陶 君，張文彥，王乃浩

（1.河北奧星集團藥業(yè)有限公司，新樂 050700；2.河北省衛(wèi)生廳衛(wèi)生監(jiān)督局，石家莊 050051）

頭孢地嗪鈉原料藥中聚合物的測定

陶 君1，張文彥2，王乃浩1

（1.河北奧星集團藥業(yè)有限公司，新樂 050700；2.河北省衛(wèi)生廳衛(wèi)生監(jiān)督局，石家莊 050051）

[目的]建立原料藥頭孢地嗪鈉中聚合物含量的測定方法。[方法]用凝膠色譜柱，采用自身對照外標法，測定頭孢地嗪鈉原料中聚合物含量。[結果]頭孢地嗪締合物在17.83～178.26 g/L范圍內，以及頭孢地嗪聚合物在5.237～50.041 g/L范圍內，與峰面積呈良好的線性關系。[結論]該方法操作簡單，準確，靈敏度高。

頭孢地嗪鈉；聚合物；凝膠色譜柱；自身對照外標法

多年研究業(yè)已證明，由β-內酰胺類抗生素藥物所致的速發(fā)型過敏反應并非藥物本身所致，而與藥物中存在的高分子雜質有關，同時高分子雜質還和藥物的毒性反應有關[1]。隨著現(xiàn)代生產工藝的不斷改進和提高，半合成類抗生素的高分子雜質主要是內源性聚合物，所以對內源性聚合物的控制是當前抗生素藥物高分子雜質控制的重點。國家食品藥品監(jiān)督管理局標準 WS1－（X－262）－2003Z 中對頭孢地嗪聚合物未做規(guī)定，日本藥典（JP-15）中“頭孢地嗪鈉”品種項下也未收載此檢查項。參照《中國藥典》2010年版各β-內酰胺類抗生素高分子聚合物的測定方法[2]，采用以Sephadex G-10為凝膠介質的凝膠色譜法（分子排阻色譜法），對本公司自制的頭孢地嗪鈉高分子聚合物進行檢查，并進行了必要的方法學研究，確定其方法可行，可控制其生產及貯藏過程中產生的高分子雜質的量，為聚合物的質量控制提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

Lab Alliance高效液相色譜儀。ANSTAR色譜數(shù)據(jù)工作站。色譜柱：Sephadex G-10凝膠色譜柱（填料Sephadex G-10，柱長30 cm，柱內徑1.5 cm，大連依利特分析儀器有限公司）。

頭孢地嗪對照品（中國藥品生物制品檢定所提供）。頭孢地嗪鈉原料（20090601；20090602；20090603）為本公司自制。上市對照樣品（0905059）為山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司生產，藍色葡聚糖2000（Pharmacia 17-0360-01分裝）。磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉（為分析純）。

2 方法與結果

2.1 實驗溶液的制備 0.1 g/L藍色葡聚糖2000溶液的制備：取藍色葡聚糖2000約10mg，置100mL量瓶中，加水使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。對照溶液的制備：取頭孢地嗪對照品約25mg，精密稱定，置50mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻；再精密量取5mL置25mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。供試品溶液的制備：取本品約0.2 g，精密稱定，置10mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2 流動相的選擇

2.2.1 流動相B的選擇 分別以水和0.5%葡萄糖溶液為流動相，考察頭孢地嗪鈉和葡聚糖2000締合峰的保留時間和塔板數(shù)以及托尾因子。實驗結果表明，超純水作流動相時，締合峰對稱性良好，可滿足要求，故選擇較簡單的超純水作流動相B。

2.2.2 流動相A pH值的選擇 在堿性條件下，頭孢菌素極易發(fā)生聚合反應，測得的高分子聚合物難以反映樣品本身的實際含量。在接近中性的pH條件下選取3個水平進行驗證，分別選用pH5.8、pH7.0和pH7.8的磷酸鹽緩沖液為流動相進行測定。結果表明pH5.8時聚合物與主峰較近，分離不完全。pH7.0時高分子聚合物峰形和pH8.0沒有差異，從柱子的耐受性和穩(wěn)定性方面考慮，故優(yōu)選pH7.0的磷酸鹽緩沖液作為流動相A。

2.2.3 流動相A中鹽濃度的選擇 流動相的種類及其濃度可以改變主成分的色譜行為，反離子PO4-3明顯地改變頭孢菌素在Sephadex G-10中的色譜行為[4]。實驗中分別利用0.1、0.05、0.01mol/L磷酸鹽緩沖液作為流動相，以1.0mL/min的流速進行測定。結果表明0.1mol/L比0.05mol/L的好，聚合物峰和主峰間隔較長，有效分離，且聚合物的峰形基本對稱。0.01mol/L時聚合物與頭孢地嗪不能有效分離。故選用0.1mol/L磷酸鹽緩沖液作為流動相A。

2.3 系統(tǒng)適用性實驗 以流動相B為流動相，取0.1 g/L藍色葡聚糖2000溶液及對照溶液各200μL分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。另以流動相A為流動相，取0.1 g/L藍色葡聚糖2000溶液及供試品溶液各200μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖（見圖1～4）。各項參數(shù)見表1。

表1 系統(tǒng)適用性實驗結果Tab.1 Theexperimental resultsof system ic applicability

1）在流動相A、B中，理論板數(shù)以藍色葡聚糖2000峰計算分別為 1188和 925（＞700），拖尾因子分別為 1.136 和 0.833（＜2.0）；

2）在兩種流動相系統(tǒng)中藍色葡聚糖2000峰的保留時間的比值為1.03（在0.93～1.07之間）。在流動相A中，藍色葡聚糖2000峰與供試品溶液中聚合物峰保留時間的比值為0.99（在0.93～1.07之間）。在流動相B中，藍色葡聚糖2000峰的保留時間與對照溶液主峰保留時間的比值為0.99（在0.93～1.07之間）。

結果表明：上述各項參數(shù)均符合系統(tǒng)適用性實驗的要求。

2.4 進樣重復性實驗 以流動相B為流動相，精密量取對照溶液200μL，連續(xù)進樣5次，記錄峰面積和保留時間，測定結果表明，連續(xù)進樣5次，峰面積的相對均數(shù)標準偏差（RSD）為0.60%（＜5.0%），保留時間的RSD為0.50%，表明本系統(tǒng)進樣重復性良好，符合系統(tǒng)適用性實驗的要求。

2.5 締合物峰線性實驗 精密稱取頭孢地嗪對照品25.15mg，置50mL量瓶中，加水適量溶解并稀釋至刻度，搖勻，得標準貯備液，精密量取標準貯備液1.0、2.0、3.0、5.0、10.0mL，分別置 25mL 量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，得5個濃度的系列標準工作液。以水為流動相，分別精密量取上述標準工作液各200μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以頭孢地嗪溶液濃度（C）為橫坐標，以締合物峰的峰面積（A）為縱坐標，繪制標準曲線，得線性方程：A=240 101 327.61C+212 542.59，相關系數(shù)r=0.999 97。結果表明，頭孢地嗪對照溶液濃度在17.83～178.26 g/L范圍內，溶液濃度與峰面積呈良好的線性關系。

2.6 高分子聚合物峰線性實驗 精密稱取頭孢地嗪鈉樣品 100、200、300、400、500mg 和 50 g 分別置10mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得6個濃度的工作液，立即精密量取各工作液200μL，以流動項B為流動相，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以樣品濃度（C）為橫坐標，以聚合物峰的峰面積（A）為縱坐標，繪制標準曲線，得線性方程：A=40 112 647.51C－349 464.80，相關系數(shù) r=0.999 6。實驗表明，頭孢地嗪樣品濃度在5.237～50.041 g/L范圍內，溶液濃度與聚合物峰面積呈良好的線性關系。

2.7 高分子聚合物測定重復性實驗 取頭孢地嗪鈉樣品，由同一分析人員平行制備6份供試品溶液，照上述測定法分別測定聚合物，記錄色譜圖，結果表明，由同一分析人員重復測定6次的相對標準偏差為2.56%，表明本方法測定高分子聚合物具有良好的重復性。

2.8 供試品溶液穩(wěn)定性實驗 取頭孢地嗪鈉供試品，制備供試品溶液，分別于1、2、3 h測定聚合物的含量。結果表明，在溶液狀態(tài)下，高分子聚合物的形成是一個動態(tài)的過程，聚合物的含量會隨時間延長而增大，故測定聚合物的含量時應在供試品溶液制備后立即測定。

2.9 供試品中頭孢地嗪聚合物的測定 取3批供試品及上市對照樣品，照上述測定法分別測定其頭孢地嗪聚合物，結果見表2。

表2 頭孢地嗪聚合物測定結果Tab.2 Polymers in Cefodizime determ ination result%

結果表明，結合文獻報道以及本廠3批供試品頭孢地嗪聚合物含量，暫定本品聚合物限度為0.5%，且本廠3批與上市產品無明顯差異。

3 討論

流動相A進行色譜系統(tǒng)選擇時，分別選用pH5.8、pH7.0 和 pH7.8 的磷酸鹽緩沖液和 0.1、0.05、0.01mol/L磷酸鹽緩沖液為流動相對樣品進行分離，結果0.1mol/L磷酸鹽緩沖液（pH7.0）的分離聚合物的效果為佳。流動相B的色譜過程中，純水和0.5%葡萄糖溶液沒有區(qū)別。配好5 000mL流動相A，用已裝好的葡聚糖凝膠柱子，先測系統(tǒng)實驗，符合要求，再測對照線性，最后測供試品，由于測供試品時間長，1 d進3針樣，連測2 d完成供試品的精密度試驗，結果RSD=2.0%較好。

由于本品易吸濕，稱完樣立即將剩余的樣品用膠布封好放在裝有干燥劑的瓶里并保存在冰箱內（2～10℃）。這樣才能保證同一瓶樣品先后稱兩次測得的聚合物含量一致。用此方法測本品聚合物含量，條件不改變，即使先測對照品，隔6、7 d再測樣品，供試品中聚合物峰保留時間與對照品峰保留時間比仍符合要求，且RSD較好。說明用方法測此本品聚合物準確、重現(xiàn)性較好。

本品屬第3代注射用頭孢菌素，其高分子聚合雜質引發(fā)過敏反應，控制其聚合物限量是極其重要的。根據(jù)本實驗對本品制劑聚合物的檢測數(shù)據(jù)其限量控制在小于0.7%是安全、合理的。

[1]金少鴻.β-內酰胺類抗生素過敏反應研究進展[J].中國新藥雜志,1994，3（4）：38-41.

[2]國家藥典委員會.中國藥典·二部 [S].北京：中國醫(yī)藥出版社，2010:附錄 35,附錄H.

[3]胡昌勤.高效液相色譜法在抗生素質控分析中的應用（下冊）[M].北京：北京氣象出版社，2001：191－195.

[4]陳 星.凝膠色譜法測定頭孢替唑鈉的聚合物[J].海峽藥學.2004，16（2）：45－46.

Determination of the polymers in Cefodizime Sodium for crude drugs

TAO Jun1,ZHANGWen-yan2,WANGNai-hao1
（1.HebeiAoxing Group PharmaceuticalDevelopment Limited Company,Xinle 050700,China;2.Health DepartmentofHealth Supervision Bureau ofHebeiProvince，Shijiazhuang 050051,China）

[Objective]To establish themethod for determination of the polymers in Cefodizime Sodium in crude Drugs.[Methods]The polymers analyzer was used with Sephadex G-10 column.The self control external standard method was used for quantitative analysis.[Results]The linear rangesof theassociationsin Cefodizimeand the polymersin Cefodizimewere17.83～178.26 g/Land 5.237～50.041 g/L.[Conclusion]Themethod is simple,accurate and sensitive.

Cefodizime Sodium;polymers;Gelfiltratrion chromatograpy;externalstandardmethod

R283.6

A

1672-1519(2011)03-0248-03

陶 君（1975－），男，工程師，主要從事新藥工藝研究和分析檢驗研究。

2011-01-19）