周建林，杜長生

南京星銀藥業(yè)有限公司，南京 211200

復(fù)方萘甲唑啉鼻噴霧劑主要含有萘甲唑啉和馬來酸氯苯那敏，兩者分別為抗組胺和血管收縮藥，對鼻黏膜充血、腫脹有較好的療效。適用于急性鼻炎、鼻竇炎以及變態(tài)反應(yīng)性鼻炎的發(fā)作期。目前含鹽酸萘甲唑啉和馬來酸氯苯那敏的復(fù)方制劑，有滴鼻液、滴眼液等，對兩藥的含量測定，部頒標準[1]采用分光光度法，本文則綜合考察文獻方法[2-5]建立高效液相色譜法，測定該劑型兩成分含量。

1 儀器和試藥

LC-10ATVP 高效液相色譜儀 (日本島津)，SPD-10AVP紫外檢測器，CTO-10AVP柱溫箱，浙大N-2000色譜工作站。

復(fù)方萘甲唑啉鼻噴霧劑樣品 （規(guī)格：10 mL，鹽酸萘甲唑啉5 mg，馬來酸氯苯那敏10 mg）批號為090601、090701、090702、090703、090704，由南京星銀藥業(yè)有限公司生產(chǎn)；鹽酸萘甲唑啉對照品、馬來酸氯苯那敏對照品均由中國藥品生物制品檢定所提供；甲醇為色譜純；三乙胺、磷酸二氫鉀、磷酸均為分析純；水為重蒸餾水。

2 方法和結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱為漢邦 C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：甲醇-水-三乙胺-磷酸二氫鉀-磷酸（540︰460︰2︰3.4︰1）；流速 1 mL·min-1；柱溫 30℃；紫外檢測波長264 nm；進樣量20 μL。理論塔板數(shù)按萘甲唑啉峰計算不低于3000；按氯苯那敏峰計算不低于3000。萘甲唑啉和氯苯那敏的分離度大于1.5。主藥、雜質(zhì)呈基線分離。液相色譜圖見圖1。

圖1 鹽酸萘甲唑啉、馬來酸氯苯那敏的液相色譜圖

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液精密稱取經(jīng)105℃干燥至恒重的鹽酸萘甲唑啉對照品25 mg，馬來酸氯苯那敏對照品50 mg，置50 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻；再精密量取5 mL，置100 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液精密量取供試品5mL置100mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.3 線性關(guān)系考察

精密稱取馬來酸氯苯那敏對照品20 mg和鹽酸萘甲唑啉對照品10 mg，置于50 mL量瓶中，加水適量使溶解，后加水稀釋至刻度，搖勻，制成混合對照溶液。分別精密吸取上述混合對照溶液1、2、3、5、10 mL分別置50 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取上述5種濃度對照液20 μL注入液相色譜儀，測定峰面積，以進樣濃度X（μg·mL-1）為橫坐標，以峰面積Y為縱坐標，繪制標準曲線，線性回歸方程分別為：馬來酸氯苯那敏：Y=1.84×104X+3.45×103,r=1.0000； 鹽酸萘甲唑啉：Y=2.75×104X-1.38×104，r=0.9976。 結(jié)果表明，馬來酸氯苯那敏濃度在 8.03～80.30 μg·mL-1和鹽酸萘甲唑啉濃度在4.04～40.40 μg·mL-1線性關(guān)系良好。

2.4 精密度試驗

分別精密吸取復(fù)方萘甲唑啉鼻噴霧劑供試品溶液，進樣20 μL，按上述色譜條件連續(xù)重復(fù)進樣5次，測定峰面積，RSD為0.87%。

2.5 重復(fù)性試驗

取復(fù)方萘甲唑啉鼻噴霧劑供試品按上述供試品溶液的制備方法，平行制備5份供試品溶液，進樣20 μL，計算鹽酸萘甲唑啉的含量為98.9%，RSD=0.9%，馬來酸氯苯那敏的含量為97.8%，RSD=1.2%。

2.6 回收率試驗

取復(fù)方萘甲唑啉鼻噴霧劑供試品5份，分別精密吸取5mL，置于100mL量瓶中，精密加入鹽酸萘甲唑啉對照品溶液和馬來酸氯苯那敏對照品溶液各5mL，用水溶解稀釋至刻度，進樣20 μL，測得回收率為98.22%～100.13%，n=5，RSD＜0.85%。分別稱取鹽酸萘甲唑啉和馬來酸氯苯那敏的對照品，配制成濃度為0.6 mg·mL-1和 1.2mg·mL-1、0.5mg·mL-1和 1.0mg·mL-1、0.4 mg·mL-1和 0.8mg·mL-1,考察了高、中、低 3 個劑量的回收率，分別為98.58%、99.14%、100.43%。

2.7 穩(wěn)定性考察

取供試品溶液在 0、2、4、6、8、10、12 h 測定峰面積，計算RSD=1.7%。表明供試品在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 最小檢測限

取馬來酸氯苯那敏對照品溶液 （濃度0.04 mg·mL-1），逐級稀釋，直至信噪比（S/N）=3，最小檢測濃度為 2 ng·mL-1，檢測限度為 0.04 ng(2 ng·mL-1×20 μL)。

取鹽酸萘甲唑啉對照品溶液 （濃度0.05mg·mL-1），逐級稀釋，直至信噪比（S/N）=3，最小檢測濃度為12.5 ng·mL-1，檢測限度為 0.25ng(12.5ng·mL-1×20μL)。

2.9 含量測定

5個不同批號的供試品分別用高效液相色譜法與分光光度法測定標示含量，結(jié)果見表1。

3 討 論

本實驗考察了流動相中不同比例甲醇-水、甲醇-磷酸二氫鉀溶液體系對測定的影響，在甲醇-水為流動相時，馬來酸氯苯那敏出現(xiàn)分裂峰，說明流動相比例和流動相的pH值不適宜，造成馬來酸氯苯那敏的分裂峰，出現(xiàn)了馬來酸和氯苯那敏兩個峰；當(dāng)改變流動相條件，加入磷酸二氫鉀溶液和三乙胺，能改善馬來酸氯苯那敏的峰形和解決鹽酸萘甲唑啉、馬來酸氯苯那敏峰形拖尾現(xiàn)象。合適的磷酸二氫鉀溶液濃度能避免色譜柱的堵柱現(xiàn)象。本法在進行輔料干擾試驗時，未發(fā)現(xiàn)輔料對測定結(jié)果的干擾。本法能夠有效地控制產(chǎn)品的質(zhì)量。

表1 高效液相色譜法與分光光度法測定結(jié)果

[1] 國家藥典委員會.衛(wèi)生部藥品標準：新藥轉(zhuǎn)正標準第十四冊[S].北京：人民衛(wèi)生出版社，1998：12-4.

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