張青麗，梁方印，陳學(xué)敏，尹利香

（濮陽縣畜牧局，河南濮陽 457000）

引起孕牛流產(chǎn)的病因有很多，如孕期營養(yǎng)不良、泌乳過度、飼喂發(fā)霉變質(zhì)飼料、內(nèi)分泌紊亂、實(shí)質(zhì)性病變、懷孕后誤配、環(huán)境應(yīng)激、年齡過大、遺傳性疾病及染色體畸變等。但臨床上最常見的還是因微生物感染而導(dǎo)致的流產(chǎn)，這類流產(chǎn)癥狀復(fù)雜，不易確診。在此將可能引發(fā)奶牛流產(chǎn)的微生物學(xué)原因及其診療研究現(xiàn)狀列舉如下，并對(duì)其防治進(jìn)行初步探討，以期為防治奶牛流產(chǎn)帶來幫助。

一、病毒性流產(chǎn)

1.牛傳染性鼻氣管炎 (IBR)，是由牛皰疹病毒I型（BHV-1）引起的一種接觸性傳染病，可引起陰道炎、乳房炎、流產(chǎn)等。病牛和帶毒牛為主要傳染源，常通過空氣傳播，交配也可傳染，病毒也可通過胎盤侵入胎兒引起流產(chǎn)。確診此病要做病毒分離培養(yǎng)，再用中和試驗(yàn)或熒光抗體法進(jìn)行鑒定。間接血凝試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) (ELISA)、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)等均可作為本病的診斷。唐泰山等(2009)建立了擴(kuò)增牛傳染性鼻氣管炎病毒gB和gE基因的熒光PCR。

防治本病必須實(shí)行嚴(yán)格檢疫，防止引入傳染源和帶入病毒。采用敏感的檢測(cè)方法檢出陽性牛并予以撲殺可能是目前根除本病的唯一有效途徑。

2.牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)可引發(fā)牛的繁殖障礙以及使?fàn)倥．a(chǎn)生免疫抑制。妊娠頭120 d的母牛發(fā)生感染，病毒可穿過胎盤屏障感染胎兒并可能發(fā)生流產(chǎn)、干尸化或先天性畸形。還可引起卵巢炎和精子畸形，成為不育癥的可能原因。檢測(cè)BVDV的方法主要有病毒的細(xì)胞培養(yǎng)法、免疫學(xué)檢測(cè)、電子顯微鏡檢測(cè)病毒粒子(EM)、核酸探針檢測(cè)以及RT-PCR檢測(cè)。Carrie等人(2002)建立了采用RT-PCR反應(yīng)檢測(cè)牛病毒性腹瀉病毒病的方法。

目前本病無特效療法，應(yīng)用收斂劑及補(bǔ)液可挽救一部分患牛，繼發(fā)感染可給予抗生素和磺胺類藥物。滅活疫苗和弱毒疫苗可在某些發(fā)病地區(qū)推廣使用。最好的控制方法就是免疫所有可生產(chǎn)的母畜并根除所有永久性感染動(dòng)物。

3.牛副流感3型病毒也可引發(fā)子宮感染，孕牛流產(chǎn)。常見于晚秋及冬季。Melanie等人(2004)建立了一種檢測(cè)在呼吸道樣本中包括副流感3型病毒在內(nèi)的7種常見呼吸道病毒的多重逆轉(zhuǎn)錄PCR的方法。Horwood等(2008)識(shí)別了兩個(gè)不同的牛副流感病毒3型基因型。

4.牛流行熱是由病毒引起的熱性傳染病，可導(dǎo)致妊娠母牛流產(chǎn)、死胎。本病的流行具明顯的周期性和季節(jié)性。傳染力強(qiáng)，傳播迅速，發(fā)病率高，死亡率低。吸血昆蟲是重要的傳染源。用特異性血清做中和試驗(yàn)或免疫熒光試驗(yàn)鑒定病毒。尚無特效藥。早發(fā)現(xiàn)、早隔離、早治療，合理用藥，護(hù)理得當(dāng)是治療本病的重要原則。

5.赤羽病(AKA)又稱阿卡斑病，是由赤羽病病毒引起的傳染病。其特征為流產(chǎn)、早產(chǎn)、死產(chǎn)以及產(chǎn)出先天性關(guān)節(jié)彎曲-積水性無腦綜合征胎兒。赤羽病毒S RNA可裂解感染反芻動(dòng)物的腦。Yehuda等(2004)建立了檢測(cè)赤羽病毒的多重實(shí)時(shí)RTPCR反應(yīng)。

6.牛瘟是由牛瘟病毒引起的急性高度接觸性傳染病，可導(dǎo)致孕牛流產(chǎn)。我國已經(jīng)絕跡，但仍應(yīng)高度警惕防止本病由國外傳入。

7.牛細(xì)小病毒?。˙PV）是由牛細(xì)小病毒引起的一種接觸性傳染病。特征是引起妊娠母牛流產(chǎn)、死胎，小牛感染則表現(xiàn)腦炎腹瀉?？贵w檢查常用血凝抑制試驗(yàn)及血清中和試驗(yàn)。BPV與本屬其它成員不呈現(xiàn)交叉血清反應(yīng)。PCR檢測(cè)方法有很好的特異性和有較強(qiáng)的敏感性。

二、細(xì)菌性流產(chǎn)

1.布氏桿菌病的病原體為布氏桿菌，可致受胎率下降，孕畜流產(chǎn)。潛伏期2周至6個(gè)月，多為隱性感染。牛流產(chǎn)常發(fā)生在妊娠第6～8個(gè)月齡，多數(shù)患畜只流產(chǎn)1次，亦有流產(chǎn)后長期不孕病例，流產(chǎn)后多伴發(fā)胎衣不下、子宮炎，有的母畜產(chǎn)死胎、弱胎，胎衣呈黃色膠凍樣浸潤。多為散發(fā)，一年四季都可發(fā)生，但隨著母畜產(chǎn)仔季節(jié)變化較明顯。

病菌主要存在于患畜的體內(nèi)，隨乳汁、膿汁、流產(chǎn)胎兒、生殖道分泌物等排出體外，污染飼料、飲水及周圍環(huán)境，經(jīng)消化道、呼吸道、皮膚黏膜等傳染給其他家畜。

給牛預(yù)防接種，提高機(jī)體免疫水平是我國現(xiàn)階段控制或消滅布魯氏菌病的主要措施，常用疫苗有布病2號(hào)（S2）弱毒苗，布病5號(hào)（M5）弱毒苗及S19號(hào)菌苗。但最好的辦法是淘汰病牛和疫苗接種相結(jié)合。Hinic 等建立的即可常規(guī)操作又可Real-Time PCR 的新方法,特異性強(qiáng),可鑒別6個(gè)種的布魯氏菌。不受布病威脅和已經(jīng)控制的地區(qū)主張不接種疫苗。

2.產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特菌(LM)是一種重要的人獸共患食源性病原菌，可引起妊娠奶牛的菌血癥、死胎或流產(chǎn)。

主要檢測(cè)手段是細(xì)菌分離、血清學(xué)檢測(cè)、ELISA技術(shù)、基因探針技術(shù)、PCR方法等。Ingianni A等(2001)建立了用PCR和DNA探針相結(jié)合快速檢測(cè)食品中李斯特菌的方法。青霉素和磺胺-三甲氧芐胺嘧啶是治療李斯特菌病的首選藥物。治療時(shí)應(yīng)注意病畜脫水和代謝酸中毒癥狀。預(yù)防措施主要是確保制作和儲(chǔ)存高質(zhì)量的青貯飼料。

3.結(jié)核病的病原是結(jié)核分枝桿菌，可引起多組織器官形成結(jié)核性肉芽腫。其中生殖器官結(jié)核，可見性機(jī)能紊亂，發(fā)情頻繁，性欲亢進(jìn)，幕雄狂與不孕，孕牛流產(chǎn)，公牛副睪丸腫大，陰莖前部發(fā)生結(jié)節(jié)糜爛等。主要經(jīng)呼吸道、消化道感染。

可通過細(xì)菌學(xué)檢查、牛型結(jié)核分支桿菌皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)判 定。Shah(2002)、Bakshi(2005)各自建立了檢測(cè)牛分枝桿菌和結(jié)核分枝桿菌的多重聚合酶鏈反應(yīng)方法。Pinsky(2008)利用多重實(shí)時(shí)PCR快速將結(jié)核分枝桿菌鑒定到種的水平。發(fā)現(xiàn)疑似病牛應(yīng)立即隔離，確診后一般不予治療，應(yīng)嚴(yán)格按照農(nóng)業(yè)部有關(guān)規(guī)范處理，撲殺病牛及陽性牛。

4.牛支原體可導(dǎo)致生殖道炎癥、流產(chǎn)與不孕等多種疾病。國內(nèi)、外牛支原體病的確診方法主要集中在病原體的分離鑒定、血清學(xué)檢測(cè)、基因診斷三個(gè)方面。支原體菌落應(yīng)具有“煎蛋樣”典型特征，液體培養(yǎng)基由紅色變?yōu)辄S色且透亮，通過配套的生化試驗(yàn)可以對(duì)牛支原體進(jìn)行鑒定。

血清學(xué)檢測(cè)被認(rèn)為是診斷牛支原體感染的手段之一，尤其對(duì)慢性感染或應(yīng)用過抗生素的病例更加適合，包括間接血凝試驗(yàn)、生長抑制試驗(yàn)及間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)等方法。用處理過的牛支原體全菌蛋白作包被抗原的間接 ELISA 是當(dāng)今最主要的血清學(xué)檢測(cè)方法。Patrizia(2005)利用牛支原體表面脂蛋白P48 體外表達(dá)產(chǎn)物建立了診斷方法。

Nicholas(2002)研制了牛支原體滅活疫苗,可以有效降低犢牛肺臟的損傷。目前治療本病可用新胂凡納明靜注，土霉素與鏈霉素聯(lián)合治療也有效果，臨床治愈的牛可長期帶菌而成為傳染源，故仍以淘汰病牛為宜。

5.牛沙門氏病又稱副傷寒，是由沙門氏菌屬細(xì)菌引起的疾病的總稱，犢牛多表現(xiàn)為敗血癥和腸炎，也可使懷孕母牛發(fā)生流產(chǎn)。動(dòng)物在腸炎或敗血癥后引起流產(chǎn)，通常會(huì)發(fā)展成為膿毒敗血性子宮內(nèi)膜炎和腹膜炎，并通常引起死亡。此病一年四季均可發(fā)生。

因病原體有抗藥性，使用抗生素治療應(yīng)做體外藥敏試驗(yàn)。新霉素和弗氏絲菌素常常有效，氯霉素和慶大霉素的抗藥性很少見，二甲氧二氨基嘧啶和磺胺二甲醚定的聯(lián)合用藥也經(jīng)常使用。脫水時(shí)應(yīng)補(bǔ)液。預(yù)防應(yīng)注意加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，消除發(fā)病誘因，保持飼料和飲水的清潔衛(wèi)生。目前國內(nèi)已研制出牛的副傷寒疫苗，必要時(shí)可選擇使用。

6.彎曲桿菌病原名弧菌病，現(xiàn)認(rèn)為自然交配引起的彎曲桿菌病是牛發(fā)生不育的重要原因，可引起牛散發(fā)性流產(chǎn)。病菌可定植于陰道前庭，然后進(jìn)入子宮，引起溫和性子宮內(nèi)膜炎和輸卵管炎。后果是胚胎早期死亡并被吸收，從而不斷表現(xiàn)假發(fā)情，不少牛發(fā)情周期不規(guī)則和特別延長。有些胎兒死亡較遲，則發(fā)生流產(chǎn)。動(dòng)物感染后可從糞便中排菌，也可通過牛奶和其他分泌物排出，污染飲水、食物或飼料。

確診需進(jìn)行病菌亞種的分離鑒定，采取流產(chǎn)牛血清或子宮頸、陰道粘液以試管凝集反應(yīng)檢查其中抗體有助于本病診斷。Yang C等(2003)建立了應(yīng)用實(shí)時(shí)PCR技術(shù)定量檢測(cè)在家禽，牛奶和水環(huán)境中的空腸彎曲菌的方法。淘汰有病種公牛，選用健康公牛進(jìn)行交配或人工受精是控制本病的重要措施。治療可選用四環(huán)素族抗生素、鏈霉素或喹諾酮，同時(shí)應(yīng)進(jìn)行對(duì)癥治療。

7.地衣芽孢桿菌病導(dǎo)致的流產(chǎn)常發(fā)生于懷孕晚期，表現(xiàn)為壞死性胎盤炎，胎盤子葉間隙肥厚和胎位不正。目前無血清學(xué)檢測(cè)方法?？股刂委熜Ч睢?duì)其他混合感染的病原菌進(jìn)行檢測(cè)和對(duì)青貯飼料及飲水進(jìn)行細(xì)菌計(jì)數(shù)很重要。

8.萊姆病病原為伯氏疏螺旋體，早期懷孕母牛感染后可發(fā)生流產(chǎn)。在蜱叮咬動(dòng)物時(shí)，隨蜱唾液進(jìn)入皮膚感染。防治本病應(yīng)避免動(dòng)物被蜱叮咬并采取有效措施滅蜱。治療藥物有青霉素、四環(huán)素、紅霉素、強(qiáng)力霉素等，大劑量使用并進(jìn)行對(duì)癥治療，可收到良好效果。

9.鉤端螺旋體病的病原體一般是哈特焦鉤端螺旋體，常引起奶牛不孕和流產(chǎn)。寄生在尿道和生殖道，母牛發(fā)生亞臨床癥狀感染12周后，如果與其他菌混合感染，通常會(huì)出現(xiàn)慢性流產(chǎn)。長期以來顯微凝集試驗(yàn)是一種標(biāo)準(zhǔn)的檢測(cè)技術(shù)，主要檢測(cè)IgM抗體。常用的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)試劑盒通常檢驗(yàn)含量較多的IgG。PCR技術(shù)也是可選方法。Djadid(2009)建立了一個(gè)簡單而快速的巢式聚合酶鏈反應(yīng)以區(qū)分致病性和非病原性鉤端螺旋體菌。Lin X等(2009)應(yīng)用環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增方法檢測(cè)致病性鉤端螺旋體。

其他細(xì)菌病：引起散發(fā)性流產(chǎn)的病原菌大致可分為2類：從正常牛的前生殖道能分離到的細(xì)菌和不能分離到的細(xì)菌。正常情況下能分離到的細(xì)菌有：睡眼嗜血桿菌、化膿隱秘桿菌、停乳鏈球菌和相異脲原體。這些病原菌會(huì)通過子宮頸進(jìn)入子宮內(nèi)，引起胎兒的其他疾病。第二類細(xì)菌包括假結(jié)核耶爾森氏菌、溶血性曼氏桿菌、紅斑丹毒絲菌和金黃色葡萄球菌。母牛發(fā)生菌血癥時(shí)，可以發(fā)胎兒感染。通過這種方式，化膿隱秘桿菌也會(huì)侵入胎兒體內(nèi)，通過靜脈途徑感染母?？梢鹆鳟a(chǎn)。

另外還有原蟲性流產(chǎn)、衣原體和立克次氏體以及真菌性流產(chǎn)。

三、防治

牛群暴發(fā)流產(chǎn)沒有規(guī)律性。單個(gè)的流產(chǎn)可能是暴發(fā)的前兆，但數(shù)周內(nèi)可能不明顯。對(duì)牛場(chǎng)檢查時(shí)，需要從病史、牛的臨床檢查、胎牛尸檢、血清學(xué)、基因?qū)W等方面綜合進(jìn)行結(jié)果分析。防治微生物性流產(chǎn)應(yīng)注意。

1.改善牛場(chǎng)的環(huán)境與工藝，以降低牛群發(fā)生疾病的機(jī)會(huì)。

2.引種時(shí)應(yīng)嚴(yán)格檢疫，引進(jìn)后應(yīng)隔離至少1個(gè)月，無傳染病發(fā)生者才能并群飼養(yǎng)。

3.免疫接種與疫病檢疫，應(yīng)根據(jù)《中華人民共和國動(dòng)物防疫法》及配套法規(guī)的要求，結(jié)合當(dāng)?shù)貙?shí)際情況有選擇的進(jìn)行疾病的預(yù)防接種工作。

4.使用獸藥時(shí)應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行休藥期。

5.重視牛群的健康管理，充分應(yīng)用現(xiàn)代化的信息技術(shù)對(duì)牛場(chǎng)進(jìn)行管理。

（略）