薛士榮，李玉仿，孫燕燕

(1.天津市大港區(qū)藥品檢驗(yàn)所，天津 300270； 2.天津市兒童醫(yī)院，天津 300070)

小兒清降丸是天津市兒童醫(yī)院傳統(tǒng)成方制劑，是由生地黃、青黛、金銀花、薄荷、赤芍等14味中藥組成的傳統(tǒng)蜜丸，具有清熱解毒、養(yǎng)陰利咽的功效，用于急性咽炎，喉炎，急性扁桃體炎，內(nèi)熱外感發(fā)燒，伴有大便秘結(jié)者。綠原酸和芍藥苷分別為該制劑中主要藥物金銀花和赤芍的有效成分，本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法測(cè)定綠原酸和芍藥苷的含量，為該制劑的質(zhì)量控制提供了可行的方法。

1 儀器和試藥

島津高效液相色譜儀 LC-2010C，島津高效液相色譜儀工作站LC-Solution(日本島津公司)。對(duì)照品均來自中國藥品生物制品檢定所，綠原酸批號(hào)為110753-200413，芍藥苷批號(hào)為110736-200934(含量95.7%)。甲醇、磷酸均為色譜純，水為純化水。小兒清降丸(天津市兒童醫(yī)院，批號(hào)為20101102、20110301、20110302)。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件 色譜柱：Diamond C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)；柱溫：35 ℃；流動(dòng)相：乙腈-0.4%磷酸液(15∶85)；流速：1.0 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：綠原酸327 nm，芍藥苷230 nm；進(jìn)樣量：綠原酸10 μl,芍藥苷20 μl。

2.2綠原酸含量測(cè)定

2.2.1溶液制備

2.2.1.1對(duì)照品溶液的制備 取綠原酸對(duì)照品置五氧化二磷減壓干燥器中干燥12 h后，精密稱取4.95 mg置250 ml量瓶中，加50%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成每1 ml含0.019 8 mg/ml綠原酸對(duì)照品溶液。

2.2.1.2供試品溶液的制備 取“重量差異”項(xiàng)下的本品，剪碎，混勻，取約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50 ml，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率40 kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得。

2.2.1.3陰性對(duì)照溶液的制備 按處方比例及制法，制備不含金銀花的陰性樣品，取相當(dāng)于供試品的量，按照供試品溶液制備項(xiàng)下的方法制備陰性樣品溶液。分別吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液，按上述色譜條件測(cè)定，結(jié)果陰性樣品溶液在綠原酸峰的位置上沒有干擾，見圖1。

2.2.2線性關(guān)系考查 分別精密吸取含有0.019 8 mg/ ml綠原酸對(duì)照品溶液2、5、10、15、20、25和30 μl，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件，注入高效液相色譜儀，記錄峰面積。以進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，求得綠原酸回歸方程為：Y=3 286 358.7X-317.9(r=0.999 9)。結(jié)果表明：綠原酸在0.039 6～0.594 0 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

1.綠原酸

2.2.3精密度試驗(yàn) 取“2.2.1.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分析，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)得峰面積值的RSD為0.05%。

2.2.4重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品(批號(hào)20101102)6份，按“2.2.1.2”項(xiàng)下配制，采用“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定綠原酸的含量，結(jié)果測(cè)得綠原酸的平均含量為1.647 7 mg/g ,RSD為0.96%。

2.2.5穩(wěn)定性試驗(yàn) 取樣品(批號(hào)20101102)，按“2.2.1.2”項(xiàng)下配制，每隔4 h進(jìn)樣1次，共5次，結(jié)果樣品在16 h內(nèi)無明顯變化，RSD中0.10%。

2.2.6回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量同一批樣品(批號(hào)20101102)約0.25 g，共6份，分別精密加入含有0.007 92 mg/ml綠原酸對(duì)照品溶液50 ml，按“2.2.1.2”項(xiàng)下配制，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定綠原酸的含量，綠原酸的平均回收率為99.50% ，RSD為0.68%。結(jié)果見表1。

2.2.7樣品測(cè)定 取小兒清降丸3批，按“2.2.1.2”項(xiàng)下供試品溶液制備方法制成供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定綠原酸的含量，測(cè)定結(jié)果見表2。

2.3芍藥苷含量測(cè)定

2.3.1溶液制備

表1 綠原酸加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

表2 綠原酸含量測(cè)定結(jié)果

2.3.1.1對(duì)照品溶液的制備 精密稱取芍藥苷對(duì)照品4.30 mg，置50 ml量瓶中，加稀乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成每1 ml含0.082 3 mg芍藥苷對(duì)照品溶液。

2.3.1.2供試品溶液的制備 取“重量差異”項(xiàng)下的本品，剪碎，混勻，取約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇25 ml，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率40 kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得。

2.3.1．3陰性對(duì)照溶液的制備 按處方比例及制法，制備不含赤芍與丹皮酚的陰性樣品，取相當(dāng)于供試品的量，按照供試品溶液制備項(xiàng)下的方法制備陰性樣品溶液。

分別吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液，按上述色譜條件測(cè)定，結(jié)果陰性樣品溶液在芍藥苷峰的位置上沒有干擾，見圖2。

2.3.2線性關(guān)系考查 分別精密吸取含有0.082 3 mg/ml芍藥苷對(duì)照品溶液2、5、10、15、20和30 μl，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件，注入高效液相色譜儀，記錄峰面積。以進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，求得芍藥苷回歸方程為：Y=659 305.6X-4 815.5(r=0.999 9)。結(jié)果表明：芍藥苷在0.164 6～2.469 0 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3.3精密度試驗(yàn) 取“2.3.1.1”項(xiàng)下的溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分析，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)得峰面積RSD為1.09%。

2.3.4重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品(批號(hào)20101102)6份，按“2.3.1.2”項(xiàng)下方法配制，采用“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定芍藥苷的含量，結(jié)果測(cè)得芍藥苷的平均含量為1.906 8 mg/g，RSD為1.13%。

1. 芍藥苷

2.3.5穩(wěn)定性試驗(yàn) 取樣品(批號(hào)20101102)，按“2.3.1.2”項(xiàng)下配制，每隔4 h進(jìn)樣一次，共5次，結(jié)果樣品在16 h內(nèi)無明顯變化，結(jié)果RSD為1.11%。

2.3.6回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量同一批樣品(批號(hào)20101102)約0.5 g，共6份，分別精密加入含有0.041 34 mg/ml芍藥苷對(duì)照品溶液25 ml，按“2.3.1.2”項(xiàng)下配制，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定芍藥苷的含量，芍藥苷的平均回收率為99.32%，RSD為0.72%。結(jié)果見表3。

表3 芍藥苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

2.3.7樣品測(cè)定 取小兒清降丸3批，按“2.3.1.2”項(xiàng)下供試品溶液制備方法制成供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定芍藥苷的含量，測(cè)定結(jié)果見表4。

表4 芍藥苷含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 綠原酸、芍藥苷經(jīng)紫外掃描可知，綠原酸最大吸收波長(zhǎng)為327 nm，芍藥苷的最大吸收波長(zhǎng)為230 nm,故選擇以最大吸收波長(zhǎng)作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.2樣品提取方法的選擇[1]用50%甲醇同時(shí)提取樣品中綠原酸、芍藥苷，選擇雙波長(zhǎng)同時(shí)測(cè)定，綠原酸峰形、峰面積都很好，但芍藥苷峰面積太小，結(jié)果易出現(xiàn)偏差，故選擇分別提取。提取芍藥苷時(shí)分別用純甲醇和稀乙醇兩種溶劑，相同取樣量、超聲提取時(shí)間，稀乙醇溶解比純甲醇溶解完全，故提取芍藥苷選擇稀乙醇。

本品為中藥復(fù)方制劑，成分極為復(fù)雜，采用HPLC法來分別測(cè)定制劑中綠原酸和芍藥苷的含量。結(jié)果表明，方法簡(jiǎn)單、靈敏度高、重現(xiàn)性好，所測(cè)的結(jié)果準(zhǔn)確，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

1 中國藥典.一部.2010:96,147,205