高 婭 王 婷

1.河南省嵩縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，河南嵩縣 471400；2.鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，河南鄭州 450014

診斷是否感染HBV主要依賴血清標(biāo)志物檢測，傳統(tǒng)上用ELISA法檢測HBV標(biāo)志物，它主要反映人體對HBV的免疫狀態(tài)，不同血清標(biāo)志模式表示不同的臨床意義。HBV-DNA定量檢測可幫助臨床醫(yī)生判斷乙型肝炎患者的帶毒狀態(tài)和療效觀察[1]。本實(shí)驗(yàn)采用比ELISA更為準(zhǔn)確敏感的電化學(xué)發(fā)光法檢測HBV標(biāo)志物，與實(shí)時(shí)定量PCR-HBV-DNA結(jié)果進(jìn)行分析比較，進(jìn)一步探討HBV標(biāo)志物與HBV-DNA的相關(guān)性，幫助臨床判斷乙肝患者體內(nèi)病毒復(fù)制情況及其傳染性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2010年9 月～2011年6月在鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院診療的乙型肝炎患者204人，其中男138人，女66人，男女比例為2.1∶1，年齡19～82歲，平均（40.5±18.7）歲。

1.2 儀器和試劑

HBV標(biāo)志物的定量檢測儀器用Roche cobase 411；試劑為羅氏公司提供的專用試劑；PCR-HBV-DNA的檢測儀器用Roche Light Cycler 1.5；乙型肝炎病毒核酸定量檢測試劑盒由上?？迫A生物工程股份有限公司提供。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

抽取實(shí)驗(yàn)對象清晨空腹靜脈血并分離血清，用電化學(xué)發(fā)光法測定HBV標(biāo)志物，用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測HBVDNA。結(jié)果判斷：PCR-HBV-DNA檢測范圍為≥5.0×102拷貝/mL，≥5.0×102拷貝/mL為陽性，＜5.0×102拷貝/mL為陰性。HBsAg的參考值為0～0.9 COI，0.9～1.0 COI為灰區(qū)，＞1.0 COI為陽性；HBsAb參考值為0～10 U/L，HBeAg的參考值為0～1 COI，HBeAb參考值＞1.0 COI，HBcAb參考值＞1.0 COI。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（± s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 HBV標(biāo)志物檢測結(jié)果

HBsAg陽性結(jié)果5.95～10 490（4 846.7±3 196.7）；HBsAb陽性結(jié)果14.29～1 010 （271.4±349.3）；HBeAg陽性結(jié)果2.7～1 638（978.1±635.1）；HBeAb陽性結(jié)果0.003 ～ 0.798（0.123±0.251）；HBcAb陽性結(jié)果0.006～0.956（0.037±0.165）。各種血清學(xué)模式見表1。

2.2 HBV-DNA定量結(jié)果

在204例血清標(biāo)本中HBV-DNA陽性者78例，占38.2%，結(jié)果為501.4～43 450 000（6 027 900±13 840 000）。與HBV標(biāo)志物模式的比較見表1。

表2 HBV-DNA陽性患者乙肝五項(xiàng)定量結(jié)果與HBV-DNA陰性患者比較（± s）

表2 HBV-DNA陽性患者乙肝五項(xiàng)定量結(jié)果與HBV-DNA陰性患者比較（± s）

HBsAg（COI） HBsAb（IU/L） HBeAg（COI） HBeAb（COI） HBcAb（COI）HBV-DNA陽性HBV-DNA陰性P DNA定量與乙肝五項(xiàng)定量相關(guān)性4286±3274 2386±3439＞0.05 0.453 2.185±3.683 154.6±292.0＜0.05-0.463 639.2±730.8 70.13±272.4＜0.01 0.713 3.204±3.293 0.913±1.199＜0.05-0.541 0.008±0.003 0.152±0.488＞0.05-0.503

2.3 HBV-DNA陽性及陰性患者乙肝五項(xiàng)定量結(jié)果比較

HBV-DNA陽性患者HBsAb、HBeAg和HBeAb的定量結(jié)果與陰性患者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而HBsAg和HBcAb差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。DNA的定量值與HBsAg、HBeAg的定量值正相關(guān)；與HBsAb、 HBeAb 及HBcAb負(fù)相關(guān)，尤其與HBeAg和HBeAb的相關(guān)性最大。見表2。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)用電化學(xué)發(fā)光法檢測HBV標(biāo)志物，檢出21例ELISA法不常見模式（19例模式1和2例模式7），與傳統(tǒng)的ELISA法相比前者有如下優(yōu)點(diǎn)：ELISA法存在HBsAg漏檢的情況，電化學(xué)發(fā)光法檢測的靈敏度達(dá)0.01～0.04 IU/mL，大大優(yōu)于前者；Anti-HBc測定由于血清中乙肝核心抗體蛋白的干擾，可出現(xiàn)假陽性，而電化學(xué)發(fā)光法使用特制的DTT進(jìn)行標(biāo)本預(yù)處理后，能極大地減少假陽性；HBsAg與Anti-HBc的檢測都會受到干擾物質(zhì)非特異性信號的影響，電化學(xué)發(fā)光法采用靈敏的標(biāo)記物和高純度、高特異性的試劑，有效解決了非特異性信號的干擾[1]。因此電化學(xué)發(fā)光法測定HBV標(biāo)志物的靈敏性特異性均優(yōu)于ELISA，只是試劑價(jià)格昂貴，普通患者很難接受。

檢測HBV標(biāo)志物是臨床診斷乙型肝炎的依據(jù)和指標(biāo)，但主要反映人體對病毒感染的免疫狀態(tài)，不能直接反映HBV在體內(nèi)的復(fù)制情況，也不能作為判斷患者是否具有傳染性的直接證據(jù)。而PCR-HBV-DNA定量結(jié)果直接檢測病毒自身，可以更為準(zhǔn)確靈敏地反映病毒復(fù)制水平、病程變化和療效等情況，是反映是否具有傳染性的可靠指標(biāo)，從而利于臨床對乙型肝炎的診斷、治療方案的選擇和對療效的判斷[2]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，模式4的患者HBV-DNA陽性率最高，含量也最高，同時(shí)HBeAg與DNA定量結(jié)果相關(guān)性最大（r=0.713），說明HBeAg存在時(shí)，病毒復(fù)制活躍并具有傳染性，建議在治療前后進(jìn)行HBeAg定量檢測，有助于預(yù)測療效、優(yōu)化治療方案。但隨著HBeAg轉(zhuǎn)陰和HBeAb的產(chǎn)生，并不是所有感染者HBVDNA都轉(zhuǎn)陰。在本實(shí)驗(yàn)中模式1和2分別有21.1%和47.2%的HBV-DNA陽性率，研究發(fā)現(xiàn)乙肝病毒基因突變造成e抗原停止表達(dá)，但患者體內(nèi)HBV-DNA仍在復(fù)制并具有傳染性，而且變異后的病毒更不易清除，也更容易進(jìn)展到肝硬化，所以更應(yīng)該進(jìn)行HBV-DNA定量檢測，以便觀察療效[3]。

HBsAg是乙肝病毒S基因編碼的外膜蛋白，其存在只是HBV感染的指標(biāo)，而不能反映病毒復(fù)制情況及有無傳染性[4]。本實(shí)驗(yàn)HBV-DNA陽性和陰性患者的HBsAg含量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但DNA與HBsAg含量有一定相關(guān)性（r=0.453），因此HBsAg定量結(jié)果是否反映病毒載量及復(fù)制情況需進(jìn)一步研究。HBsAb產(chǎn)生并不意味病毒復(fù)制停止，在本研究模式1中有4例HBV-DNA陽性，這可能是因?yàn)镠BV-DNA前C區(qū)發(fā)生突變出現(xiàn)免疫逃逸或者是不同亞型HBV重復(fù)感染[5]。單獨(dú)HBcAb陽性者（模式5）有50% HBV-DNA陽性率，兩者存在相關(guān)性（r=-0.503），有研究者認(rèn)為高滴度HBcAb提示HBV復(fù)制，但檢出率低，低滴度只表示既往感染；另有觀點(diǎn)稱HBcAb陽性多數(shù)情況是免疫記憶，少數(shù)存在病毒復(fù)制[6-7]。

綜上所述，HBV標(biāo)志物和HBV-DNA既相關(guān)又有所不同，應(yīng)將二者結(jié)合起來并相互補(bǔ)充，更加準(zhǔn)確地了解患者HBV感染、病毒復(fù)制和傳染性情況，為臨床制定合理的治療方案、療效觀察和預(yù)后評估提供依據(jù)。

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