其污染牧地和飼料、飲水。抓住春秋兩季防疫的關鍵階段，做好寄生蟲病的防制，特別是對終末宿主，如犬、貓等的防制，每年至少4次。

對動物進行棘球蚴病的治療，一方面缺乏有效的藥物，另一方面也無治療效益。因此，對動物棘球蚴病的防治主要強調(diào)預防。除了上面提到的防治方法外，也可采用疫苗進行預防。

五、取得成果

（一）疫苗研究 用基因工程技術在大腸桿菌中表達制備的Eg95重組抗原疫苗免疫動物，可有效預防棘球蚴的感染。Eg95重組疫苗在實驗室預防綿羊細粒棘球絳蟲蟲卵攻擊感染可達96%～98%的保護作用，免疫期可持續(xù)12個月，并且保護性抗體可通過初乳傳遞給羔羊。經(jīng)過多個國家現(xiàn)場試驗，表明Eg95重組抗原二免后可使免疫羊獲得80%左右的免疫保護效果，效果較好。由于受疫苗價格等因素的制約，基因工程疫苗尚未在生產(chǎn)中大規(guī)模使用。但是，隨著研究技術的發(fā)展，其它新型疫苗將不斷問世，如利用酵母表達系統(tǒng)生產(chǎn)Eg95抗原、人工設計合成肽疫苗、痘病毒活載體疫苗等將有助于降低疫苗生產(chǎn)成本和提高疫苗免疫效果。

（二）線粒體基因組研究計劃 蠕蟲線粒體基因組有許多獨特的特征如基因組很小，基因位置排列相對穩(wěn)定等，tRNA和兩個主要非編碼區(qū)的二級結(jié)構(gòu)、堿基組成和變異等有也其自身特點，這些特征已經(jīng)在研究物種分類、基因進化、現(xiàn)有物種進化史等方面得到應用。線粒體基因組全序列比較表明，馬株（G4）與其它蟲株間核苷酸差異在10%以上，從這個意義上講它完全具有獨立種的分類學地位；牛株（G5、E.ortleppi/felidis）與其它蟲株間的核苷酸差異在6%以上，也應具有獨立種的地位。線粒體基因組全序列數(shù)據(jù)的不斷積累不僅有助于解決棘球絳蟲蟲種和蟲株分類問題，而且為棘球絳蟲（蚴）病流行病學調(diào)查、臨床檢測等診斷方法的建立提供有用的生物分子標記。

（三）基因組研究計劃 目前，在醫(yī)學和獸醫(yī)學上影響重大的絳蟲基因組計劃已得到順利地開展，多房棘球絳蟲基因組序列測定已完成，基因組序列的匯編和注解正在進行中，還有細粒棘球絳蟲、豬帶絳蟲和微口膜殼絳蟲基因組序列測定正在進行中，其中也包括表達序列標簽計劃。我國的某些高等院校和科研機構(gòu)也還開展這方面的相關研究。測出這些絳蟲的“基因天書”后，科學家們將致力于解讀和讀懂“天書”，并從中進行重要功能基因發(fā)掘及應用于免疫診斷、預防疫苗和新藥靶點等研究工作，這將有力推動我國和世界各國對棘球蚴病、囊蟲病和其他人類寄生蟲病的科學研究和防治技術創(chuàng)新。

（四）棘球蚴體外培養(yǎng)技術 棘球絳蟲的體外培養(yǎng)經(jīng)歷了幾個不同的發(fā)展階段：聯(lián)合培養(yǎng)體系主要包括組織-碎片培養(yǎng)體系、膠原膜培養(yǎng)體系及大規(guī)模液體培養(yǎng)體系，這些培養(yǎng)體系雖然能培養(yǎng)出實驗所需的囊泡。“無宿主成分干擾”培養(yǎng)體系即無宿主因子污染及厭氧的培養(yǎng)體系，有效解決了聯(lián)合培養(yǎng)體系中宿主因子污染的問題，但此培養(yǎng)體系只能用于棘球絳蟲感染后期的研究，而不能用于感染早期的研究。原代細胞培養(yǎng)體系，由于上述培養(yǎng)體系的一些不可克服的缺點，Spiliotis等在“無宿主成分干擾”培養(yǎng)體系的基礎上提出了泡球蚴原代細胞培養(yǎng)體系，并在其他帶絳蟲中被廣泛應用，使得棘球絳蟲體外培養(yǎng)技術趨于成熟，這是整個絳蟲學中取得的最有代表性的突破性進展之一。目前，已將棘球絳蟲體外培養(yǎng)技術應用在棘球絳蟲自身各個階段的發(fā)育和分化、基因表達研究、棘球蚴病免疫機制研究及藥物研制等領域中，是棘球蚴病研究中不可缺少的部分和重要支撐。隨著體外培養(yǎng)技術的不斷改進，有望對棘球絳蟲研究的各個方面進行更進一步的研究和認識，為有效預防和控制棘球蚴病的流行起重要指導作用和奠定堅實理論基礎。

六、存在問題與解決途徑

（一）蟲種種類 唐崇惕等先后對我國內(nèi)蒙古草原野生肉食動物中棘球絳蟲和嚙齒動物中棘球蚴感染情況進行調(diào)查與研究，已報道存在歐洲多房棘球絳、西伯利亞棘球絳蟲新種和蘇俄多房棘球絳蟲，以及西伯利亞棘球絳蟲泡狀棘球蚴，歐洲多房棘球絳蟲泡狀棘球蚴和呼倫貝爾泡狀棘球蚴等，在沙狐體內(nèi)的棘球絳蟲成蟲子宮形態(tài)及在野外田鼠和人工感染實驗鼠體內(nèi)泡球蚴發(fā)育情況不盡相同。另外，這三種泡狀棘球絳蟲ITS序列之間存在明顯差異。因此，對這些絳蟲的分類地位有待于進行更深入和細致的研究。

（二）防治難度 2005年以來，中央和地方各級政府加大了包蟲病防治工作力度，2007年包蟲病被列為國家免費救治的重大傳染病之一，中央財政安排了專項資金支持中西部貧困地區(qū)開展包蟲病病人篩查和治療、傳染源控制、健康教育等工作，有力地推動了包蟲病防治工作的開展，并取得了初步成效。但是，由于包蟲病流行區(qū)經(jīng)濟和社會發(fā)展水平相對滯后，地理環(huán)境復雜，自然條件惡劣，人文環(huán)境獨特，宗教習俗多樣，農(nóng)牧民群眾科學文化知識普及率較低，防治機構(gòu)和隊伍不健全，動物宿主種類多、數(shù)量大、分布廣、管理難度大等因素，我國包蟲病防治工作仍然面臨諸多困難和巨大挑戰(zhàn)。我國地域廣闊，生態(tài)環(huán)境復雜，棘球絳蟲的生活史環(huán)節(jié)和感染動物種類眾多，牧區(qū)和農(nóng)牧區(qū)缺乏科學的管理，家畜水源等污染、難以定期對飼養(yǎng)的狗進行驅(qū)蟲工作，加之流浪犬數(shù)量激增，是造成本病發(fā)生和感染率一直居高不下的主要原因之一。近年來，隨著畜牧業(yè)的發(fā)展，引進和飼養(yǎng)牲畜數(shù)目不斷增多形成新的包蟲病污染區(qū)域。在城市中，隨著皮毛制品的流通使用和寵物飼養(yǎng)的增多，包蟲病向城市流行蔓延的潛在危險正在增高。另外，我國棘球絳蟲感染除在西北農(nóng)牧區(qū)外，許多省和自治區(qū)都有散在病例報告，并有擴散態(tài)勢。在該病診斷方面，雖然還沒有開發(fā)出一種能用于終末宿主棘球絳蟲感染檢測并可推廣應用的簡便常規(guī)試驗方法，但是有關這方面的研究已取得重要突破。在疫區(qū)，必須采用綜合性防制措施，加強宣傳與執(zhí)法力度，積極搞好捕殺野犬和家畜、家犬定期驅(qū)蟲，患病臟器的無害化處理等辦法是防止本病的有效措施。在我國，此兩型棘球蚴病的發(fā)生和流行是重要的社會問題和經(jīng)濟問題，應引起高度重視。

七、未來展望

為了全面推進包蟲病防治工作，努力實現(xiàn)到2020年基本控制包蟲病流行的目標，保障人民群眾身體健康，促進民族地區(qū)經(jīng)濟發(fā)展和社會和諧穩(wěn)定，衛(wèi)生部等十四個部委、局、婦聯(lián)特制定了《防治包蟲病行動計劃（2010－2015年）》（法規(guī)文號：衛(wèi)疾控發(fā)[2010]100號）。 其中提出了"貫徹預防為主、科學防治的方針，實行因地制宜、分類指導的原則；逐步建立和完善政府主導、部門合作、全社會共同參與的工作機制；采取以控制傳染源為主，積極開展健康教育、中間宿主防制、病人查治相結(jié)合的綜合性防治策略；大力開展區(qū)域合作和聯(lián)防聯(lián)控，注重科研攻關，加強國際合作，充分利用國內(nèi)、國外各類資源，努力減輕包蟲病危害，提高人民健康水平，保障畜牧業(yè)健康發(fā)展和畜產(chǎn)品質(zhì)量安全。"的指導思想，為 我國全面控制棘球蚴病提供了重要法規(guī)文件，為我國棘球蚴病防治展示了美好的未來。