董海影 張 春 (齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)技術(shù)學(xué)院，黑龍江 齊齊哈爾 161006)

在我國，胃癌特別是進(jìn)展期胃癌患者的5年生存率僅為15%左右，其中50%死于復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移〔1〕。而子宮頸癌位于女性惡性腫瘤發(fā)病和死亡率的第二位，每年全球約有50萬新診斷的子宮頸癌患者，接近27萬人死于子宮頸癌，其中有80%的死亡病例發(fā)生在發(fā)展中國家。在我國，每年新增子宮頸癌例約13.5萬，約有8萬人因此死亡〔2〕。因此，尋找胃癌與宮頸癌的早期標(biāo)志物以及在轉(zhuǎn)移中起關(guān)鍵作用的靶分子，為臨床治療提供高效的新靶點(diǎn)，是目前胃癌與宮頸癌研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)。

1 對(duì)象與方法

1.1 病例資料 2006～2009年齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院手術(shù)切除的胃腺癌58例，其中，男30例，女28例，年齡31～78〔平均(54.5±20.7)〕歲，依據(jù) WHO腺癌組織學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行組織學(xué)分級(jí)，高、中、低分化各17、18、23例。同時(shí)隨機(jī)選取同一手術(shù)切除標(biāo)本遠(yuǎn)端的正常胃黏膜組織28例作為對(duì)照。宮頸癌55例，年齡33～75〔平均(42.6±21.2)〕歲，同樣依據(jù)診斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分級(jí)，高、中、低分化各16、19、20例。并選取同一手術(shù)切除標(biāo)本遠(yuǎn)端的正常宮頸黏膜組織24例作為對(duì)照。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑 第Ⅰ抗體為鼠抗人，單克隆抗體，由美國MAXIM公司生產(chǎn);SABC免疫組化試劑盒和DAB顯色試劑盒分別由武漢博士德生物工程有限公司和福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司提供。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 切片制作 將新鮮標(biāo)本固定于10%中性甲醛中過夜，常規(guī)乙醇梯度脫水，二甲苯透明和石蠟包埋，連續(xù)切片厚度5 μm。部分切片常規(guī) HE染色，用于病例診斷。其他切片37℃溫箱儲(chǔ)存待染。

1.3.2 免疫組化染色 免疫組織化學(xué)主要染色步驟:①切片脫蠟水化;②3%H2O2甲醇滅活內(nèi)源性過氧化物酶;③依次滴加一抗、二抗和三抗;④DAB顯色;⑤蘇木精復(fù)染;⑥常規(guī)脫水、透明、封片。用PBS代替一抗作陰性對(duì)照。

1.3.3 染色結(jié)果判斷 以細(xì)胞和(或)細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)明顯的棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞。每例隨機(jī)選取出10個(gè)不重復(fù)、不重疊的高倍視野(10×40)，計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞數(shù)及所有細(xì)胞數(shù)，計(jì)算陽性細(xì)胞率=Σ陽性細(xì)胞數(shù)/Σ細(xì)胞數(shù)×100%。同時(shí)按染色強(qiáng)度評(píng)分:無顯色為1分，染色弱為2分，中等染色為3分，強(qiáng)染色為4分。CD151表達(dá)量=顯色強(qiáng)度×細(xì)胞陽性率%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 所有數(shù)據(jù)運(yùn)用SPSS13.0軟件包進(jìn)行處理，計(jì)量數(shù)據(jù)以±s表示，采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

CD151在所有的胃腺癌(58/58，100.0%)和宮頸癌組織(55/55，100.0%)都表達(dá)，在絕大多數(shù)正常胃黏膜(26/28，92.9%)和宮頸黏膜組織(23/24，95.8%)中也都表達(dá)。CD151在胃腺癌和宮頸癌中的細(xì)胞陽性率及表達(dá)量都要顯著高于正常組織(P＜0.05)。見表1，表2，圖1。

表1 CD151在正常胃黏膜及胃腺癌的表達(dá)

圖1 CD151在胃及宮頸組織中的表達(dá)(DAB，×400)

表2 CD151在正常宮頸黏膜及宮頸癌的表達(dá)

3 討論

四次跨膜蛋白超家族(Transmembrane 4 superfamily，TM4SF)是近年來被廣泛研究的一個(gè)膜蛋白家族，在人體細(xì)胞中廣泛表達(dá)。這個(gè)家族的成員參與細(xì)胞表面分子之間的連接信號(hào)傳導(dǎo)，在調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、激活以及細(xì)胞黏附活力中起重要作用。研究證實(shí)，TM4SF家族在腫瘤的生長、遷移及血管生成中起重要作用〔3〕。迄今為止，該家族已檢測出30多個(gè)成員，其中絕大多數(shù)被認(rèn)為是抑癌基因，例如CD9、CD82。它們的產(chǎn)物與腫瘤發(fā)展、預(yù)后呈負(fù)相關(guān)。而新近發(fā)現(xiàn)的TM4SF成員CD151卻與腫瘤發(fā)生及預(yù)后呈正相關(guān)〔4〕，并且是該家族成員中唯一的癌基因〔5〕。CD151在人類多種腫瘤細(xì)胞表面均有較高水平的表達(dá)，與腫瘤的預(yù)后、惡性進(jìn)展、治療等有著密切關(guān)系，隨著癌的進(jìn)展CD151的表達(dá)增加，且CD151表達(dá)越高患者預(yù)后越差〔4〕。并且研究證實(shí)，CD151對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的移行及微血管形成起促進(jìn)作用，在血管生成及重塑中起關(guān)鍵作用，有利于腫瘤細(xì)胞的浸潤及轉(zhuǎn)移〔6〕。鑒于CD151與腫瘤發(fā)展呈正相關(guān)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、浸潤及轉(zhuǎn)移，在腫瘤惡性進(jìn)展中起著重要的作用。本實(shí)驗(yàn)利用免疫組織化學(xué)法檢測CD151與胃腺癌和宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系。

本研究通過免疫組織化學(xué)法檢測CD151在胃腺癌和正常胃黏膜組織中的表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)，CD151在胃腺癌組織中呈現(xiàn)陽性的高表達(dá)，相比較于在正常胃黏膜組織中的表達(dá)，非常顯著。由此認(rèn)為，CD151在胃腺癌的發(fā)生發(fā)展中起著非常重要的作用。而要闡明CD151與胃癌發(fā)生發(fā)展、浸潤及轉(zhuǎn)移中的關(guān)系，為胃癌的早期診斷、進(jìn)展判定及轉(zhuǎn)移預(yù)測提供有臨床實(shí)用價(jià)值的標(biāo)志物，為胃癌尤其是進(jìn)展期胃癌的臨床治療提供新的靶向分子，還需要通過進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)加以證實(shí)。

本次實(shí)驗(yàn)我們同樣發(fā)現(xiàn)，CD151的細(xì)胞陽性率和CD151表達(dá)量在宮頸癌組織中均高于正常的宮頸黏膜組織。因此，CD151蛋白可能是宮頸癌治療的一個(gè)潛在靶點(diǎn)。宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤〔7〕，目前認(rèn)為宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展是由量變到質(zhì)變、由漸變到突變的過程。早期宮頸癌治療效果尚可，但后期宮頸癌的浸潤及轉(zhuǎn)移是其治療中的主要問題〔8〕。由本次試驗(yàn)結(jié)果可見，CD151在宮頸癌的發(fā)生與發(fā)展中存在著一定的作用。至于其在宮頸癌的早期診斷、療效檢測和預(yù)后評(píng)估中的價(jià)值需要在隨后的臨床跟蹤實(shí)驗(yàn)中得到進(jìn)一步的證實(shí)。

1 徐光煒.胃癌治療的現(xiàn)狀及問題〔J〕.外科理論與實(shí)踐，2003;8(1):3.

2 朱雪瓊，石一復(fù).HPV疫苗預(yù)防子宮頸癌臨床研究進(jìn)展〔J〕.實(shí)用腫瘤雜志，2010;25(1):12-6.

3 Yauch RL，Kazarov AR，Desai B，et al.Direct extracellular contact between integrin α3β1and TM4SF protein CD151〔J〕.J Biol Chem，2000;2759(13):9230-8.

4 Ang J，Lijovic M，Ashman L K，et al.CD151 protein expression predicts the clinical outcome of Low-grade primary prostate cancer better than histologic grading:a new prognostic indicator〔J〕.Cancer Epidemiol Biomarkers Prev，2004;13(11):1717-21.

5 Hong IK，Jin YJ，Byun HJ，et al.Homophilic interactions of Tetraspanin CD151 up-regulate motility and matrix metalloproteinase-9 expression of human melanoma cells through adhesion-de-pendent c-Jun activation sig-naling pathways〔J〕.J Biol Chem，2006;281(34):24279-92.

6 Lan RF，Liu ZX，Liu XC，et al.CD151 promotes neovascularization and improves blood perfusion in a rat hind-limb ischemia model〔J〕.J Endovasc Ther，2005;12(4):469-78.

7 Dang DT，Bachman KE，Mahatan CS，et al.Decreased expression of the gut-enriched Kruppel-like factor gene in intestinal adenomas of multiple intestinal neoplasia mice and in colonic adenomas of familial adenomatous polyposis patients〔J〕.FEBS Lett，2000;476(3):203-7.

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