姜麗紅，溫 琦，張 偉

(1.長春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林 長春 130117;2.城固縣醫(yī)院，陜西 城固 723200)

心肌缺血時，血小板活化開始，血小板聚集和釋放反應(yīng)增強(qiáng)，血小板活化能夠造成動脈粥樣硬化和血栓形成，這些現(xiàn)象類似中醫(yī)“瘀血”的病理改變[1]。因此，本實驗建立在急性心肌損傷大鼠模型的基礎(chǔ)上,采用放射免疫法檢測模型大鼠血漿血栓素B2和6-酮-前列腺素F1a與“瘀血”相關(guān)的指標(biāo),觀察加味陽和湯對心肌損傷模型大鼠血漿“瘀血”相關(guān)指標(biāo)的影響，現(xiàn)將研究結(jié)果報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料 健康雄性SD大鼠40只，體質(zhì)量(258±32)g，吉林大學(xué)動物實驗中心提供。加味陽和湯(熟地黃20 g，鹿角膠10 g,麻黃10 g，肉桂10 g，炮姜10 g，白芥子10 g,丹參15 g，地龍10 g，生甘草10 g等9味藥)濃縮湯劑由長春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院制劑室提供；硫氮卓酮片(HB)，30 mg/片，上海延安制藥廠產(chǎn)品；異丙腎上腺素粉劑和二磷酸腺苷(ADP)為Sigma公司產(chǎn)品，用緩沖液配成終濃度為3 μmol/L的溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用;枸櫞酸鈉，500 g/瓶，用雙蒸水配成3.8%的溶液;消炎痛-EDTA·Na2液、6-酮-前列腺素F1a放免試劑盒及血栓素B2放免試劑盒由南京建成生物研究所提供(批號20100416)；乙醚，500 mL/瓶,日產(chǎn)BH-2型Olympus顯微鏡;PABER-1型血小板聚集、血凝測試儀,TLL-C型臺式冷凍離心機(jī)。

1.2 方法 將動物隨機(jī)分為4組，每組8只。生理鹽水組；心肌損傷模型組；加味陽和湯組；硫氮卓酮組。以上各組分別用10 mL/kg生理鹽水或相應(yīng)等體積的藥物懸液連續(xù)灌胃14 d，每日2次,自第12天上午灌胃后1 h，按文獻(xiàn)[2]復(fù)制心肌損傷性大鼠，心肌損傷模型組、加味陽和湯組、硫氮卓酮組皮下注射異丙腎上腺素48 μmol/(kg·d)，生理鹽水組皮下注射等量生理鹽水，連續(xù)3 d,全部動物于末次注射異丙腎上腺素24 h后乙醚麻醉動物,剖腹并分離腹主動脈，采血5 mL，其中2 mL放入含38 g/L枸櫞酸鈉(按血液與抗凝劑9∶1比例配備)的血小板最大聚集率(MPAR)離心管，以200 r/min離心8 min,分離上層富血小板血漿(PRP)，余血再以2 200 r/min離心10 min，分離上層貧血小板血漿(PPP)，用PPP調(diào)整PRP,使其血小板數(shù)量為4×105/mm-3，在血小板聚集儀上測定；3 mL放入含消炎痛-EDTA·Na2的“血漿血栓素B2及6-酮-前列腺素F1a”(按血液與抗凝劑50∶1比例配備)離心管中，4 ℃離心，3 000 r/min，離心15 min，分離血漿，-20 ℃保存，按操作說明測定各指標(biāo)。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 實驗數(shù)據(jù)用SPSS 10.0軟件進(jìn)行非參數(shù)kruskal-wallis檢驗及mann-whitney檢驗，采用Ridit分析法統(tǒng)計。

2 結(jié)果

實驗結(jié)果顯示，心肌損傷模型組大鼠血漿血栓素B2含量明顯高于生理鹽水組、6-酮-前列腺素F1a含量顯著低于生理鹽水組，TXB2/6-keto-PGF1a比值明顯高于生理鹽水組(P<0.01)；與心肌損傷模型組比較，加味陽和湯組大鼠血漿血栓素B2含量顯著降低、6-酮-前列腺素F1a含量顯著升高,TXB2/6-keto-PGF1a比值明顯降低(P<0.01)。加味陽和湯可以改善心肌損傷大鼠的血小板集聚狀態(tài)，減輕缺血時對大鼠心肌的損傷，見表1。

表1 對心肌損傷大鼠血漿血栓素B2和6-酮-前列腺素F1a含量的影響

3 討論

異丙腎上腺素造成大鼠急性心肌損傷病理變化，相當(dāng)于中醫(yī)血瘀證的病理表現(xiàn)。研究資料[3]表明，血小板前列腺素(PG)代謝亢進(jìn)與血瘀證密切相關(guān)。血栓素B2、6-酮-前列腺素F1a為血栓素A2和前列腺素(PGI2)的穩(wěn)定代謝產(chǎn)物，構(gòu)成了PGI2-TXA2平衡調(diào)節(jié)系統(tǒng),在調(diào)節(jié)血小板功能，維持血管壁完好和張力方面具有舉足輕重的作用。TXB2升高、6-keto-PGF1a下降則心肌缺血加重,其兩者比值也隨之下降,說明冠脈痙攣引起的心肌缺血時，血小板功能會隨之發(fā)生改變。因此測定其代謝產(chǎn)物，觀察血小板活化聚集情況對心肌損傷的監(jiān)測是非常有意義的。

本實驗研究結(jié)果表明，心肌損傷模型組大鼠血漿血栓素B2含量明顯高于生理鹽水組、6-酮-前列腺素F1a含量顯著低于生理鹽水組,TXB2/6-keto-PGF1a比值明顯高于生理鹽水組(P<0.01)，說明模型大鼠存在血瘀狀態(tài)；加味陽和湯組大鼠血漿血栓素B2顯著低于心肌損傷模型組、6-酮-前列腺素F1a顯著高于心肌損傷模型組，兩者比值明顯低于心肌損傷模型組。結(jié)果表明，加味陽和湯可以顯著改善心肌損傷模型大鼠的血瘀狀態(tài)。

[1]周安方,劉建榮,張茂林,等.瀉肝補(bǔ)腎湯對前列腺炎性大鼠血漿血栓素B2和6-酮-前列腺素F1a的影響[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊,2007,25(8):1551-1552.

[2]Gao F,Chen J,Lopez BL,ChristopherTA,Gu JLysko P,Ruffolo RRJr,Ohlstein EH,Ma XL,Yue TL.Comparison of bisoprolol andcarvedilol cardioprotection in a rabbit ischemia and reperfusion model[J].EurJPharmacol,2000,406(1):109-116.

[3]李泓.血漿TXA2、PGI2水平與血瘀證及活血化瘀研究[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志,1995,15(11):701.