李函 張曉懿 朱靜

2型糖尿病微血管并發(fā)癥主要包括糖尿病視網(wǎng)膜病變(diabetic retinopathy，DR)、糖尿病腎病(diabetic nephropathy，DN)、糖尿病神經(jīng)病變等微血管病變。臨床以DR和DN對(duì)患者的危害尤甚。據(jù)最新統(tǒng)計(jì)，在我國(guó)農(nóng)村30歲以上人群中2型糖尿病患者將近2.11千萬(wàn)，其中920萬(wàn)患者伴有 DR，130萬(wàn)人伴有視力損傷［1］。當(dāng)2型糖尿病病程超過(guò) 20年的患者幾乎100%會(huì)出現(xiàn)DR。因此，開(kāi)展對(duì)DR的發(fā)病機(jī)制、診斷、治療等方面的系列研究，將對(duì)防盲治盲，提高患者的生活質(zhì)量具有極其重要的意義［2］。為共同探討DR的發(fā)病機(jī)制和發(fā)展過(guò)程，本文測(cè)定了3組2型糖尿病患者的血清線粒體偶聯(lián)因子6(mitochondrial coupling factor 6，CF6)、骨橋蛋白(osteopontin，OPN)、降鈣素原(procalcitonin，PCT)和新蝶呤(neopterin，NPt)水平，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 資料 選擇2008年1月～2010年12月到我院門診及住院治療的2型糖尿病患者共150例，其中男性97例、女性53例，平均年齡(56.87土2.01)歲，均按1998年世界衛(wèi)生組織診斷標(biāo)準(zhǔn)確診。所有糖尿病患者都由固定的眼科專家查眼底，可疑陽(yáng)性時(shí)行熒光造影。根據(jù)2002年悉尼國(guó)際眼科學(xué)會(huì)議通過(guò)的糖尿病視網(wǎng)膜病變國(guó)際分期標(biāo)準(zhǔn)將患者分為3組:不合并視網(wǎng)膜病變(DR-0，NDR組，n=60)為A組，非增殖期視網(wǎng)膜病變(DR-1、DR-2 和 DR-3，NPDR 組，n=50)為B組，增殖期視網(wǎng)膜病變(DR-4，PDR組，n=40)為C組。根據(jù)課題設(shè)計(jì)將B、C組患者血清CF6、OPN、PCT和NPt指標(biāo)測(cè)定值分別與A組測(cè)定水平進(jìn)行比較，同時(shí)比較分析B和C組之間的統(tǒng)計(jì)差異。

1.2 方法 抽取3組患者清晨空腹肘靜脈血各4 mL，置于4℃預(yù)冷的試管內(nèi)靜置30 min，4～8℃低溫離心機(jī)分離血清(相對(duì)離心力為100×g，15 min)，置于－70℃冰箱冷凍保存待測(cè)。

血清CF6采用放射免疫分析法，放射免疫試劑盒由美國(guó)Phoenix Pharmaceuticals公司提供;測(cè)定儀器為中國(guó)科學(xué)院上海原子核研究所日環(huán)儀器一廠生產(chǎn)的SN-695B型全自動(dòng)γ-計(jì)數(shù)器。OPN、NPt采用酶聯(lián)免疫分析法，試劑盒分別購(gòu)自美國(guó)Assay Designs和Immunotech公司，測(cè)定儀器為美國(guó)FAMIER-150型全自動(dòng)酶標(biāo)免疫分析系統(tǒng)。PCT采用免疫發(fā)光法，儀器和試劑由德國(guó)柏林Brahms公司提供。4項(xiàng)指標(biāo)測(cè)定均有專職技術(shù)人員嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)操作。

2 結(jié)果

3組患者測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1，CF6水平B組和C組均高于 A 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05，P ＜0.01)，且C組高于B組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。OPN水平顯示B組略高于A組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，而 C組高于A組和B組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＜0.05)。PCT水平3組差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＞0.05)。NPt水平顯示B組略高于A組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，而C組高于A組和B組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＜0.05)。

表1 3組患者血清CF6、OPN、PCT和NPt指標(biāo)的變化(，ng/mL)

表1 3組患者血清CF6、OPN、PCT和NPt指標(biāo)的變化(，ng/mL)

注:a示與A組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);b示與A組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);c示與B組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)

組別 n CF6 OPN PCT NPt A 組 60 102.19 ±37.23 35.42 ±10.26 6.98 ±3.81 13.25±5.01 B 組 50 179.56 ±93.73a 43.97 ±14.76 7.86 ±4.25 15.20 ±6.98 C 組 40 321.25 ± 175.23b、c 64.21 ±20.29a、c 8.06 ±4.72 44.19 ±13.02a、c

3 討論

現(xiàn)已知CF6是人體內(nèi)唯一的內(nèi)源性前列環(huán)素I2(prostaglandin I2，PGI2)合成抑制因子，主要分布于線粒體內(nèi)及血管內(nèi)皮細(xì)胞膜上。在線粒體內(nèi)，它是ATP合成酶的一個(gè)亞單位，主要參與能量物質(zhì)的轉(zhuǎn)換ATP生成。CF6通過(guò)抑制胞質(zhì)鈣依賴磷脂酶A2的活性，減少內(nèi)源性花生四烯酸釋放，從而減少PGI2的生成。當(dāng)血管內(nèi)皮細(xì)胞受損時(shí)，CF6釋放入血液循環(huán)，抑制PGI2合成［3］。它是一種新近發(fā)現(xiàn)的間接性血管活性因子，其水平的變化與血管結(jié)構(gòu)和功能病變相關(guān)。本文將其用于2型糖尿病患者DR的研究，目前國(guó)內(nèi)尚鮮見(jiàn)報(bào)道。測(cè)定結(jié)果顯示，CF6水平B組和C組均顯著高于A 組(P ＜0.05，P ＜0.01)，且C 組高于B 組(P ＜0.05)。表明2型糖尿病患者的DR與全身性的血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷有關(guān)，其測(cè)定值的升高與DR嚴(yán)重程度呈明顯平行關(guān)系。其水平升高的原因可能因患者長(zhǎng)期的高糖血癥導(dǎo)致了血管內(nèi)皮細(xì)胞受損;另2型糖尿病患者多存在脂類代謝紊亂，更加速了患者的血管不可逆性進(jìn)展性病變。CF6釋放增多，血清水平升高。我們認(rèn)為這可能作為一種血管結(jié)構(gòu)與功能病變的衡量指標(biāo)，測(cè)定其水平的變化有助于說(shuō)明DR的發(fā)病機(jī)制。

OPN是一種新近發(fā)現(xiàn)的與細(xì)胞外基質(zhì)蛋白同源的促炎細(xì)胞因子，主要表達(dá)于巨噬細(xì)胞、活化的T細(xì)胞、上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞等，參與細(xì)胞的趨化、聚集、黏附、增殖和遷移、免疫調(diào)節(jié)、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、傷口愈合、組織修復(fù)和腫瘤的發(fā)生等多種生物學(xué)過(guò)程。近年來(lái)研究［4］認(rèn)為，OPN可作為炎性因子參與免疫應(yīng)答，在多種自身免疫性疾病(如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡)中表達(dá)異常，在疾病的發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用。本文對(duì)2型糖尿病DR病例的研究結(jié)果顯示，OPN水平B組略高于A組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);C組則高于A組和B組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＜0.05)。表明2型糖尿病患者DR進(jìn)展至增殖期即較重的階段時(shí)，其血清水平可顯著升高。我們認(rèn)為，OPN可能作為炎性因子參與了2型糖尿病患者DR的病理發(fā)展過(guò)程，不排除自身免疫性損傷因素，然而更有可能參與了DR增殖性炎癥部位的修復(fù)過(guò)程，其確切的病理機(jī)制較為復(fù)雜，有待進(jìn)一步的基礎(chǔ)研究得以證實(shí)。

PCT是一種無(wú)激素活性的糖蛋白，是降鈣素前肽物質(zhì)。在生理情況下，甲狀腺C細(xì)胞可產(chǎn)生極少量的PCT。在嚴(yán)重細(xì)菌感染特別是膿毒敗血癥時(shí)，細(xì)菌內(nèi)毒素可誘導(dǎo)肝臟中的巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞，肺、腸道組織的淋巴細(xì)胞及內(nèi)分泌細(xì)胞合成分泌PCT。此時(shí)血清PCT水平2 h后即可升高，6～8 h會(huì)明顯升高，12～48 h達(dá)到峰值，且隨感染進(jìn)展或控制持續(xù)在高水平或逐漸下降，感染控制后一般在1周左右降至正常水平。若PCT水平持續(xù)升高，則提示療效及預(yù)后不佳［5］。還有報(bào)道［6］顯示，川崎病(Kawasake disease，KD)患兒治療前血清PCT水平明顯高于對(duì)照組(P＜0.01)，提示KD患兒中PCT變化可反映感染觸發(fā)的免疫因素介導(dǎo)進(jìn)一步炎癥反應(yīng)規(guī)律。它有可能成為一項(xiàng)能夠反映KD的免疫性炎癥改變的參考指標(biāo)，并有望成為預(yù)測(cè)KD冠脈損害的危險(xiǎn)因素之一。本文在課題設(shè)計(jì)時(shí)認(rèn)為，2型糖尿病患者DR的病理發(fā)展過(guò)程與免疫性炎癥改變很有可能存在密切的關(guān)系，然測(cè)定結(jié)果顯示，PCT水平雖顯微弱地遞增性升高，但組間統(tǒng)計(jì)差異均無(wú)顯著性意義(P均＞0.05)。這一結(jié)果有些出乎原先的課題設(shè)計(jì)推測(cè)，說(shuō)明了PCT對(duì)于細(xì)菌感染和全身性免疫性炎癥患者，其檢測(cè)意義較具價(jià)值;而要用于2型糖尿病DR病例，其價(jià)值甚微。

NPt是體內(nèi)三磷酸鳥(niǎo)苷(GTP)和四氫生物蝶呤生物合成途徑中的中間產(chǎn)物之一，也是苯丙氨酸、酪氨酸及色氨酸羥化過(guò)程中的輔酶。是一種相對(duì)低分子質(zhì)量的堿性物質(zhì)，由GTP經(jīng)GTP-環(huán)水解酶I合成。目前僅在人類和靈長(zhǎng)類動(dòng)物中檢測(cè)到NPt，其生物穩(wěn)定性較好。目前對(duì)NPt的研究，已經(jīng)涉及與細(xì)胞免疫反應(yīng)激活相關(guān)的各類疾病，包括感染、創(chuàng)傷、腫瘤、自身免疫和其他炎癥性疾病。還有助于輔助診斷鑒別伴有或無(wú)細(xì)胞免疫參與的疾?。?］。本文研究的2型糖尿病患者DR主要病因?qū)W機(jī)制是視網(wǎng)膜微血管病變，是2型糖尿病進(jìn)展中重要的并發(fā)癥。據(jù)統(tǒng)計(jì)［8］，2型糖尿病人群伴發(fā)大血管并發(fā)癥為一般人群的2～6倍。近年來(lái)，越來(lái)越多的研究支持2型糖尿病是一種慢性低度炎癥狀態(tài)的假說(shuō)，認(rèn)為2型糖尿病可能是細(xì)胞因子介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。本文測(cè)定的2型糖尿病DR病例的血清NPt水平顯示，B組略高于A組，但差異并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，C組則顯著高于A組和B組(P均＜0.05)。表明2型糖尿病DR病例存在血管內(nèi)皮損傷，處于慢性低度炎癥狀態(tài)，從而影響了機(jī)體淋巴細(xì)胞-巨噬細(xì)胞軸，使之產(chǎn)生γ-干擾素等細(xì)胞因子，激活了單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)，引起NPt的持續(xù)產(chǎn)生，導(dǎo)致血清水平升高。有學(xué)者［9］綜合研究結(jié)果認(rèn)為，NPt可作為反映主要免疫炎性細(xì)胞群激活程度的穩(wěn)定標(biāo)志物。對(duì)此我們認(rèn)為，2型糖尿病患者DR的主要病因?qū)W機(jī)制較為復(fù)雜，若要將本指標(biāo)用于臨床DR病情的評(píng)估，其可行性還有待進(jìn)一步探討。

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