陜西省漢中市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 (漢中 723000)李全德 姚超峰 樊高娟

*陜西省核工業(yè) 215醫(yī)院

用酶聯(lián)法檢測(cè)乙型肝炎病毒(HBV)尤其是乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物(HBV-M),不能直接反映乙型肝炎患者血清病毒含量。近年來(lái)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)的建立,為臨床解決了這一問(wèn)題。我們對(duì) 200份乙型肝炎患者血清,分別進(jìn)行 HBVDAN定量測(cè)定,以探討 HBV-DNA定量與乙型肝炎 HBV-M的相關(guān)性,現(xiàn)報(bào)道如下。

對(duì)象與方法

1 對(duì) 象 200份血清選自我院門診及住院的乙型肝炎患者,男 120例,女 80例,年齡 10～ 65歲 ,診斷符合 2000年全國(guó)傳染病寄生蟲(chóng)學(xué)術(shù)會(huì)議制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)[1]。

2 方 法 乙型肝炎血清學(xué)標(biāo)志物檢測(cè):采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法。HBV-DN A定量檢測(cè):在 PCR反應(yīng)管中加入 PCR反應(yīng)成分后,置于達(dá)安 7600基因?qū)崟r(shí)自動(dòng)熒光 PCR測(cè)定儀擴(kuò)增,熒光標(biāo)記探針雜交,計(jì)算機(jī)根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)建立的直線回歸方程計(jì)算出待檢血清的含量,以每毫升基因拷貝數(shù)(copies/m1)報(bào)告,定量范圍為 103～ 108(copies/m1)。 HBV-DNA陰性指數(shù)小于最低檢測(cè)線 103copies/ml,HBV-DNA陽(yáng)性大于等于 103copies/ml。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用t檢驗(yàn)和直線相關(guān)回歸分析。

結(jié) 果

200份血清 HBV-DN A定量及 HBV-M結(jié)果見(jiàn)附表。HBVM測(cè)定結(jié)果分為 6種模式:1、3、5項(xiàng)(俗稱大三陽(yáng)),HBsAg陽(yáng)性+ HBeAg陽(yáng)性+抗 HBc陽(yáng)性。 1、4、5項(xiàng) (俗稱小三陽(yáng)),HBsAg陽(yáng)性+HBeAb陽(yáng)性+ 抗 HBc陽(yáng)性。l、5項(xiàng),HBsAg陽(yáng)性+抗 HBc陽(yáng)性。第 1項(xiàng) HBsAg陽(yáng)性。第 5項(xiàng)抗 HBc陽(yáng)性。 2、4、5項(xiàng),HBsAb陽(yáng)性+HBeAb陽(yáng)性+抗 HBc陽(yáng)性。經(jīng) t檢驗(yàn),1、3、5項(xiàng)陽(yáng)性率及 HBV-DN A含量拷貝數(shù)明顯高于 1、4、5項(xiàng),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。 1、4、5項(xiàng)與其他各型之間差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

附表 HBV-M各種模式和HBV-DNA含量比較(copies/m1)

討 論

HBV感染后有兩種發(fā)展:病毒清除后的免疫狀態(tài)和病毒持續(xù)感染狀態(tài)。病毒持續(xù)感染的自然史,常開(kāi)始于 HBeAg(+)期,細(xì)胞毒性 T細(xì)胞(CTL)清除病毒的細(xì)胞毒活性很低;HBeAg血清轉(zhuǎn)換期 CTL活性增高,清除 HBV,也使病變加重;而后處于低病毒血癥期,病變靜息,可出現(xiàn)前 C/C基因變異,常僅能以 PCR檢出;如變異毒株活躍復(fù)制,HBeAg(-)的病毒血癥期,可多次病變活動(dòng),在感染持續(xù)中病變累積加重[2]。

大三陽(yáng)與其他模式含量和百分率比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)說(shuō)明 HBV-DN A含量與 HBeAg的存在有明顯的關(guān)系,提示病毒在體內(nèi)復(fù)制活躍,傳染性較強(qiáng)[3,4]。進(jìn)一證明了HBeAg存在是 HBV活躍復(fù)制的標(biāo)志。小三陽(yáng)與其它各組比較差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。表明雖然血清 HBeAg陰性或HBeAg/抗 HBe血清轉(zhuǎn)換,但病毒并未停止復(fù)制,只是復(fù)制緩解或部分患者出現(xiàn)病毒基因變異[5]。最常見(jiàn)的是前 C區(qū)變異,使 HBeAg缺失,以逃避宿主免疫攻擊和藥物的作用。這類感染更容易在患者體內(nèi)長(zhǎng)期潛伏,大量復(fù)制,對(duì)患者肝組織造成慢性損害,嚴(yán)重者發(fā)生肝硬化、肝癌。因此臨床不能僅以酶免的檢測(cè)血清 HBeAg陰性就確定 HBV在體內(nèi)有無(wú)復(fù)制,而要結(jié)合敏感、準(zhǔn)確的 PCR檢測(cè) HBV-DN A含量結(jié)果,才能確切判斷HBV在體內(nèi)的存在情況。HBsAg陽(yáng)性模式可能是病毒感染早期,還未在宿主體內(nèi)大量復(fù)制,使血清中 HBV-DN A含量末明顯升高?？?HBc陽(yáng)性模式和 HBsAb陽(yáng)性+ HBeAb陽(yáng)性+抗HBc陽(yáng)性模式在本組可能由于標(biāo)本量小暫無(wú)檢出 HBV-DN A復(fù)制,表明這兩種模式通常提示既往感染而非現(xiàn)在感染,與文獻(xiàn)[6]報(bào)道一致。 HBV基因型是影響 HBV復(fù)制和感染的的主要因素之一。所以定量檢測(cè)外周血的 HBV-DN A可以直接反映HBV在血液中的復(fù)制情況,從而能夠較為準(zhǔn)確地解釋感染后的傳染性,若同時(shí)檢測(cè)肝功能各項(xiàng)指標(biāo)可以直接了解肝功能的受損程度,為臨床治療提供重要依據(jù)。

[1]中華醫(yī)學(xué)會(huì)傳染病學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì).病毒性感染研究方案(試行)[J].中華傳染病雜志,2000,8(6):324-329.

[2]姜湘寧,王功遂,明 朗.HBeAg陰性慢性乙型肝炎患者血清 HBV-DN A定量檢測(cè)的意義[J].華中醫(yī)學(xué)雜志 2004,28(6):741-745.

[3]王添章,張宜俊,劉樹(shù)人,等.慢性感染患者血清 HBVDN A與 HBeAg量的關(guān)系及臨床意義 [J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2004,19:71-75.

[4]張 玲,朱江華,馬 韻,等.乙型肝炎病毒核酸定量檢測(cè)與臨床的關(guān)系 [J].中華肝臟病雜志,2002,10:49-51.

[5]劉傳苗,張欣欣,陸志蒙,等.乙型肝炎病毒聯(lián)合前變以及臨床意義 [J].中華傳染病雜志,2002,20:274-277.

[6]梅小平 ,李 健,曾 躍,等.乙型肝炎病毒 HBV-DNA與臨床分析 [J].中華肝臟病雜志,2004,5(12):313.