孫亞波 ，宋先忱 ，，叢玉艷 ，李豐田 ，劉興偉 ，張喜臣 ，豆興堂 ，邵孟越 ，王家明

（1.遼寧省畜牧科學(xué)研究院，遼陽(yáng) 111000；2.遼寧省遼寧絨山羊原種場(chǎng)有限公司，蓋州 115200；3.沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)畜牧獸醫(yī)學(xué)院）

遼寧絨山羊產(chǎn)絨量高，絨品質(zhì)好，改良效果顯著，遺傳性能穩(wěn)定。優(yōu)良的種公羊是保證遼寧絨山羊群體遺傳性能穩(wěn)定提高的前提，在強(qiáng)度較高的采精模式下，種公羊?qū)θ占Z營(yíng)養(yǎng)水平要求較高，同時(shí)對(duì)某些與繁殖性能密切相關(guān)的微量礦物質(zhì)元素、維生素和甾醇類及環(huán)烯醚萜類等有機(jī)活性成分需求較高。中草藥內(nèi)既含有許多營(yíng)養(yǎng)成分，又存在著多種生物活性物質(zhì)，是純天然有機(jī)物質(zhì)，具有營(yíng)養(yǎng)與調(diào)理并存的雙重作用，同時(shí)毒副作用小、無耐藥性、不易殘留。中草藥添加劑的有效成分主要有生物堿、揮發(fā)油、鞣類、樹脂類、有機(jī)酸、糖類、蛋白質(zhì)和氨基酸，以及油脂、植物色素、維生素和各種微量和常量元素等。中草藥本身為天然有機(jī)物和無機(jī)物，保持了各種成分結(jié)構(gòu)的自然狀態(tài)和生物活性而具有多能性，如營(yíng)養(yǎng)作用、增強(qiáng)免疫作用、激素樣作用、抗應(yīng)激作用和抗菌作用等。

根據(jù)中獸醫(yī)理論，淫羊藿有調(diào)節(jié)內(nèi)分泌功能，能促進(jìn)精液分泌、雄性性腺功能，增強(qiáng)腎上腺皮質(zhì)功能；其有效成分為淫羊藿苷、淫羊藿黃酮、木蘭堿、多糖、揮發(fā)油、蠟醇、植物甾醇、鞣質(zhì)、油脂等。枸杞子有滋補(bǔ)肝腎，益精明目之功效，枸杞多糖是枸杞子的有效活性成分，具有抗氧化和提高免疫力的作用。巴戟天有補(bǔ)腎助陽(yáng)、祛風(fēng)除濕、強(qiáng)筋健骨的功效，具有腎上腺皮質(zhì)激素樣作用，其主要成分為甲基異茜草素、大黃甲醚、水晶蘭甙和強(qiáng)心甙等蒽醌類有機(jī)活性成分。

以淫羊藿、枸杞子和巴戟天等中草藥為主調(diào)制的中草藥添加劑具有固精、補(bǔ)腎、抗氧化和增強(qiáng)免疫的功效。本研究擬對(duì)在高強(qiáng)度采精模式下的種公羊應(yīng)用中草藥添劑，探討其對(duì)精液品質(zhì)和激素水平的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物及分組 試驗(yàn)動(dòng)物來自遼寧絨山羊原種場(chǎng)有限公司科技示范場(chǎng)。選6只體況良好、年齡3.79歲±0.29歲、體重77.04 kg±2.96 kg、精液品質(zhì)相近的采精種公羊?yàn)檠芯繉?duì)象。將6只種公羊隨機(jī)分為2組，以其中3只作為試驗(yàn)組，另外3只作為對(duì)照組。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及飼養(yǎng)管理 復(fù)方中草藥添加劑以淫羊藿、巴戟天等為主，并用大麥為輔料配制而成。用玉米面作為載體，中草藥按照1∶3的比例與玉米面混合加入日糧精料中，使用劑量為試驗(yàn)組每只羊15 g/d。所有參試動(dòng)物每天上午8：00和下午16：00 2次飼喂，自由采食和飲水。對(duì)照組和試驗(yàn)組精料營(yíng)養(yǎng)水平相同，精料由玉米、豆粕、磷酸氫鈣、石粉、食鹽和預(yù)混劑組成；粗飼料由苜蓿干草和羊草組成，苜蓿干草由遼寧省畜牧草業(yè)工程技術(shù)中心提供。試驗(yàn)動(dòng)物精料組成和營(yíng)養(yǎng)水平如表1所示。

1.3 樣品采集及試驗(yàn)指標(biāo)測(cè)定 本研究預(yù)試期30 d，試驗(yàn)期90 d，每30 d采集一次血樣和精液樣品，用Eppendorf-5804R型低溫高速離心機(jī)以4 500 r/min的速度離心15 min，制備血漿和精漿并于-70℃保存。采精量測(cè)定用2mL注射器從集精杯中直接吸取測(cè)量；精子活率檢測(cè)使用Leica DM100型顯微鏡進(jìn)行；精子密度應(yīng)用德國(guó)PHOTOMETER-SDM5型全自動(dòng)精子密度儀進(jìn)行檢測(cè)；精液pH值應(yīng)用pH儀測(cè)定；精子畸形率和頂體完整率通過考馬斯亮藍(lán)染色，在Leica DM100型顯微鏡下觀測(cè)計(jì)算獲得；美蘭褪色時(shí)間通過美蘭染色［1］計(jì)時(shí)獲得。血漿和精漿生殖激素應(yīng)用BioTek GEN5全自動(dòng)酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)試劑盒由天津瑞普生物公司提供。

表1 精料組成及營(yíng)養(yǎng)水平

1.4 數(shù)據(jù)處理 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行獨(dú)立樣本 t檢驗(yàn)（independent-samples T test），相關(guān)分析圖應(yīng)用Microsoft Excel制作。

2 結(jié)果與討論

2.1 精液品質(zhì)常規(guī)指標(biāo) 如表2所示，在試驗(yàn)開始前，對(duì)所有參試動(dòng)物進(jìn)行了精液樣品采集，并進(jìn)行檢查。結(jié)果表明，對(duì)照組與試驗(yàn)組在射精量、精子活率、精子密度、精液pH、頂體完整率、精子畸形率和美蘭褪色時(shí)間7項(xiàng)指標(biāo)均差異不顯著（P＞0.05）。

在飼喂中草藥添加劑30 d后，試驗(yàn)組射精量高于對(duì)照組0.13mL，但差異不顯著（P＞0.05）；精子密度高于對(duì)照組 0.43×109個(gè)/mL，差異不顯著（P＞0.05）；頂體完整率高于對(duì)照組1.81%，且差異顯著（P＜0.05）；畸形率低于對(duì)照組1.76%，但差異不顯著（P＞0.05）；美蘭褪色時(shí)間低于對(duì)照組 41.33 min，且差異極顯著（P＜0.01）；而精子活率和精液pH沒有顯著變化。

在飼喂中草藥添加劑60 d和90 d后，試驗(yàn)組射精量和精子密度均極顯著高于對(duì)照組（P＜0.01）；頂體完整率顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）；美蘭褪色時(shí)間極顯著低于對(duì)照組（P＜0.01）；而精子活率和精子畸形率也有改善，但差異不顯著（P＞0.05）；精液pH也沒有顯著變化。

在本研究中，精子活率沒有明顯的變化，因?yàn)槌Ｒ?guī)測(cè)定中精子活率通過顯微鏡目測(cè)獲得，由于受試驗(yàn)觀測(cè)者個(gè)人視覺習(xí)慣以及不同觀測(cè)者個(gè)體差異的影響，測(cè)試結(jié)果誤差較大。因此本試驗(yàn)還引入了美蘭褪色試驗(yàn)作為補(bǔ)充，美蘭褪色試驗(yàn)是一個(gè)氧化還原反應(yīng)試驗(yàn)，氧化后呈蘭色，還原呈無色。精子在美蘭溶液中，呼吸時(shí)氧化脫氫，美蘭獲得氫離子后便由蘭色還原為無色。因此，美蘭溶液褪色時(shí)間的長(zhǎng)短可以反映一定量的精液中精子數(shù)量多少和精子活率的高低，這種方法較顯微鏡目測(cè)精子活率更為精確。從表2可以發(fā)現(xiàn)，試驗(yàn)組美蘭褪色時(shí)間均少于對(duì)照組，并且隨著中草藥添加劑飼喂時(shí)間的延長(zhǎng)，試驗(yàn)組美蘭褪色時(shí)間也呈減少的趨勢(shì)。

在本研究中，對(duì)采精模式下種公羊以15 g/d的水平飼喂復(fù)方中草藥添加劑后，試驗(yàn)組動(dòng)物射精量和精子密度顯著高于對(duì)照組，同時(shí)頂體完整率高于對(duì)照組、美蘭褪色時(shí)間極顯著低于對(duì)照組，表明中草藥添加劑對(duì)精液的數(shù)量和質(zhì)量均有顯著改善。通過圖1和圖2中射精量和精子密度的分布曲線可以發(fā)現(xiàn)，在試驗(yàn)進(jìn)行的90 d中，試驗(yàn)組的射精量分布線和精子密度分布線均位于對(duì)照組上方，射精量較高可能與淫羊藿中含有的淫羊藿苷和揮發(fā)油有關(guān)，后二者具有雄激素樣［2］作用，能促進(jìn)精子產(chǎn)生。試驗(yàn)組頂體完整率較高可能與淫羊藿黃酮和枸杞多糖有關(guān)，后兩者有具有抗氧化功能，小動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)淫羊藿黃酮［3］和枸杞多糖［4］能提高肝臟超氧化物歧化酶（SOD）活性和谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活性，因此二者對(duì)保護(hù)精子完整性有顯著作用。

表2 精液品質(zhì)常規(guī)指標(biāo)

2.2 血漿3種激素的含量 如表3所示，在試驗(yàn)開始前對(duì)照組和試驗(yàn)組的血漿促卵泡素（FSH）含量差異不顯著（P＞0.05），隨著中草藥添加劑的飼喂試驗(yàn)組FSH含量總體呈增加趨勢(shì)，但與對(duì)照組差異不顯著（P＞0.05）。血漿促黃體素（LH）含量也無顯著變化，在3個(gè)試驗(yàn)階段試驗(yàn)組與對(duì)照組均差異不顯著（P＞0.05），但試驗(yàn)組LH水平隨著中草藥添加劑飼喂略呈增加趨勢(shì)。試驗(yàn)組血漿睪酮（T）含量與對(duì)照組差異不顯著（P＞0.05），但試驗(yàn)組T水平隨著中草藥添加劑的飼喂也呈增加趨勢(shì)。試驗(yàn)組的血漿3種激素含量在數(shù)值上均高于對(duì)照組，并且隨著中草藥添加劑的應(yīng)用均呈現(xiàn)增加趨勢(shì)，而且在中草藥添加劑飼喂60 d后最高。

表3 血漿幾種激素含量

2.3 血漿3種激素的相互關(guān)系 在本研究中，血漿和精漿以上3種生殖激素均呈相似的變化趨勢(shì)，隨著中草藥添加劑飼喂時(shí)間延長(zhǎng)試驗(yàn)組激素水平增加，在60 d后出現(xiàn)最高值，試驗(yàn)組激素水平均高于對(duì)照組。此結(jié)果提示對(duì)種公羊飼喂中草藥添加劑2個(gè)月即可對(duì)激素水平產(chǎn)生影響，同時(shí)60 d也正是絨山羊精子發(fā)生到成熟的時(shí)間周期。統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)3種激素之間存在著相關(guān)關(guān)系，其中試驗(yàn)組血漿 T（y，ng/L）與血漿 FSH（x，u/L）呈現(xiàn)對(duì)數(shù)關(guān)系：y=31.07 ln（x）-14.63，r2=0.66，n=9，P＜0.05，如圖 1 所示，與對(duì)照組的相關(guān)方程近似：y=29.47 ln（x）-13.95，r2=0.75，n=15，P＜0.05。

圖1 血漿 T（y，ng/L）與血漿 FSH（x，u/L）的相關(guān)關(guān)系

試驗(yàn)組動(dòng)物血漿 T（y，ng/L）與血漿 LH（x，μg/L）也呈對(duì)數(shù)關(guān)系：y=20.81ln（x）+70.40，r2=0.89，n=9，P＜0.05，如圖2所示，與對(duì)照組的相關(guān)方程近似：y=22.06ln（x）+68.98，r2=0.83，n=15，P＜0.05。

圖2 血漿 T（y，ng/L）與血漿 LH（x，μg/L）的相關(guān)關(guān)系

由以上2組相關(guān)方程可以得出，飼喂中草藥添加劑對(duì)各生殖激素的分泌直接影響較小，試驗(yàn)組的曲線趨勢(shì)與對(duì)照組相似，但試驗(yàn)組曲線均位于對(duì)照組上方，即表現(xiàn)為睪酮水平略高。睪酮能刺激精子發(fā)生、延長(zhǎng)附睪中精子的壽命，本試驗(yàn)中試驗(yàn)組血漿睪酮水平只略高于對(duì)照組，而試驗(yàn)組射精量卻顯著高于對(duì)照組，主要原因可能是淫羊藿苷的雄激素樣作用使試驗(yàn)組動(dòng)物精子產(chǎn)生量增加引起的。

2.4 精漿3種激素的含量 如表4所示，試驗(yàn)組精漿中FSH與對(duì)照組差異不顯著（P＞0.05），并隨著中草藥添加劑飼喂時(shí)間的延長(zhǎng)呈增加趨勢(shì)；精漿LH也呈現(xiàn)類似變化趨勢(shì)；精漿T水平也隨著中草藥添加劑飼喂時(shí)間的延長(zhǎng)呈增加趨勢(shì)，從數(shù)值上看試驗(yàn)組精漿各激素含量都略高于對(duì)照組，并且在中草藥添加劑飼喂60 d后最高。血漿和精漿生殖激素在90 d時(shí)比60 d略低，可能是前者正值12月，氣溫較低（為-20℃左右，而60 d時(shí)氣溫-5℃左右），從而影響了激素的水平。有研究證實(shí)低溫應(yīng)激使大鼠LH與FSH水平降低［5］。

表4 精漿3種激素含量

促卵泡素、促黃體素和睪酮是雄性動(dòng)物主要的生殖激素，對(duì)雄性配子的發(fā)生、發(fā)育、成熟和性行為的表達(dá)具有重要的調(diào)控作用。FSH是由腺垂體分泌的糖蛋白激素，能促進(jìn)精細(xì)管增長(zhǎng)，促進(jìn)生精上皮細(xì)胞發(fā)育和分裂，刺激精原細(xì)胞增殖，并在T的協(xié)同作用下促進(jìn)精子形成。LH是由腺垂體分泌的糖蛋白激素，可促進(jìn)睪丸間質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生并分泌雄激素，對(duì)副性腺的發(fā)育和精子的成熟具有重要作用。T是由睪丸分泌的類固醇激素，動(dòng)物體內(nèi)雄激素的生物活性以T最高，所以通常以T代表雄激素，對(duì)幼年動(dòng)物可維持生殖器官和附性腺以及第二性征的發(fā)育，對(duì)于成年動(dòng)物可刺激精細(xì)管發(fā)育，有利于精子生成，并維持雄性性欲。

2.5 精漿3種激素的關(guān)系 精漿是附睪、精囊、前列腺和尿道球（旁）腺等附屬性腺生成的分泌液所組成的混合物。精漿中的FSH和LH是由垂體前葉分泌再經(jīng)過血液循環(huán)到達(dá)睪丸，而T則主要是在睪丸內(nèi)由睪丸間質(zhì)細(xì)胞以自分泌形式產(chǎn)生，并且T對(duì)下丘腦和垂體有反饋調(diào)節(jié)作用，影響GnRH、LH和FSH分泌。

在本研究中，試驗(yàn)組絨山羊精漿睪酮含量（y，ng/L）與促黃體激素（x，μg/L）之間也存在著對(duì)數(shù)相關(guān)關(guān)系：y=107.90ln（x）+219.11，r2=0.81，n=9，P＜0.05，如圖 3 所示，并且與對(duì)照組的相關(guān)方程相似y=103.18ln（x）+209.54，r2=0.73，n=15，P＜0.05。促黃體素可以刺激睪丸間質(zhì)細(xì)胞分泌睪酮，當(dāng)血中睪酮達(dá)到一定濃度后便可作用于下丘腦和腺垂體抑制GnRH的分泌，進(jìn)而對(duì)LH的分泌又存在著反饋調(diào)節(jié)作用［6］，反之，當(dāng)血中睪酮濃度降低時(shí)，這種抑制作用解除，LH和睪酮的分泌增加，這樣血中睪酮水平得以維持動(dòng)態(tài)平衡，因此將本試驗(yàn)動(dòng)物數(shù)據(jù)擬合成對(duì)數(shù)方程較為合理，并且此時(shí)的相關(guān)系數(shù)也是最高的。

圖3 精漿 T（y，ng/L）與精漿 LH（x，μg/L）的相關(guān)關(guān)系

3 結(jié)論

在本研究中，對(duì)于4歲左右的成年種公羊在較高采精強(qiáng)度下，按照15 g/d的劑量飼喂復(fù)方中草藥添加劑后，參試動(dòng)物的精液數(shù)量和質(zhì)量均得到改善，主要表現(xiàn)為射精量增加、精子密度增加、頂體完整率增加、畸形率減少、美蘭褪色時(shí)間縮短，按照飼喂時(shí)間先后縱向比較又可以發(fā)現(xiàn)，隨著中草藥添加劑飼喂時(shí)間的延長(zhǎng)，試驗(yàn)組射精量呈增加趨勢(shì)，精子密度呈增加趨勢(shì)，美蘭褪色時(shí)間呈降低的趨勢(shì)。中草藥添加劑對(duì)血漿和精漿生殖激素影響較小，統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)組各激素間的相關(guān)關(guān)系與對(duì)照組近似，即保持了絨山羊的生殖內(nèi)分泌平衡狀態(tài)。因此根據(jù)本研究結(jié)果初步認(rèn)為，以淫羊藿、巴戟天和枸杞子為主的復(fù)方中草藥添加劑改善種公羊繁殖性能的效果顯著。

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