李正杰，李曉燕，許紅輝，趙韶華，韓桂茹，張彥芬

(1.河北以嶺醫(yī)藥研究院，河北 石家莊 050035;2.河北省藥品檢驗所，河北 石家莊 050011)

養(yǎng)胃舒片由黨參、陳皮、黃精(蒸)、山藥、干姜等藥味組方。為有效控制產(chǎn)品質(zhì)量，對方中黨參、陳皮、山藥、白術(shù)、干姜和烏梅進(jìn)行了薄層色譜鑒別，筆者采用高效液相色譜法法對陳皮中橙皮苷進(jìn)行定量研究，建立了養(yǎng)胃舒片的質(zhì)量控制方法?，F(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

美國安捷倫高效液相色譜儀;紫外檢測器;梅特勒－托利多電子天平。養(yǎng)胃舒片(石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司，批號為080801);橙皮苷對照品(批號為110721－200211)，黨參對照藥材(批號為 121057－200504)，烏梅對照藥材(批號為 121208－0101)，陳皮對照藥材(批號為120969－200507)，白術(shù)對照藥材(批號為120925－200407)，山藥對照藥材(批號為121137－200402)，干姜對照藥材(批號為120942－200505)，均購自中國藥品生物制品檢定所;甲醇(色譜純)，水為雙重蒸餾水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別

陳皮與烏梅:取養(yǎng)胃舒片，研細(xì)，稱取3 g，加甲醇20 mL，超聲處理10 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2 mL使溶解，作為供試品溶液。另取陳皮對照藥材1 g、烏梅對照藥材2 g，同法制成對照藥材溶液。吸取烏梅對照藥材溶液5 μL、陳皮對照藥材溶液和供試品溶液各10 μL，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以正己烷－醋酸乙酯－乙醇－濃氨溶液(7:4:1:0.5)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品溶液色譜中，在與烏梅對照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上至少顯1個相同顏色的熒光斑點，在與陳皮對照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上至少顯3個相同顏色的熒光主斑點(圖1)。

圖1 烏梅、陳皮薄層色譜圖

白術(shù)與黨參:取白術(shù)對照藥材0.5 g，加甲醇5 mL，超聲處理6 min，取上清液作為白術(shù)對照藥材溶液。再取黨參對照藥材1 g，加65%的乙醇30 mL和鹽酸3 mL，加熱回流30 min，濾過，濾液用氯仿25 mL萃取，氯仿液蒸干，殘渣加甲醇2 mL使溶解，作為黨參對照藥材溶液。吸取對照藥材溶液和陳皮與烏梅鑒別項下的供試品溶液各6 μL，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠GF254薄層板上，以環(huán)己烷－醋酸乙酯(7∶3)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，100℃烘烤至斑點顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與黨參對照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上至少顯1個相同顏色的斑點;置紫外光燈(365 nm)下檢視，在與白術(shù)對照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上顯1～2個相同顏色的熒光斑點(圖2)[1]。

圖2 白術(shù)、黨參薄層色譜圖

山藥:取本品，研細(xì)，稱取2 g，加甲醇25 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20 mL使溶解，用乙醚提取2次，每次20 mL，合并乙醚層，蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。取不含山藥的陰性樣品，同法制成陰性對照品溶液。另取山藥對照藥材1 g，加甲醇超聲30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，制成對照藥材溶液。吸取對照藥材溶液、供試品與陰性對照品溶液各10 μL，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯－甲醇－水－丙酮(8∶3∶1.5∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，置105℃烘至斑點顯色清晰，日光下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上分別顯相同顏色的主斑點(圖3 A)。

干姜:取山藥鑒別項下的供試品溶液作為供試品溶液，另取干姜對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。吸取對照藥材溶液、供試品與陰性對照品溶液各10 μL，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以甲苯－醋酸乙酯(8∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛10%硫酸乙醇溶液，置105℃烘至斑點顯色清晰，日光下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上分別顯相同顏色的主斑點(圖3 B)。

圖3 山藥、干姜薄層色譜圖

2.2 橙皮苷含量測定

2.2.1 色譜條件

色譜柱:十八烷基硅烷鍵合硅膠柱(150 mm×4.6 mm，5 μm);流動相:甲醇－7%醋酸水溶液(32∶68);流速:1.0 mL/min;檢測波長:283 nm;柱溫:25 ℃;進(jìn)樣量:5 μL。

2.2.2 溶液制備

精密稱取橙皮苷對照品12.50 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液;精密吸取對照品貯備液5 mL置25 mL量瓶中，流動相稀釋至刻度，即得每1 mL含50 μg的對照品溶液。取片重差異項下的本品，除去薄膜衣，研細(xì)，精密稱取0.5 g，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇25 mL，密塞，稱重，超聲處理40 min，放冷，稱重，用甲醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，精密吸取續(xù)濾液10 mL，置25 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，即得供試品溶液。稱取處方量除陳皮外的方中藥材，按制備工藝制得空白樣品，再按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

2.2.3 方法學(xué)考察

陰性干擾試驗:吸取供試品溶液、對照品溶液和陰性對照品溶液，按上述色譜條件測定。結(jié)果供試品溶液與對照品溶液在相同時間處有相同的色譜峰出現(xiàn)，陰性對照品溶液無干擾，見圖4。

標(biāo)準(zhǔn)曲線制備:分別精密吸取對照品貯備液，置25 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制備成質(zhì)量濃度為 9.8，29.4，49，73.5，147 μg/mL的對照品溶液，精密吸取5 μL注入液相色譜儀，測定峰面積。以峰面積積分值為縱坐標(biāo)(Y)、橙皮苷進(jìn)樣量(ng)為橫坐標(biāo)(X)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y=1.8811 X+19.657(r=0.9997)。結(jié)果表明，橙皮苷進(jìn)樣量在49～735 ng范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗:精密吸取對照品溶液及供試品溶液連續(xù)進(jìn)樣5次，測定峰面積。結(jié)果對照品溶液的 RSD=0.19%(n=5)，供試品溶液的 RSD=0.56%(n=5)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗:精密吸取對照品溶液及供試品溶液，每隔一定時間進(jìn)樣，測定峰面積結(jié)果對照品溶液的 RSD=0.47%，供試品溶液RSD=0.78%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

圖4 高效液相色譜圖

重現(xiàn)性試驗:取同一批樣品，分別取高(0.6 g)、中(0.5 g)、低(0.4 g)3種劑量，每種劑量取3份，依法制備供試品溶液，依法測定。結(jié)果樣品平均含量為 1.678 mg/g，RSD=0.19%，表明方法重現(xiàn)性較好。

加樣回收試驗:取同一批樣品共9份，分為3組，分別加入低、中、高3種質(zhì)量濃度的橙皮苷對照品溶液，按供試品溶液制備方法制備溶液，依法測定，計算加樣回收率。結(jié)果見表1。

表1 橙皮苷加樣回收試驗結(jié)果(n=9)

2.2.4 樣品含量測定

依法對3批養(yǎng)胃舒片進(jìn)行含量測定。結(jié)果3批樣品的平均含量為 0.753 mg/片。

3 討論

筆者采用文中鑒別方法，實現(xiàn)了兩塊薄層板鑒別烏梅、白術(shù)和陳皮、黨參，采用同一供試品鑒別山藥、干姜，方法簡便、快捷、省時，節(jié)約了試劑、試藥和檢測人員的時間。這是中藥制劑質(zhì)量檢測的必然發(fā)展方向。

筆者曾采用2005年版《中國藥典(一部)》[2]中陳皮含量測定項下流動相甲醇－醋酸－水(35∶4∶61)，結(jié)果樣品分離度不理想，而采用甲醇－7%醋酸水溶液(32∶68)為流動相，即可以得到分離度、對稱性均較好的橙皮苷吸收峰。

[1]韓桂茹，趙志軍，裴志良.溫胃舒片的薄層鑒別和三成分同時定量研究[J]. 中成藥，2007，29(1):79 －83.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:132.