胡友瑩,趙金紅,汪雪峰,李朝品,王克霞,王 健

幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,Hp)相關(guān)性胃炎在病理組織學(xué)上是以大量中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)為特征[1]。趨化因子(chemokine)是反應(yīng)炎癥活動(dòng)的敏感指標(biāo),能夠與其受體共同作用趨化、激活中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、NK細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等在炎癥部位聚集、活化,參與組織損傷和修復(fù)。國(guó)內(nèi)外已有關(guān)于Hp相關(guān)性胃炎中CXC趨化因子白細(xì)胞介素-8(interlukine8,IL-8)、生長(zhǎng)相關(guān)癌性基因(Growth-regulated onco-gene-α,GRO-α)、CC趨化因子單核細(xì)胞趨化蛋白(monocyte chemoattractant protein,MCP-1)、正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌,活化時(shí)表達(dá)下降的因子(reduced upon activation,normal T expressed and secreted,RANTES)、巨噬細(xì)胞炎癥蛋白(macrophage inflammatory protein,MIP)等相關(guān)研究報(bào)道[2],而關(guān)于 Hp相關(guān)性胃炎中CXC趨化因子γ干擾素誘生蛋白10(interferon γ-inducible protein 10,IP-10)、γ干擾素誘生的單核因子(monokine inducible by γinterferon,Mig)的表達(dá)情況尚未見(jiàn)詳細(xì)報(bào)道。因此,本文研究28例胃炎患者胃黏膜組織中趨化因子IP-10、Mig的表達(dá)水平,以進(jìn)一步了解Hp導(dǎo)致胃炎的可能機(jī)制,現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料和方法

1.1 研究對(duì)象 28例胃炎病人為2009年1月至2010年6月安徽理工大學(xué)附屬東方集團(tuán)總醫(yī)院收治的患者,男10例,女18例,年齡18～60歲,其中Hp陽(yáng)性胃炎患者16例,Hp陰性胃炎患者12例。另選正常胃粘膜6例為對(duì)照組。取5年內(nèi)無(wú)抽煙、飲酒史者,近2個(gè)月未服用非甾體抗炎藥、抗生素、質(zhì)子泵抑制劑、胃粘膜保護(hù)劑者。

1.2 標(biāo)本采集 研究對(duì)象進(jìn)行電子胃鏡檢查,用規(guī)格相同的活檢鉗在距幽門口5cm內(nèi)不同位置(胃大彎、胃小彎、前后壁)鉗取胃粘膜標(biāo)本,分別用于Hp檢查、趨化因子檢測(cè)及病理學(xué)檢查。

1.3 H p感染判斷及炎癥活動(dòng)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn) Hp感染由快速尿素酶法及石炭酸染色確定,兩者均陽(yáng)性為H p感染陽(yáng)性,兩者均陰性為陰性,兩種結(jié)果不一致者排除在本研究以外。再結(jié)合HE染色結(jié)果,將患者分為正常胃黏膜組、Hp陰性胃炎組、Hp陽(yáng)性胃炎組。

活動(dòng)性炎癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)為粘膜間質(zhì)、上皮內(nèi)及腺腔中可見(jiàn)中性粒細(xì)胞(不包括血管內(nèi)者)浸潤(rùn),炎癥活動(dòng)程度分級(jí)標(biāo)準(zhǔn):一個(gè)高倍鏡視野無(wú)中性粒細(xì)胞為正常,一個(gè)高倍鏡視野中性粒細(xì)胞＜20個(gè)為輕度,一個(gè)高倍鏡視野中性粒細(xì)胞20～50個(gè)為中度,一個(gè)高倍鏡視野中性粒細(xì)胞＞50個(gè)為重度[3]。

1.4 胃炎患者胃黏膜組織IP-10、Mig的檢測(cè) 胃粘膜組織鉗取后,迅速放入裝有1.0mL含胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基的24孔培養(yǎng)板中,于37℃、5%CO2、飽和濕度的培養(yǎng)箱中孵育24h后,4℃研磨勻漿,將勻漿液轉(zhuǎn)移至Eppendorf管中,15 000r/min,4℃離心30min,取上清液-70℃冰箱保存,分別用ELISA方法測(cè)定 IP-10、Mig的表達(dá)(IP-10、Mig ELISA檢測(cè)試劑盒購(gòu)自美國(guó)Sigma公司)。

2 結(jié) 果

2.1 胃炎患者胃粘膜內(nèi)IP-10、Mig的表達(dá) 胃炎患者胃粘膜組織中IP-10、Mig的含量升高,與正常對(duì)照組相比,差異均具顯著性(分別P＜0.05、P＜0.01),且Hp陽(yáng)性胃炎組中,IP-10、Mig的表達(dá)均顯著高于 Hp陰性胃炎組,差異均具顯著性(P＜0.01),具體結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 胃炎患者胃粘膜組織IP-10、Mig的表達(dá)Tab.1 Expression of IP-10 and Mig in the gastric mucosa in patients with gastritis

2.2 Hp陽(yáng)性組中IP-10、Mig的表達(dá)與粘膜炎癥活動(dòng)程度的關(guān)系 在 Hp陽(yáng)性胃炎組中,根據(jù)其粘膜炎癥活動(dòng)程度劃分結(jié)果為正常組2例、輕度組4例、中度組 4例和重度組 6例。胃粘膜內(nèi)IP-10、Mig在正常組、輕度組、中度組和重度組的表達(dá)水平分別為(32.0±13.8)、(160.9±30.5)、(220.1±58.2)、(307.9±60.5)ng·L-1和(27.3±18.4)、(138.2±28.8)、(201.8±42.5)、(274.9±58.4)ng·L-1,且其表達(dá)水平與炎癥活動(dòng)程度均呈顯著正相關(guān)(r=0.9811,P＜0.001和 r=0.9938,P＜0.001)(圖1,2)。

3 討 論

趨化因子是能使細(xì)胞發(fā)生趨化作用的細(xì)胞因子總稱[4],分為CXC、CC、C、CX3C 四個(gè)亞家族(C 代表半胱氨酸,X代表任意氨基酸),以CXC和CC亞家族最為重要。不同趨化因子亞家族趨化不同的淋巴細(xì)胞,CC趨化因子主要趨化單核細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞和T細(xì)胞。CXC趨化因子按其分子N-端前是否存在谷氨酸-亮氨酸-精氨酸(Glu-Leu-Arg)即ELR結(jié)構(gòu),進(jìn)一步分為ELR+CXC和ELR-CXC兩亞族,ELR+CXC主要趨化中性粒細(xì)胞,而ELR-CXC趨化因子尤其是 IP-10、Mig均可由IFN-γ誘導(dǎo)單核/巨噬細(xì)胞、肝細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞等分泌,通過(guò)其共同受體CXCR3對(duì)表達(dá)該受體的活化T細(xì)胞、NK細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等趨化和激活,發(fā)揮抗感染、抑病毒等多種生物學(xué)功能[5-6]。

圖1 Hp陽(yáng)性胃炎組中IP-10與胃粘膜炎癥活動(dòng)程度的相關(guān)性(r=0.9811,P＜0.001)Fig.1 Correlation between the level of IP-10 and the degree of gastric mucosa inflammation in patients with gastritis induced by Helicobacter pylori(extreme correlation r=0.9811,P＜0.001)

圖2 Hp陽(yáng)性胃炎組中Mig與胃粘膜炎癥活動(dòng)程度的相關(guān)性(r=0.9938,P＜0.001)Fig.2 Correlation between the level of Mig and the degree of gastric mucosa inflammation in patients with gastritis induced by Helicobacter pylori(extreme correlation r=0.9938,P＜0.001)

Hp感染與胃炎關(guān)系密切,在胃炎中T細(xì)胞、DC細(xì)胞等炎性細(xì)胞的選擇性聚集是由選擇蛋白、免疫球蛋白、趨化因子等誘導(dǎo)的。趨化因子又是反應(yīng)炎癥活動(dòng)的敏感指標(biāo)。林敏娟等[7]證實(shí)IL-8在Hp相關(guān)性胃炎患者中顯著增高,且其IL-8的升高程度與胃粘膜炎癥活動(dòng)程度呈正相關(guān)。田黎黎等[8]也證實(shí),CCL28和IL-10在Hp胃炎患者中顯著增高。溫國(guó)明等[9]證明趨化因子受體 CXCR4和CCR7在胃癌組織中高表達(dá),其表達(dá)水平與胃癌的病理分化程度、臨床分期等相關(guān)。張影等[10]研究證實(shí)RANTES是一種T細(xì)胞特異的趨化因子,其在胃粘膜組織中產(chǎn)生增加可能是T細(xì)胞浸潤(rùn)的主要原因。在 H p活菌的刺激下,可以誘導(dǎo)RANTES在MKN45細(xì)胞內(nèi)表達(dá)。滅活菌和液體培養(yǎng)上清液則不能誘導(dǎo)RANTES在MKN45細(xì)胞內(nèi)表達(dá),說(shuō)明上調(diào)RANTES mRNA的表達(dá)主要依賴于Hp的活性。Koh Tomimori等[11]證明 Hp 通過(guò) NF-κ B途徑能夠誘導(dǎo)CC趨化因子CCL20的表達(dá)。

本研究發(fā)現(xiàn)胃炎患者胃粘膜組織中IP-10、Mig顯著升高,且H p陽(yáng)性胃粘膜組IP-10、Mig升高更為顯著,并且在H p陽(yáng)性胃炎患者胃粘膜組織中IP-10、Mig的表達(dá)與胃粘膜炎癥活動(dòng)程度呈正相關(guān)。此與Eck M 等[12]等報(bào)道一致,而與Kraft M 等[13]、Lindholm C等[14]報(bào)道不一致。Eck M等[12]通過(guò)原位雜交和免疫組化技術(shù)證實(shí),Hp陽(yáng)性胃炎患者胃黏膜組織中IP-10的表達(dá)與T細(xì)胞分布一致,認(rèn)為IP-10是被 T細(xì)胞選擇性聚集的,而Mig的表達(dá)與單核細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的分布一致。Kraft M等[13]通過(guò)ELISA法及RT-PCR法體外培養(yǎng)胃黏膜上皮細(xì)胞,證實(shí)在 IFN-γ及 TNF-α共同刺激下,胃黏膜上皮細(xì)胞分泌IP-10、Mig、I-TAC增多,而在 H p活菌刺激下,胃黏膜上皮細(xì)胞分泌IL-8增多,但并未上調(diào)IP-10、Mig的表達(dá)。Lindholm C等[14]體外培養(yǎng)人胃體組織發(fā)現(xiàn) Hp感染早期,GRO-α、IL-8、IL-6分泌增多,影響胃炎發(fā)展,而IP-10并無(wú)分泌增多。IP-10、Mig的共同受體是CXCR3,CXCR3主要表達(dá)于 Th1細(xì)胞,Th1可以產(chǎn)生大量的IFN-γ,IFN-γ又可誘導(dǎo)胃黏膜內(nèi)皮細(xì)胞、活化T細(xì)胞等分泌IP-10、Mig增多。因此,本研究結(jié)果提示,Hp相關(guān)性胃炎患者胃黏膜組織中高表達(dá)的IP-10、Mig參與了T細(xì)胞、單核細(xì)胞的選擇性聚集,在感染局部發(fā)揮活化Th細(xì)胞及其它免疫細(xì)胞作用,同時(shí)這些活化細(xì)胞又分泌更多趨化因子,進(jìn)一步介導(dǎo)淋巴細(xì)胞在胃炎病變粘膜內(nèi)聚集,參與 Hp所致的胃炎反應(yīng)。

綜上所述,H p相關(guān)性胃炎患者胃粘膜上皮細(xì)胞內(nèi)IP-10、Mig的表達(dá)顯著增高,其增高程度與胃粘膜炎癥活動(dòng)程度呈正相關(guān),趨化因子參與了 Hp相關(guān)性胃炎炎性細(xì)胞浸潤(rùn),而對(duì)于 Hp是否能夠直接誘導(dǎo)趨化因子IP-10、Mig的表達(dá),尚需體外細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)。

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