黃衛(wèi)平，龐繼光

（四川省涼山州畜牧獸醫(yī)科學(xué)研究所，四川 西昌 615042）

1 材料與方法

1.1 試驗豬及選用的疫苗

1.1.1 疫苗 豬瘟脾淋苗（中牧成都藥械廠生產(chǎn)，批號0905079-2），豬口蹄疫O型滅活疫苗（中農(nóng)威特公司生產(chǎn)，批號 0803079J）。

1.1.2 母豬分組及其免疫程序 將涼山州祖代種豬場2010年1～6月間配種的96頭后備母豬平均分成12組，執(zhí)行如下免疫程序（表1）。

表1 母豬豬瘟、口蹄疫免疫程序

1.2 樣品采集

1.2.1 母豬血清采集 試驗?zāi)肛i分娩當(dāng)日從乳靜脈采血，并分離血清。

1.2.2 母豬乳樣采集 用縮宮素注射法采集分娩當(dāng)日的奶樣。乳清中的抗體稱為母源抗體。所有樣品在-20℃保存。

1.3 分析方法

1.3.1 血清與乳中豬瘟、口蹄疫抗體的檢驗方法 采用ELISA法，按照武漢科前動物生物制品有限公司的試劑盒操作說明完成。用酶標(biāo)儀讀取OD值，豬瘟OD值≥0.35為陽性，＜0.35為陰性；豬口蹄疫OD值≥0.4為陽性，＜0.4為陰性。

1.3.2 數(shù)據(jù)分析 采用Excel軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計，用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，差異性檢驗采用t檢驗法。

2 結(jié)果與分析

在12組試驗?zāi)肛i中，有6頭母豬沒有配懷，不參與試驗，有3頭母豬產(chǎn)弱仔和死胎。其余87頭母豬在分娩當(dāng)天的血清與乳中均檢測到豬瘟、口蹄疫抗體。

2.1 免疫時間對母源抗體的影響 將空懷期進(jìn)行豬瘟免疫的所有試驗組母豬分娩當(dāng)天的抗體水平與妊娠期免疫組作比較（表2），發(fā)現(xiàn)妊娠期和空懷期免疫的母豬豬瘟抗體保護(hù)率都為100%，達(dá)到了國家標(biāo)準(zhǔn)，但妊娠期免疫的所有試驗組母豬的抗體離散度明顯大于空懷期免疫組，而且在妊娠期進(jìn)行免疫的母豬中有3窩發(fā)生異娩，產(chǎn)死胎和產(chǎn)弱仔現(xiàn)象。

表2 不同免疫時間母豬豬瘟抗體的比較

將空懷期進(jìn)行口蹄疫免疫的所有試驗組母豬分娩當(dāng)天的抗體水平與妊娠期免疫組作比較（表3），發(fā)現(xiàn)妊娠期和空懷期免疫的母豬豬瘟抗體保護(hù)率都達(dá)到了國家標(biāo)準(zhǔn)，兩者之間抗體離散度差異不顯著。在妊娠期進(jìn)行口蹄疫免疫的母豬沒有發(fā)生異娩現(xiàn)象，但空懷期免疫組有3頭母豬異娩，判斷為豬瘟免疫干擾引起的。說明在妊娠期免疫口蹄疫不會干擾母豬的正常妊娠。

表3 不同免疫時間母豬口蹄疫抗體的比較

2.2 免疫次數(shù)對母源抗體的影響 將只進(jìn)行1次豬瘟、口蹄疫免疫的所有試驗組母豬分娩當(dāng)天的抗體水平與進(jìn)行2次免疫的所有試驗組進(jìn)行比較（表4），發(fā)現(xiàn)進(jìn)行1次或2次免疫的母豬豬瘟抗體保護(hù)率都達(dá)到了國家標(biāo)準(zhǔn)以上，但兩種免疫方式間的抗體離散度經(jīng)t檢驗差異顯著。其中豬瘟的抗體整齊度隨著免疫次數(shù)的增加呈上升趨勢，而口蹄疫的抗體整齊度隨著免疫次數(shù)的增加呈下降趨勢。

表4 不同免疫次數(shù)母豬豬瘟、口蹄疫抗體的比較

2.3 免疫劑量對母源抗體的影響 將只進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)頭份豬瘟（2頭份）、口蹄疫疫苗（2mL）免疫的所有試驗組母豬分娩當(dāng)天的抗體水平與采用1.5倍、2倍劑量疫苗免疫的所有試驗組進(jìn)行比較（表4），發(fā)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)劑量免疫和加倍免疫的母豬，其豬瘟、口蹄疫抗體保護(hù)率都達(dá)到了國家標(biāo)準(zhǔn)，但加倍劑量組與標(biāo)準(zhǔn)劑量組間的抗體離散度經(jīng)t檢驗差異極顯著。其中，口蹄疫的離散度隨著免疫劑量的增加呈下降趨勢，2倍劑量免疫的整齊度最好；而豬瘟抗體整齊度以標(biāo)準(zhǔn)劑量免疫組的最好。

表5 不同免疫劑量母豬豬瘟、口蹄疫抗體的比較

2.4 母豬血清抗體與乳中抗體的相關(guān)分析

2.4.1 相關(guān)系數(shù)的計算 分娩當(dāng)天所采集的87頭母豬的血清與乳清中都檢測到了豬瘟、口蹄疫抗體，使用相關(guān)

表6 血清與乳中豬瘟、口蹄疫抗體相關(guān)系數(shù)計算表

2.4.2 母源抗體的特異性轉(zhuǎn)運 值得注意的是，我們選取口蹄疫試驗組母豬中血清抗體水平最高和最低的母豬各5頭（1～10號），將其乳清與血清中豬瘟抗體含量的比值列表如下（見表7），發(fā)現(xiàn)1～5號血清抗體較低的母豬，其乳清抗體與血清抗體的比值明顯高于6～10號母豬，說明乳腺組織對口蹄疫抗體有特異性轉(zhuǎn)運。注意避開圍產(chǎn)期。

本試驗采用1倍、1.5倍、2倍劑量口蹄疫疫苗免疫母豬，除1倍劑量組外抗體水平都能達(dá)到保護(hù)標(biāo)準(zhǔn)。各組間的抗體水平隨著免疫劑量的增加而增大，但離散度差異較顯著，其中2倍劑量（標(biāo)準(zhǔn)劑量）免疫的母豬抗體離散度最整齊。經(jīng)對免疫過程調(diào)查分析后認(rèn)為，口蹄疫疫苗接種量高于說明書劑量的原因可能是由于油乳劑類的疫苗在注射過程中藥瓶抽取不全，器械有部分吸附造成的。本試驗中采用1次、2次口蹄疫疫苗免疫的母豬，1次免疫的母豬抗體水平只有95.7%，抗體水平隨著免疫劑量的增加而增大，各組間離散度差異顯著，但2次免疫組的抗體離散度也僅有17.91。從規(guī)模化豬場生產(chǎn)管理角度和成本核算考慮，采用1.5倍劑量對母豬進(jìn)行2次口蹄疫疫苗免疫比較科學(xué)、經(jīng)濟(jì)。

3.3 母豬血清抗體與母源抗體呈強(qiáng)相關(guān)，并且乳腺對豬瘟、口蹄疫抗體存在特異性轉(zhuǎn)運 豬乳的生成過程是在乳腺泡和細(xì)小導(dǎo)管的分泌上皮細(xì)胞中進(jìn)行的，包括復(fù)雜的選擇性吸收、轉(zhuǎn)運和新物質(zhì)的合成過程，當(dāng)乳腺生成乳時，需要大量的血液流經(jīng)乳腺才能供應(yīng)足夠的原料，而乳房中每通過400～500 L的血液，在乳腺中才能形成1L乳汁。因此初乳中高含量的免疫球蛋白（抗體）絕大部分來自母豬血液，且構(gòu)成比例與母豬血清極為相似。本試驗?zāi)肛i在分娩當(dāng)天的乳中和血清中都檢測到了高含量的豬瘟、口蹄疫抗體，其相關(guān)系數(shù)分別為0.9863和0.6709，而且血清抗體水平較低的母豬，其乳抗與血抗的比值大于血清抗體水平較高的豬。說明豬乳腺組織對豬瘟、口蹄疫抗體可能有特異性轉(zhuǎn)運，這與李明義等的研究報道一致。

由于母源抗體對新生仔豬的特殊意義，因此合理進(jìn)行母豬免疫是豬場的必須工作，根據(jù)試驗結(jié)果，筆者制定了涼山州規(guī)?；i場的母豬免疫程序，如表8所示。

表7 母源抗體的特異性轉(zhuǎn)運

3 結(jié)論

3.1 母豬豬瘟免疫應(yīng)在空懷期進(jìn)行，使用2頭份劑量免疫1次 本試驗中，母豬不管是在妊娠期還是空懷期進(jìn)行豬瘟疫苗免疫，分娩時抗體水平都可以達(dá)到保護(hù)標(biāo)準(zhǔn)，但妊娠期免疫的母豬分娩率大大低于空懷期。說明豬瘟病毒有可能透過胎盤感染仔豬，從而造成母豬流產(chǎn)和異娩，這與謝文強(qiáng)試驗研究的結(jié)果一致，因此對母豬豬瘟的免疫應(yīng)安排在空懷期進(jìn)行。

本試驗分別采用1倍、1.5倍、2倍劑量豬瘟疫苗免疫母豬，其抗體水平都能達(dá)到保護(hù)標(biāo)準(zhǔn)，各組間的抗體水平隨著免疫劑量的增加而增大，但離散度差異顯著，其中1倍劑量（標(biāo)準(zhǔn)劑量）免疫的母豬抗體離散度最整齊。采用1次和2次豬瘟疫苗免疫的母豬，其抗體水平都能達(dá)到保護(hù)標(biāo)準(zhǔn)，各組間的抗體水平隨著免疫次數(shù)的增加而增大，但離散度略有差異。從規(guī)模化豬場生產(chǎn)管理角度和成本核算考慮，采用1倍劑量對母豬進(jìn)行1次豬瘟疫苗免疫比較科學(xué)、經(jīng)濟(jì)。

3.2 母豬口蹄疫免疫不受孕期限制，按生產(chǎn)需求，使用3mL劑量免疫2次 本試驗中，口蹄疫免疫的母豬分組與豬瘟免疫相反，在妊娠期免疫的母豬沒有發(fā)生流產(chǎn)與異娩現(xiàn)象，說明口蹄疫免疫不受母豬妊娠的影響，滅活疫苗透過胎盤感染仔豬的可能性極小。徐泉興等認(rèn)為，豬口蹄疫抗體在豬體內(nèi)的消退時間只有4個月，因此在妊娠期進(jìn)行豬口蹄疫的免疫很有必要，考慮到圍產(chǎn)期母豬對外界的應(yīng)激反應(yīng)較大，免疫時要

表8 涼山規(guī)?；i場母豬豬瘟、口蹄疫的免疫程序

[1]謝文強(qiáng).豬瘟胎盤感染仔豬的預(yù)防[J].中國畜牧獸醫(yī)文摘，2011，（3）.

[2]徐泉興.豬“O”型口蹄疫基因工程苗免疫豬的免疫效力、安全性及抗體消長 [J].中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報，2000，22：9.

[3]李明義，白志娟，王莉娟，等.豬瘟滅活苗抗體消長規(guī)律動態(tài)研究[J].中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報，2005，27（5）：385-388.