張競怡，王文杰，史 歡，盧小龍，郭豫梅

(陜西理工學院 化學與環(huán)境科學學院，陜西 漢中 723001)

地膚(Kochia scoparia)，俗名掃帚菜、掃帚苗，屬藜科(Chenopodiaceae)一年生草本植物。地膚子為其成熟干燥的果實，其性寒、味甘苦、無毒［1］。地膚子的營養(yǎng)成分非常豐富，含有三萜皂甙、齊墩果酸及油酸、亞油酸等不飽和脂肪酸［2］，同時它還有很高的藥用價值，具有利小便、清濕熱、止癢之功效。外用可治各種皮膚瘙癢、濕疹、干癬、皮膚過敏等?，F(xiàn)代研究表明，地膚子主要含三萜皂苷、生物堿、黃酮類和脂肪油等成分，具有降血糖，抗病毒，增強免疫力等功效［3－4］。隨著人們對地膚子營養(yǎng)成分和藥用價值認識的逐步深入，地膚子越來越受到人們的重視，成為眾多學者的研究熱點。

目前，對地膚子中皂苷、生物堿、脂肪酸等生物活性成分研究報道的較多，而對地膚子中黃酮類物質研究報道的較少。黃酮類化合物具有抑菌消炎、抗氧化、抗衰老、抗癌防癌等諸多功效［5］。在植物器官中提取總黃酮已有不少報道［6－8］，研究地膚子黃酮類物質的提取工藝及抗氧化性，旨在為大量提取、開發(fā)黃酮類化合物及綜合利用地膚子資源提供依據(jù)，同時對從植物原料中提取天然抗氧化劑的研究開發(fā)具有一定的指導作用。

1 材料和方法

1.1 材料與儀器

地膚子購于漢中健康大藥房。蘆丁標準品為中國醫(yī)藥(集團)上?；瘜W試劑公司生產(生化試劑)。無水乙醇、硝酸鋁、氫氧化鈉、亞硝酸鈉、水楊酸試劑以上均為國產分析純。電熱恒溫鼓風干燥箱(上海森信實驗儀器有限公司)、粉碎機(天津市泰斯特儀器有限公司)、電熱恒溫水浴鍋(北京科偉永興儀器有限公司)、AL204-IC型電子天平(上海志榮電子科技有限公司)、722E型分光光度計(上海光譜儀器有限公司)、800型離心沉淀器(上海手術器械廠)、SHB-III型臺式循環(huán)水式多用真空泵(鄭州長城科工貿有限公司)和索式提取器(金壇市晶玻實驗儀器廠)。

1.2 試驗設計與方法

1.2.1 樣品處理

將地膚子在50℃恒溫干燥箱中烘干，粉碎、石油醚脫脂，風干，得到樣品粉末。

1.2.2 總黃酮含量測定

蘆丁標準曲線繪制。精確稱取經60℃干燥至恒重的蘆丁標準品10.0 mg，用60%乙醇溶解定容至50 mL的容量瓶中，配制成0.2 mg·mL－1的蘆丁標準溶液。準確吸取0.00，2.00，3.00，4.00，5.00，6.00，7.00，8.00，9.00 mL，分別置于25 mL的容量瓶中，各加30%乙醇溶液至8 mL，再加5%NaNO2溶液0.4 mL，振搖后放置6 min;加10%Al(NO3)3溶液0.4 mL，搖勻后放置6 min;加4%NaOH溶液8 mL，用30%乙醇定容至刻度，放置10 min后，以相應的溶劑做空白，在波長508 nm下測其吸光度［9］。以濃度(X，mg·mL－1)為橫坐標，以吸光度(Y)為縱坐標，繪制蘆丁濃度－吸光度標準曲線。

總黃酮含量測定。取2 mL提取液，按照1.2.2的NaNO2-Al(NO3)3-NaOH體系絡合化學吸光法測定樣品溶液的吸光度［10］。從標準曲線中查出總黃酮的濃度，計算總黃酮的提取率。計算公式為:總黃酮提取率/%=總黃酮濃度(mg·mL－1) ×稀釋倍數(shù)×提取液體積(mL) ×10－3/樣品質量 ×100。

1.2.3 地膚子總黃酮提取

單因素試驗。精確稱取地膚子粉末樣品1.000 0 g于150 mL錐形瓶中，按試驗要求加入一定量的提取溶劑，在一定的溫度下浸提一定時間。抽濾、離心，取樣測定，試驗乙醇濃度、料液比、溫度、提取時間等因素對地膚子總黃酮提取的影響。

正交試驗。在單因素試驗的基礎上，以乙醇濃度(A)、提取時間(B)、溫度(C)、料液比(D)為試驗因素，以地膚子總黃酮的提取率為試驗指標，選用L9(34)正交表確定最佳的提取工藝。1－3水平A分別為60%，70%和80%，B分別為2.0，2.5和3.2 h，C分別為60，70和80℃，D 分別為 1∶70，1∶80 和 1∶90。

1.2.4 地膚子黃酮對羥自由基的清除能力的測定

利用H2O2與Fe2+混合產生羥自由基(-OH)，由于-OH具有很高的反應活性，存活時間短，若在該反應體系中加入水楊酸就能有效地捕捉-OH，并產生有色產物，該產物在波長508 nm處有強吸收。若在該反應體系中加入具有清除-OH功能的被測物，則會與水楊酸競爭-OH，從而使有色產物生成量減少［11］。在試管中依次移取 l mmol·L－1硫酸亞鐵2.5 mL和3 mmol·L－1雙氧水2.5 mL，混合均勻后加入3 mmol·L－1水楊酸7.5 mL，在37℃的恒溫水中反應15 min，在722E型分光光度計上于508 nm波長處測其吸光度，即為Y0值。再加入1 mL不同濃度的樣品提取液，搖勻，于37℃水浴中反應15 min，測得其吸光度(Yx)，用下列公式計算其清除率。清除率/%=(Y0－Yx)/Y0×100。

2 結果與分析

2.1 蘆丁標準曲線

按照1.2.2節(jié)所設計蘆丁濃度梯度進行標準曲線的繪制，結果見圖1。得到蘆丁濃度X與吸光度Y的回歸方程式為:Y=10.418X+0.002 8，R2=0.999 7，表明蘆丁濃度在這一范圍內線性關系良好。

2.2 單因素試驗

2.2.1 乙醇濃度

圖1 地膚子總黃酮含量測定的標準曲線

準確稱取1.000 0 g地膚子粉末，在料液比1∶60、溫度60℃、提取時間2 h的條件下，用不同濃度的乙醇對地膚子進行浸提，結果見圖2。

圖2 乙醇濃度對總黃酮提取率的影響

由圖2可以看出，黃酮的提取率開始隨乙醇濃度的增大而增大，當乙醇濃度達到70%時提取率達到最大，以后再增加，黃酮提取率有所下降?？赡苁怯捎陔S著乙醇濃度的增大導致溶液的極性不同，一些脂溶性雜質的濃度增加，影響黃酮類物質的溶出［9］。故進行試驗時乙醇濃度最好選 70%左右。

2.2.2 料液比

準確稱取1.000 0 g地膚子粉末，在乙醇濃度70%、溫度60℃、提取時間2 h的條件下，用不同料液比對地膚子進行浸提，結果見圖3。

由圖3可以看出，黃酮提取率隨料液比增大而增大，當料液比達到1∶80時黃酮提取率最大，以后變化不大。說明黃酮已經基本全部溶出，再增加料液比黃酮提取率不會明顯的增加。因此，料液比選為1∶80為宜。

2.2.3 提取時間

圖3 料液比對總黃酮提取率的影響

準確稱取1.000 0 g地膚子粉末，在乙醇濃度70%、料液比1∶80、溫度60℃的條件下，用不同時間對地膚子進行浸提，結果見圖4。

圖4 提取時間對總黃酮提取率的影響

從圖4可以看出，提取時間在2.5 h左右效果最好，此時黃酮類物質溶出已達到平衡，再延長時間，由于部分乙醇揮發(fā)而導致沸點逐漸增大，破壞了一些黃酮化合物，從而使總黃酮的提取率有所下降。

2.2.4 溫度

準確稱取1.000 0 g地膚子粉末，在乙醇濃度70%、料液比1∶80、提取時間2.5 h的條件下，用不同溫度對地膚子進行浸提，結果見圖5。

圖5 溫度對總黃酮提取率的影響

從圖5可以看出，40～70℃，黃酮提取率隨著溫度的升高迅速增大，這是由于溫度升高，分子運動加快，滲透、擴散、溶解速率加快，黃酮化合物更易從細胞中溶出［12］。當溫度超過70℃以后，黃酮的提取率開始下降?？赡苁菧囟冗^高，黃酮化合物被破壞導致其提取率下降。故地膚子黃酮提取時溫度最好控制在70℃左右。

2.3 正交試驗結果

地膚子提取總黃酮的正交試驗結果見表1。由表1可知，各因素對地膚子總黃酮提取率大小的影響次序為:乙醇濃度＞溫度＞料液比＞提取時間。同時還可以看出地膚子中總黃酮提取的最佳工藝為A3C3D2B3，即用80%乙醇為提取劑，在80℃條件下以料液比1∶80提取3 h。

表1 地膚子提取總黃酮的正交試驗結果

地膚子黃酮對羥自由基的清除能力見表2。

由表2可以看出，地膚子黃酮對羥自由基有明顯的清除作用，隨著地膚子黃酮濃度的增加清除作用加強。

表2 地膚子黃酮對羥自由基的清除能力

3 小結與討論

通過單因素梯度試驗和正交試驗，得到從地膚子中提取總黃酮的最佳提取條件組合為乙醇濃度80%、提取溫度80℃、料液比1∶80、提取時間3 h。

地膚子總黃酮有較好的羥自由基清除能力。由此可見地膚子黃酮是一種很好的天然抗氧化劑，具有較高的藥用價值，值得進一步開發(fā)利用。

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