陸松偉，宋洪杰，陳方劍(第二軍醫(yī)大學(xué)長海醫(yī)院藥學(xué)部，上海 200433)

復(fù)方樟腦搽劑是《中國人民解放軍醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑規(guī)范》中收載的外用制劑，由液化苯酚、樟腦、薄荷腦和乙醇為主要成分組成，有消炎止癢作用，廣泛用于皮膚瘙癢癥的治療。其主要成分常溫下都不穩(wěn)定，在生產(chǎn)和儲(chǔ)存過程中控制其主要成分的含量很有必要，但本制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中沒有含量測定項(xiàng)，為進(jìn)一步提高和控制復(fù)方樟腦搽劑的質(zhì)量，筆者參考有關(guān)文獻(xiàn)［1～3］，建立了同時(shí)測定苯酚和樟腦兩種成分含量的HPLC法，用于復(fù)方樟腦搽劑的質(zhì)量控制。

1 儀器和試藥

1.1 儀器 LC-10ADVP高效液相色譜儀(日本島津制作所，包括LC-10AT泵、SPD-10A紫外檢測器、CLASS vp色譜工作站和SCL-10Avp系統(tǒng)控制器);FA-2004電子天平(上海天平儀器廠)。

1.2 藥品和試劑 苯酚(含量100.0%，江門市恒鍵藥業(yè)有限公司，批號 080601);樟腦(含量96.4%，福建輕松股份有限公司，批號100402);復(fù)方樟腦搽劑(第二軍醫(yī)大學(xué)長海醫(yī)院自制，批號101024、101101、101102、101103);水為蒸餾水，甲醇為色譜純。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 供試品溶液 精密量取供試品0.5 ml于25 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm 微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液備用。

2.1.2 模擬樣品和陰性對照樣品溶液 按處方工藝制備陰性對照和模擬樣品，按供試品溶液制備方法制備成溶液。

2.1.3 對照品溶液 精密稱取苯酚對照品0.103 4 g、樟腦對照品0.250 1 g一同置于100 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制得含苯酚、樟腦成分的對照品貯備液;精密量取上述貯備液各1.0、2.0、4.0、6.0 和8.0 ml，分別置于 10 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，制得苯酚和樟腦對照品混合溶液，苯酚濃度分別為 103.4、206.8、413.6、620.4 和 827.2 μg/ml，樟腦濃度分別為 205.1、410.2、820.4、1 230.6 和1 640.8 μg/ml。

2.2 色譜條件和系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn) Kromasil-C18色譜柱(200 mm ×4.0 mm，5 μm);流動(dòng)相為甲醇-水(55∶45);檢測波長287 nm;流速0.8 ml/min;進(jìn)樣量20 μl;柱溫為室溫［4］。苯酚和樟腦與相鄰峰的分離度均＞1.5，處方中的薄荷腦和其他輔料對2種成分的含量測定沒有干擾。陰性樣品溶液、對照品溶液和供試品溶液色譜圖見圖1。

圖1 復(fù)方樟腦搽劑的HPLC色譜圖

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密吸取上述混合對照品溶液各20 μl，進(jìn)樣，測定峰面積。以對照品溶液濃度(C)為橫坐標(biāo)，峰面積(A)為縱坐標(biāo)，求得兩組分的回歸方程。結(jié)果顯示，苯酚在 103.4 ～827.2 μg/ml范圍內(nèi)線性良好，其回歸方程為A=2 149.4C+241 882(r=0.999 1，n=5)，樟腦在205.1 ～1 640.8 μg/ml范圍內(nèi)線性良好，其回歸方程為A=305.03C+1 163.3(r=0.999 5，n=5)。

2.4 回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的模擬樣品適量，按供試品溶液制備項(xiàng)下操作，進(jìn)樣，記錄峰面積，代入線性回歸方程，計(jì)算含量并求算回收率，結(jié)果見表1。苯酚和樟腦的平均回收率分別為99.60%(RSD=1.20%，n=9)、99.82%(RSD=1.18%，n=9)，表明所建立的HPLC方法準(zhǔn)確度高。

表1 苯酚和樟腦的回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=3)

2.5 精密度實(shí)驗(yàn) 分別取低、中、高3組濃度的混合對照品溶液，在上述色譜條件下日內(nèi)精密度重復(fù)進(jìn)樣3次，日間精密度重復(fù)進(jìn)樣5次，每次進(jìn)樣間隔時(shí)間日內(nèi)精密度為4 h，日間精密度為24 h，記錄峰面積，代入線性回歸方程，計(jì)算含量。苯酚413.6、620.4、827.2 μg/ml濃度的日內(nèi)精密度RSD分別為0.66%、1.31%和0.74%，日間精密度 RSD分別為1.59%，1.88%和1.86%;樟腦820.4、1 230.6、1 640.8 μg/ml濃度日內(nèi)精密度 RSD分別為0.36%、0.42%和0.52%，日間精密度 RSD分別為1.62%，1.48%和1.98%(n=3)。結(jié)果表明所建立的HPLC方法重現(xiàn)性好，且測定時(shí)間內(nèi)樣品溶液穩(wěn)定性良好。

2.6 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取批號101103供試品溶液5份，按樣品處理方法操作，并按含量測定方法測定，代入各自的回歸方程計(jì)算含量，結(jié)果顯示，苯酚和樟腦的含量分別為97.43%和100.16%，RSD分別為0.65%和0.67%(n=5)，表明方法重復(fù)性良好。

2.7 樣品測定 取復(fù)方樟腦搽劑，按2.1.1項(xiàng)下的操作制備供試品溶液，進(jìn)樣20 μl，記錄峰面積，代入線性回歸方程計(jì)算含量，共測定4個(gè)批號，結(jié)果見表2。苯酚和樟腦兩組分含量均在標(biāo)示量的90.0% ～110.0%之間，符合外用制劑的含量限度要求［5］。

表2 復(fù)方樟腦搽劑含量測定結(jié)果( ，n=3)

表2 復(fù)方樟腦搽劑含量測定結(jié)果( ，n=3)

3 討論

本研究建立了同時(shí)測定復(fù)方樟腦搽劑中苯酚和樟腦的HPLC法。經(jīng)方法學(xué)研究表明，所建立的HPLC方法簡便、快速、準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可為復(fù)方樟腦搽的質(zhì)量控制提供依據(jù)。由于樟腦在水中極微溶解，且樟腦在樣品中含量較高，因此本實(shí)驗(yàn)中用甲醇作為溶劑，以增強(qiáng)其溶解性，避免有少量樟腦結(jié)晶析出，影響測定結(jié)果。

預(yù)實(shí)驗(yàn)中，經(jīng)過在190～400 nm波長范圍內(nèi)對苯酚樟腦對照品溶液進(jìn)行紫外光譜掃描，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，苯酚在273 nm處有最大吸收峰，樟腦在287 nm處有最大吸收峰，由于苯酚的紫外吸收特別強(qiáng)，故選擇287 nm為檢測波長，以增強(qiáng)樟腦的色譜信號響應(yīng)。

實(shí)驗(yàn)中比較了不同比例的流動(dòng)相和流速，發(fā)現(xiàn)苯酚和樟腦的保留時(shí)間隨甲醇比例的增大而縮短，流速的增加而縮短，以甲醇-水(55∶45)為最佳比例流動(dòng)相，流速0.8 ml/min為最佳流速。

［1］宗永輝.高效液相色譜法測定復(fù)方氧化鋅涂劑中樟腦和苯酚含量［J］.中國藥業(yè)，2009，18(1):16.

［2］余小平，舒金富，黃 華.高效液相色譜法同時(shí)測定樟腦苯酚溶液中兩組分的含量［J］.藥物分析雜志，2006，26(8):1161.

［3］楊 娟，黃敬群，李 紅，等.高效液相色譜法測定復(fù)方樟腦搽劑中苯酚的含量［J］.中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2008，28(18):1616.

［4］宋洪杰，陸松偉，朱全剛，等.反相離子對色譜法測定三利巴布膏劑中鹽酸利多卡因的含量［J］.中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志，2008，25(2):137.

［5］李麗萍，畢雪艷，景金柱.HPLC法測定鹽酸利多卡因膠漿(I)的含量［J］.齊魯藥事，2006，25(2):92.