周 玲

烏頭類中藥化學(xué)成分及其生物堿含量測定方法的研究概況

周 玲

烏頭類中藥；生物堿；測定方法；中藥鑒定；綜述

烏頭類中藥材具有悠久的臨床運(yùn)用歷史，包括附子、川烏、草烏等。中醫(yī)認(rèn)為烏頭類藥材有大熱、大毒的藥性。其中附子具有回陽救逆的功效，臨床上多用于治療陽虛陰盛；烏頭具有祛風(fēng)濕止痛的功效，臨床多用于治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎?，F(xiàn)代研究表明烏頭類生物堿既是其有效成分，也是毒性成分[1]。因此不少學(xué)者對烏頭類生物堿的種類和含量測定的方法進(jìn)行了研究。

1 烏頭類中藥化學(xué)成分的研究概況

附子來源于毛茛科烏頭屬植物烏頭 Aconrtum carmichaelii Debx.的側(cè)生子根及加工品[1]，是眾多烏頭類中藥中最常用的一類；川烏為毛茛科植物烏頭Aconrtum carmichaelii Debx.的干燥母根；草烏為毛茛科植物北烏頭Aconitum kusnezoffii Reichb.的干燥塊根[2]。

附子、川烏及草烏中共同的化學(xué)成分有：雙酯型生物堿，如烏頭堿（Aconitine）、新烏頭堿（Mesaconitine）、次烏頭堿(Hypaconitine)；胺醇類生物堿，如尼奧靈(新烏寧堿，Neoline)、塔拉烏頭胺（Talatizamine）；二萜類生物堿，如北烏堿（Beiwutine）、去氧烏頭堿（Deoxyaconitine）。

從毒性角度來看，烏頭類中藥中的主要毒性成分為雙酯型生物堿，單酯型生物堿和胺基醇型生物堿。其中雙酯型生物堿的毒性最大，主要有烏頭堿、新烏頭堿和次烏頭堿三種，屬于難溶于水的脂溶性成分；單酯型生物堿是雙酯型生物堿C8位上的乙?；馐ヒ环肿右宜岷蟮漠a(chǎn)物。屬于親水性成分，毒性較小，為雙酯型生物堿的 1/2 000；胺基醇型生物堿是酯型生物堿 C14位上苯甲酯?；馐ヒ环肿颖郊姿岷蟮漠a(chǎn)物，屬強(qiáng)親水性成分，毒性甚微，僅是雙酯型生物堿的1/2 000～1/4 000。通常認(rèn)為這三類生物堿既是烏頭類中藥的有效成分，也是它們的毒性成分[9]。

2 烏頭總生物堿含量測定方法的研究概況

2.1 酸堿中和法 原理：利用生物堿的堿性，用酸直接滴定或加入定量酸液及指示劑，用氫氧化鈉液回滴定，根據(jù)消耗堿液的體積計(jì)算出烏頭類總生物堿的含量。1990年版、1995年版、2000年版、2005年版、2010年版《中國藥典》一部中對制川烏、制草烏中烏頭類總生物堿的含量測定均采用此方法。

方法：取本品中粉10g，精密稱定，加乙醚-三氯甲烷（3:1）的混合液50ml與氨試液4ml，密塞，搖勻，放置過夜，濾過，藥渣加乙醚-三氯甲烷 50ml，連續(xù)振搖1h，濾過，藥渣用乙醚-三氯甲烷洗滌3～4次，每次15ml，濾過，洗液與濾液合并，低溫蒸干。殘?jiān)右掖?50ml使溶解，精密加入硫酸滴定液（0.01mol/L）15ml，水15ml與甲基紅指示液3滴，用氫氧化鈉滴定液（0.02mol/L）滴定至黃色。每 1ml硫酸滴定液（0.01mol/L）相當(dāng)于12.9mg的烏頭堿[1]。

有學(xué)者采用此方法測定了川烏、附子及炮制品中生物堿的含量[9]，還測定了制劑三七傷藥片[10]、小活絡(luò)丸[11]中的總生物堿的含量。此方法的優(yōu)點(diǎn)是簡單易行，不需要很昂貴的儀器設(shè)備，容易普及；缺點(diǎn)是操作方法比較麻煩，如果操作的平行性不好，會(huì)使誤差較大。

2.2 分光光度法

2.2.1 酸性染料比色法 原理：利用生物堿和酸性染料（如溴甲酚氯）反應(yīng)生成的絡(luò)合物在紫外光下有吸收，用烏頭堿的標(biāo)準(zhǔn)液繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線后，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算烏頭類生物堿的含量。利用酸性染料比色法測定生物堿總量時(shí)，要注意符合比爾定律的含量范圍，水相 pH的選擇要與文獻(xiàn)中的一致。

方法：精密量取烏頭堿標(biāo)準(zhǔn)液0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ml，分別置于分液漏斗中，加入三氯甲烷20ml，以第一份為空白對照，然后各加入10mlpH=6.0的溴甲酚綠染料，充分振搖，靜置1h，三氯甲烷層置于25ml量瓶中并用三氯甲烷稀釋至刻度。于415nm波長處，測定吸光度。以生物堿量與吸光度為橫縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再用同樣方法在同樣條件下測定樣品溶液的吸光度，最后根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算出烏頭堿的含量[12]。

烏蘭娜日等選擇溴甲酚綠為酸性染料，以烏頭堿（10mg/100ml，氯仿）作對照，于波長（415±1）nm 處測定附子理中丸中烏頭總堿含量。平均回收率為99.5%，RSD為1.43%。王海孫等[13]選擇文獻(xiàn)的條件測定風(fēng)濕骨痛酒中烏頭總生物堿含量,平均回收率為 98.58%，RSD為1.83%。此方法的優(yōu)點(diǎn)是靈敏度高、簡便、準(zhǔn)確快速。缺點(diǎn)是干擾因素多，水相 pH值或指示劑配制、處理均影響呈色穩(wěn)定性，顏色穩(wěn)定時(shí)間較短，需用對照品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，且專屬性差。

2.2.2 導(dǎo)數(shù)分光光度法 原理：利用設(shè)定不同的求導(dǎo)階數(shù)以清除干擾組分的吸收，直接進(jìn)行測定生物堿的含量。根據(jù)導(dǎo)數(shù)分光光度法，樣品經(jīng)乙醇提取后，不經(jīng)分離即可直接測定，測定結(jié)果與藥典法比較,無顯著差別。

龍沛霞等[14]將制草烏，制川烏，附子在堿性條件下用乙醇提取生物堿，不經(jīng)分離，直接采用一階導(dǎo)數(shù)紫外分光光度法測定總生物堿的含量，操作簡便。徐思文采用二階導(dǎo)數(shù)光譜法測定三七傷藥片中總生物堿含量，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品溶液在波長（238±2）nm 和（246±2）nm 處有相應(yīng)的吸收谷和吸收峰，而陰性對照光譜呈近平行線，不干擾樣品中烏頭總生物堿的定量分析。所以選擇此兩波長谷峰之間的導(dǎo)數(shù)振幅值作為三七傷藥片中總生物堿的定量依據(jù)。此法的優(yōu)點(diǎn)是靈敏度很高、準(zhǔn)確、簡便，且提取溶劑乙醇比氯仿對人體更安全。缺點(diǎn)是選擇性差，達(dá)不到對雙酯型烏頭堿限量控制的要求。

2.3 薄層掃描法

2.3.1 高效硅膠 G 板-薄層色譜 李煥榮等選擇高效硅膠 G板，以氯仿-醋酸乙酯-氨水（15:20:1）為展開劑展開，噴以碘化鉍鉀顯色后，雙波長鋸齒形反射掃描測定鎮(zhèn)痛寧注射液中烏頭總堿含量，平均回收率為97.85%，RSD為1.98%。

2.3.2 硅膠G板-薄層色譜 王浴銘等選擇硅膠G板，以正己烷（氨水飽和）-乙酸乙酯-95%乙醇（64:36:10）為展開劑展開，碘蒸氣顯色后，雙波長鋸齒形反射掃描測定活血壯筋丹中烏頭總堿含量。平均回收率為95.75%，RSD為0.824%。

薄層掃描法準(zhǔn)確度高，專屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好，適用于不能用酸堿中和法進(jìn)行含量測定的復(fù)方制劑。

2.4 高效液相色譜法（HPLC） 鄒恩濟(jì)等采用反高效液相色譜法，以甲萘基為內(nèi)標(biāo)，分離測定兩種蒙成藥那如-3、嘎日迪-5中草烏的3種劇毒性成分，選擇色譜柱為150mm×416mm id 的不銹鋼柱；流動(dòng)相甲醇-水-氯仿-三乙醇（70:30:20:11），檢測波長230nm。平均回收率：新烏頭堿9817%，RSD=2.1%；烏頭堿93.65%，RSD 為1.1%；次烏頭堿101.7%，RSD = 3.2%。

現(xiàn)行2010年版《中國藥典》中采用的高效液相色譜法可以同時(shí)測定含烏頭堿的復(fù)方制劑中六個(gè)組分，包括單酯型和雙酯型生物堿[2]。

用HPLC 測定中烏頭堿的含量，操作簡便，樣品用量少，雜質(zhì)分離效果好，烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿均達(dá)到了基線分離，回收率、重現(xiàn)性、精密度均很好。

3 總結(jié)

現(xiàn)在測定烏頭總生物堿或者是測定酯型生物堿的含量有許多方法，但要根據(jù)條件進(jìn)行靈活的選擇。酸堿中和法適用于川烏、草烏、附子單味藥材烏頭生物堿含量測定，不適合用于測定含有其他堿性成分的復(fù)方制劑；紫外分光光度法一般只能測定烏頭生物堿總量；薄層掃描法不僅可用于單味藥材川烏、草烏、附子中烏頭堿的含量測定，還廣泛應(yīng)用于含有川烏的復(fù)方中藥制劑中酯型生物堿含量測定；高效液相色譜法可分別測定烏頭堿、新烏頭堿、次烏頭堿的含量，且操作簡便，結(jié)果準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，是目前復(fù)方中藥制劑中烏頭類生物堿含量測定的首選方法。

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10.3969/j.issn.1672-2779.2011.02.171

1672-2779（2011）-02-0223-02

2010-09-19）

四川省樂山市市中區(qū)中醫(yī)醫(yī)院藥劑科（614000）