孫秋君，陳曉曄，朱建良

(南京工業(yè)大學(xué)制藥與生物工程學(xué)院，江蘇南京210009)

蛋白質(zhì)降解及其產(chǎn)物氨基酸檢測的研究進(jìn)展

孫秋君，陳曉曄，朱建良

(南京工業(yè)大學(xué)制藥與生物工程學(xué)院，江蘇南京210009)

綜述了蛋白質(zhì)的降解方法，包括酸水解、堿水解、酶解以及超聲輔助水解，并分析比較了每種方法的優(yōu)缺點(diǎn)。其次從檢測方法的角度綜述了蛋白降解產(chǎn)物-氨基酸的分析檢測方法，包括化學(xué)分析法、電化學(xué)分析法和分光光度法。

蛋白質(zhì)，降解，氨基酸，檢測

氨基酸營養(yǎng)已成為蛋白質(zhì)營養(yǎng)研究的熱點(diǎn)之一，氨基酸作為蛋白質(zhì)消化的主要產(chǎn)物，在動物營養(yǎng)代謝中起重要作用。與蛋白質(zhì)的吸收相比具有吸收速度快、耗能低、不易飽和等特點(diǎn)。從20世紀(jì)初氨基酸工業(yè)化生產(chǎn)以來，氨基酸生產(chǎn)主要有蛋白水解法、發(fā)酵法和有機(jī)合成法，在實(shí)際應(yīng)用中，主要是用蛋白質(zhì)水解法制備氨基酸。因?yàn)榘被崾堑鞍踪|(zhì)的基本結(jié)構(gòu)單位，各種蛋白質(zhì)都含有20余種氨基酸，蛋白質(zhì)由大量氨基酸通過肽鍵連接為大分子的物質(zhì)，它們都帶有不同的側(cè)鏈。水解的目的就是使蛋白質(zhì)中肽鏈斷裂，生成自由的氨基酸。因此水解法是最簡單最容易的制備方法［1］。

1 蛋白質(zhì)的降解方法

1.1 酸水解

蛋白質(zhì)的酸水解是在高溫條件下用無機(jī)酸催化進(jìn)行，常用的無機(jī)酸是鹽酸、硫酸和甲基磺酸等［2］，其中，鹽酸是最通用的水解劑，它既可以應(yīng)用于液相的水解模式，也可以應(yīng)用于氣相的水解模式，水解過后容易蒸發(fā)除去，水解產(chǎn)物可以濃縮，并且只要很少的緩沖溶液就可以溶解。用鹽酸水解時通常濃度為6mol/L［1］。嚴(yán)群芳［3］等人利用HCl水解大豆蛋白獲得游離氨基酸，通過實(shí)驗(yàn)確定了酸濃度為6mol/L，水解時間14h，液固比為4∶1的最佳水解條件，使得氨基酸的產(chǎn)量達(dá)到55.74%。何強(qiáng)飛［4］等人采用25% HCl在溫度為90℃的條件下，水解大米飼料蛋白20h，其水解率可達(dá)到52.85%。路亮［5］等人采用8N HCl對制革下腳料進(jìn)行降解以獲得混合氨基酸。其中，原料重∶酸用量=1∶1.2w/v，在105～110℃下水解11h，經(jīng)脫酸、脫色、中和、濃縮、結(jié)晶得到氨基酸總量為35.54%。得到人體必需氨基酸為11.58%的混合氨基酸?？邹保?］、王亞林［7］分別用鹽酸對大豆餅粕和毛發(fā)進(jìn)行降解，得到了相應(yīng)的氨基酸。

另外，硫酸也是常用的酸水解劑。徐彭［8］等人采用硫酸水解法水解蠶蛹蛋白，得到氨基酸態(tài)氮分別為9.05%和13.45%的食用復(fù)合氨基酸粉和精制復(fù)合氨基酸粉。張寒?。?］等人以雙低油菜籽脫脂粕為原料，采用硫酸水解法制備天然復(fù)合氨基酸粉，確定最佳工藝參數(shù)為水解溫度 130℃，時間2h，酸濃度6mol/L，液固比3∶1，此條件下產(chǎn)品得率為38.70%。王家宏［10］等人采用5mol/L的硫酸水解羽毛蛋白，工藝條件為水解時間8h，水解溫度120℃，無機(jī)鹽催化劑用量40g/kg，最終得到的水解液中含有17種氨基酸。

酸水解法水解迅速而徹底，無消旋作用。但是會產(chǎn)生大量的廢酸污染環(huán)境。而酸劑的濃度、用量、水解時間、溫度等都對蛋白質(zhì)的水解有一定的影響。

1.2 堿水解

堿水解法通常以氫氧化鈉作為水解劑。趙芯［11］等人采用氫氧化鈉水解微生物蛋白得到氨基酸，在最佳水解條件下，即水解溫度90℃、反應(yīng)時間2h、氫氧化鈉溶液濃度30%、液固比50∶1的條件下，氨基酸產(chǎn)生量可達(dá)39.9mg/g干菌體。韓揚(yáng)［12］等人以燕麥麩皮為原料，通過堿提工藝提取燕麥麩皮蛋白。在料液比為1∶20，反應(yīng)時間為2h，溶液含堿量為1.0mol/L的條件下，蛋白質(zhì)的水解度達(dá)到30%左右。李遠(yuǎn)坤［13］以大麥麩皮作為原料，首先采用堿提酸沉法提取大麥麩皮中10%的蛋白質(zhì)，隨后利用堿解法對蛋白質(zhì)進(jìn)行降解，蛋白的水解度在30%左右。水解產(chǎn)物主要是對應(yīng)分子量分別在31500u和100～200u左右的小分子物質(zhì)。尹國強(qiáng)［14］等人先采用亞硫酸氫鈉溶液對羽毛進(jìn)行預(yù)處理，以縮短水解時間，隨后用0.4%的氫氧化鈉溶液水解已處理的羽毛粉，液固比為15∶1，反應(yīng)溫度為90℃，反應(yīng)時間2h，在此條件下制得羽毛蛋白的降解率為65.7%。

堿水解法水解迅速徹底，蛋白質(zhì)分子中的大部分氨基酸都要遭受破壞，但是色氨酸不被破壞，并且產(chǎn)生消旋作用，對設(shè)備的腐蝕性大，所以工業(yè)上多不采用此方法。

1.3 酶解法

蛋白質(zhì)原料在一定的pH和溫度條件下經(jīng)蛋白水解酶作用分解成氨基酸和小肽的過程稱為酶水解法。在用酶法對蛋白質(zhì)水解時所用的酶為蛋白酶，從來源上可以分為動物蛋白酶、植物蛋白酶和微生物蛋白酶。

動物蛋白酶中，胰蛋白酶和胃蛋白酶的酶解效果較好，但價格有些高。徐娟［15］等人選用胃蛋白酶對綠豆分離蛋白進(jìn)行酶法水解，在沸水浴中90℃處理20min，在37℃、pH1.8、底物質(zhì)量分?jǐn)?shù)7%、酶量6000U/g條件下酶解180min，水解度為19.86%。盛家榮［16］等人利用胃蛋白酶水解板藍(lán)根多糖中的蛋白質(zhì)，通過考察pH，胃蛋白酶用量，反應(yīng)溫度和反應(yīng)時間4個因素確定去除蛋白的最佳工藝，使得水解液中多糖的含量達(dá)到87.7%。姜莉［17］等人利用胰蛋白酶水解核桃蛋白，在反應(yīng)時間4.0h、底物質(zhì)量濃度27g/L、溫度53.4℃、pH8.0、加酶量(E/S)8.3g/kg的條件下，水解度可達(dá)14.497%。

在植物蛋白酶中，以木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶應(yīng)用較多，但反應(yīng)周期較長，水解效率低，易受外界影響。陳彥平［18］、左繼紅［19］、王辰［20］等人以木瓜蛋白酶分別對玉米胚芽蛋白、大豆蛋白和螺旋藻蛋白進(jìn)行水解，都得到了較高的水解率。

微生物蛋白酶活性較高，用于酶解法的主要有中性蛋白酶和堿性蛋白酶。劉新華［21］等人利用堿性蛋白酶水解玉米蛋白，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在pH10.5、酶解溫度60℃、酶與底物比5%、底物質(zhì)量分?jǐn)?shù)8%的條件下酶解4h，可使水解度和氮溶解指數(shù)分別達(dá)到49.7%和51.2%。車有榮［22］利用中性蛋白酶對花生粕蛋白進(jìn)行降解，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:花生粕水解產(chǎn)物的氨基酸組成完全，且人體所必需的8種氨基酸含量較高。

靳挺［23］采用復(fù)合酶(Alcalase堿性內(nèi)切蛋白酶和Flavourzyme風(fēng)味蛋白酶)水解魷魚蛋白，結(jié)果表明，F(xiàn)lavourzyme能有效提高魷魚蛋白的水解度，在優(yōu)化的水解條件下，魷魚蛋白水解度達(dá)20.11%，水解產(chǎn)物的平均分子量為1180u，約由9.2個氨基酸殘基組成。水解產(chǎn)物中必需氨基酸含量占氨基酸總量的38.4%，天冬氨酸和谷氨酸等鮮味氨基酸占氨基酸總量的26.3%。

酶水解法的優(yōu)點(diǎn)為反應(yīng)條件溫和，無消旋作用。但是，酶解法水解不徹底，產(chǎn)物中除氨基酸外，含有較多的肽類。

1.4 微波輔助水解法

微波是一種高頻電磁波，微波能夠透射到生物組織內(nèi)部使偶極分子和蛋白質(zhì)的極性側(cè)鏈以極高的頻率振蕩，引起分子的電磁振蕩等作用，增加分子的運(yùn)動，導(dǎo)致熱量的產(chǎn)生。微波的能量可以大大縮短完全水解的時間。

微波輔助水解法在酸解、酶水解方面都有著一定的應(yīng)用［24］。Zhong Hong-ying等［25］用6mol/L HCl處理細(xì)胞色素C等蛋白質(zhì)，在微波輻射下水解30～90s，得到專一的多肽。Lin Hua等［26］用2%甲酸水解肌球素將牛血清白蛋白降解成多肽，而且不需要凈化就可以進(jìn)行質(zhì)譜檢測。

蛋白質(zhì)酶促水解反應(yīng)是制備生物活性多肽的一種有效方法。微波輻射水解的效率都高于常規(guī)酶水解，這是因?yàn)槌Ｒ?guī)方法所需時間長、升溫慢，這些都會導(dǎo)致酶失活;而微波加熱可以在短時間內(nèi)達(dá)到很高溫度，在酶徹底失活之前就完成水解反應(yīng)。Juan Hsueh-fen等［27］對蛋白質(zhì)凝膠水解進(jìn)行研究，經(jīng)凝膠處理的五種蛋白質(zhì)分別在常溫下反應(yīng)16h及195W微波輻射5min，隨后進(jìn)行二維電泳及質(zhì)譜分析，結(jié)果表明微波方法優(yōu)于常規(guī)方法。Vesper H W等［28］在不同溫度、緩沖溶液濃度和水解時間條件下，對胰蛋白酶及蛋白內(nèi)切酶催化水解進(jìn)行了全面的研究，胰島素在50℃，20min的水解效率比常規(guī)方法高20%，蛋白內(nèi)切酶穩(wěn)定性隨著溫度提高而下降，導(dǎo)致其水解效率降低。

2 氨基酸的檢測方法

蛋白質(zhì)經(jīng)過降解得到氨基酸，其種類以及含量便成為人們研究和關(guān)注的熱點(diǎn)。

1985年Spackman［29］等首次報道了氨基酸自動分析方法，經(jīng)過50多年的發(fā)展，氨基酸分析方法得到不斷的改進(jìn)和完善，由最初的陽離子交換色譜分離-柱后茚三酮衍生化方法發(fā)展為多種分析方法并存，互相取長補(bǔ)短［30］。氨基酸分析，按分離方法可分為紙色譜法、離子交換色譜法、反相高效液相色譜法、毛細(xì)管電泳法、薄層色譜法、氣相色譜法等;按檢測方法分可分為化學(xué)分析法、電化學(xué)方法(包括電導(dǎo)檢測、安培檢測)、分光光度法(包括可見光分光光度法、紫外光分光光度法和熒光分光光度法)等;按衍生反應(yīng)的先后可分為柱前衍生和柱后衍生法。氨基酸是一類化學(xué)性質(zhì)相似的生物活性物質(zhì)，在分析過程中，檢測方法的靈敏度對分析的準(zhǔn)確性起非常重要的作用［31］。

2.1 化學(xué)分析法

2.1.1 甲醛滴定法 甲醛滴定法［32］用于氨基氮的測定，可以測出樣品中總氨基酸的含量，但是該法準(zhǔn)度差，終點(diǎn)較難掌握。徐勤［33］采用甲醛法測定大豆蛋白的水解度，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示甲醛法測得的結(jié)果與文獻(xiàn)報道基本一致。姚玉靜［34］對比了甲醛滴定法和pH-stat法對大豆蛋白水解度測定的差異。結(jié)果表明，采用內(nèi)切蛋白酶對蛋白進(jìn)行水解時，pH-stat法和甲醛測定結(jié)果較為接近;而采用富含外肽酶的蛋白酶對蛋白質(zhì)進(jìn)行水解時，采用pH-stat法測定水解度會導(dǎo)致水解度偏低。

2.1.2 凱氏定氮法 凱氏定氮法［35］是用于測定樣品中總氮的含量，然后根據(jù)蛋白質(zhì)和氨基酸中的氮含量，從而得知含氮的氨基酸、蛋白質(zhì)的總量，該方法準(zhǔn)確度高，但是操作步驟復(fù)雜、試劑耗量多、測定周期長。

2.2 電化學(xué)分析法

采用適用于不同氨基酸的選擇電極，可對各種氨基酸進(jìn)行測定［36］，電導(dǎo)檢測和安培檢測的方法，也被人們廣泛應(yīng)用于氨基酸的分析［37-38］。電化學(xué)分析的最大優(yōu)點(diǎn)在于無需衍生反應(yīng)，操作簡便，它與各種現(xiàn)代化的分離方法相結(jié)合可以大大簡化操作過程，節(jié)約分析時間。

2.3 分光光度法

大多數(shù)氨基酸對紫外和可見光的吸收很弱或無吸收，所以通常利用氨基酸分子中的氨基、羥基或其它活性基團(tuán)與衍生化試劑反應(yīng)，生成具有可見光、紫外生色團(tuán)或能產(chǎn)生熒光的衍生反應(yīng)產(chǎn)物，然后用可見光、紫外或熒光檢測器進(jìn)行檢測［24］。

2.3.1 可見光檢測 通常能使氨基酸在可見光區(qū)有吸收的衍生試劑有茚三酮、磺酰氯二甲胺偶氮苯(DABSYL-Cl)等。氨基酸與茚三酮經(jīng)加熱反應(yīng)后，一級胺與之生成藍(lán)紫色化合物，二級胺與之生成黃色化合物。兩種衍生物檢測波長分別為570nm和436nm［38］。邵金良［39］利用茚三酮法檢測茶葉中游離氨基酸的總量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，pH8.0、沸水浴加熱15min、冷卻10min后在最大吸收波長570nm處測定，該方法的變異系數(shù)小于1.69%，加標(biāo)平均回收率為96.33%。周國蘭［40］以2%的茚三酮溶液作為顯色劑，pH8.0的磷酸鹽作為緩沖溶液，在570nm處測得茶葉中游離氨基酸的含量。茚三酮衍生顯色反應(yīng)的靈敏度可達(dá)2×10-10～5×10-10mol/L，衍生物穩(wěn)定性較好。其缺點(diǎn)是衍生反應(yīng)條件較高，需附加溫衍生裝置，體系平衡時間長［41］。

2.3.2 紫外光檢測 紫外光檢測，是通過氨基酸與衍生試劑發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，生成的氨基酸衍生物在紫外光光譜范圍內(nèi)有吸光度值。通常使用的衍生試劑包括鄰苯二甲醛(OPA)［26］、異硫氰酸苯酯(PITC)、6-氨基喹啉基-N-羥基琥珀酰亞胺氨基甲酸酯［24］。

2.3.2.1 鄰苯二甲醛(OPA)法 OPA作為衍生試劑，雖然衍生反應(yīng)非?？焖?，但有較強(qiáng)的選擇性，只能用于一級氨基酸的衍生，且衍生物的穩(wěn)定性較差。劉春蘭［42］利用鄰苯二甲醛(OPA)-柱前衍生反相高效液相色譜法測定了海洋膠體重的氨基酸組成和含量，檢出限為2×10-3～9×10-3μmol/L，相對偏差為3.4%～10.7%。該海洋膠體中含有16種氨基酸，總量為150.83μmol/L。肖禮娥［43］同樣利用OPA柱前衍生法測定醋粉中氨基酸的含量，結(jié)果表明各種氨基酸能達(dá)到基線分離。

2.3.2.2 異硫氰酸苯酯(PITC)法 異硫氰酸苯酯(PITC)和氨基酸的反應(yīng)產(chǎn)物苯基硫酸鹽-氨基酸具有穩(wěn)定性，且PITC與氨基酸和亞氨基酸均能反應(yīng)，衍生物穩(wěn)定性好。呂艷［44］采用異硫氰酸苯酯柱前衍生法分析多肽中18種氨基酸組成。檢測乳品中谷氨酰胺含量時，韓立強(qiáng)［45］通過谷氨酰胺與雙(1，1-三氟乙酸基)碘苯(BTI)反應(yīng)后酸水解，再用異硫氰酸苯酯衍生后，用HPLC檢測。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，此方法能夠?qū)θ槠分械腉ln進(jìn)行很好的定量。

2.3.3 熒光檢測 熒光檢測法，是通過使氨基酸與衍生試劑發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，生成的氨基酸衍生物能夠用熒光分光光度計分析，從而得知被測氨基酸的含量。通常，衍生試劑包括鄰苯二甲醛(OPA)、丹酰氯(DANSYL-Cl)、氯甲酸芴甲酯(FMOC-Cl)［46］。

2.3.3.1 鄰苯二甲醛(OPA)OPA衍生法可以快速與氨基酸反應(yīng)生成發(fā)熒光團(tuán)物質(zhì)，并在很短的時間內(nèi)進(jìn)入靈敏度很高的熒光檢測器檢測。鄧櫻花［47］利用OPA衍生法檢測了七種神經(jīng)遞質(zhì)氨基酸，待測氨基酸與衍生劑反應(yīng)1min便可進(jìn)行分析檢測。桂莉［48］也采用 OPA法測定微透析液中天門冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、甘氨酸(Gly)、γ-氨基丁酸(GABA)的含量。結(jié)果興奮性Asp、Glu及抑制性Gly、GABA在18min內(nèi)完全分離，在0.625～5μmol/L濃度范圍內(nèi)與峰面積有良好的線性關(guān)系。

2.3.3.2 氯甲酸芴甲酯(FMOC-Cl) 在pH為7.7時反應(yīng)生成穩(wěn)定衍生物，一級、二級氨基酸全可檢測，熒光檢測靈敏度可達(dá)1×10-15mol水平。但是FMOC -Cl與His形成單、雙衍生物的比例不穩(wěn)定，影響定量;FMOC-Cl及其水解產(chǎn)物FMOC-OH有熒光干擾［41］。

3 結(jié)語

蛋白質(zhì)水解是制備氨基酸最簡單最容易的方法，不同的水解方法對于氨基酸含量的獲得有不同的影響，酸水解和堿水解蛋白質(zhì)能夠快速獲得產(chǎn)物，但是對氨基酸的種類和環(huán)境都有一定影響。酶水解蛋白質(zhì)具有安全、高效的優(yōu)點(diǎn)，但是其成本較高。

上述各種氨基酸的分析方法各具特點(diǎn)，采用何種方法，需根據(jù)實(shí)驗(yàn)條件、分析速度、檢測靈敏度、干擾因素、樣品的種類等各項指標(biāo)與實(shí)際要求做出選擇。

［1］莫重文.蛋白質(zhì)化學(xué)與工藝學(xué)［M］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2007:20-21.

［2］趙芯.利用糖蜜酒精廢液生產(chǎn)氨基酸的生物技術(shù)研究［D］.桂林:桂林工學(xué)院，2006:13-14.

［3］嚴(yán)群芳，王恬，張莉莉.酸水解大豆蛋白制取復(fù)合氨基酸水解液的研究［J］.飼料工業(yè)，2006，27(11):18-19.

［4］何強(qiáng)飛，于秋生，郭貫新.酸法水解大米飼料蛋白的工藝研究［J］.食品工業(yè)科技，2008，29(7):194-196.

［5］路亮，張學(xué)俊，熊靜.酸法水解制革下腳料提取混合氨基酸的工藝探討［J］.中國皮革，2000，29(23):29-30.

［6］孔薇，朱衛(wèi)民，王新民，等.鹽酸水解大豆餅粕制備復(fù)合氨基酸工藝條件的正交實(shí)驗(yàn)［J］.河南醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2000，35 (1):64-66.

［7］王亞林.用鹽酸常壓水解毛發(fā)制取胱氨酸的工藝改進(jìn)及探討［J］.江蘇化工，1992(1):11-15.

［8］徐彭，劉建華，張桂英，等.酸水解蠶蛹制備復(fù)合氨基酸的研究［J］.氨基酸和生物資源，1995，17(4):9-11.

［9］張寒俊，劉大川.快速水解法制備菜籽復(fù)合氨基酸粉的工藝探討［J］.糧食與飼料工業(yè)，2005(8):20-21.

［10］王家宏，馮貴穎，呼世斌，等.利用羽毛蛋白制備復(fù)合氨基酸的工藝研究［J］.西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報，2003，31(S1): 106-108.

［11］趙芯，朱義年，廖雷，等.堿法水解微生物蛋白的工藝條件研究［J］.甘蔗糖業(yè)，2007(2):48-51.

［12］韓揚(yáng)，王昌濤，董銀卯，等.堿提法提取燕麥麩皮蛋白工藝條件的優(yōu)化［J］.北京工商大學(xué)學(xué)報，2008，26(4):9-12.

［13］李遠(yuǎn)坤.大麥麩皮蛋白的提取及堿水解條件的研究［J］.生命科學(xué)儀器，2008，6(11):14-21.

［14］尹國強(qiáng)，崔英德，黎新明，等.堿法水解羽毛蛋白的工藝條件研究［J］.食品科學(xué)，2005，26(9):347-349.

［15］徐娟，魏艷娟，屠春燕.胃蛋白酶水解綠豆分離蛋白的工藝［J］.生物加工過程，2008，6(4):31-34.

［16］盛家榮，孫小兵，卜鈴東，等.酶法除南板藍(lán)根粗多糖中蛋白質(zhì)的最佳工藝研究［J］.中藥材，2009，32(4):615-617.

［17］姜莉，陳金海，徐懷德，等.胰蛋白酶對核桃蛋白水解條件的優(yōu)化研究［J］.西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報，2008，36(1): 201-207.

［18］陳彥平，劉振春.木瓜蛋白酶水解玉米胚芽蛋白的研究［J］.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2008，30(5):750-752.

［19］左繼紅，崔政偉，鄔敏辰.木瓜蛋白酶水解大豆蛋白工藝條件的優(yōu)化［J］.農(nóng)產(chǎn)品加工學(xué)刊，2008(4):67-69.

［20］王辰，劉芳.酶法水解螺旋藻蛋白研究［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008，36(31):13485-13487.

［21］劉新華，趙晨霞，李志龍，等.堿性蛋白酶酶解玉米蛋白工藝條件的優(yōu)化［J］.糧食加工，2009，34(1):54-56.

［22］車有榮.酶法技術(shù)在花生粕蛋白水解中的應(yīng)用［J］.中國釀造，2008(18):60-63.

［23］靳挺，高一勇，武玉學(xué)，等.復(fù)合酶法水解魷魚蛋白及水解產(chǎn)物的研究［J］.食品科技，2008(9):79-82.

［24］黃校亮，劉巖，金麗，等.微波輔助蛋白質(zhì)水解研究進(jìn)展［J］.遼寧石油化工大學(xué)學(xué)報，2006，26(4):53-54.

［25］Zhong Hong-ying.Protein sequencing by mass analysis of polypeptide ladders after controlled protein hydrolysis［J］.Nature biotechnology，2004，22:10-15.

［26］Lin Hua.Microwave-assisted specific chemical digestion for rapid protein identification［J］.Proteomics，2006(6):586-591.

［27］Juan Hsueh-fen.A new application of microwave technology to proteomics［J］.Proteomics，2005(5):840-84.

［28］Vesper H W.Assessment of microwave-assisted enzymatic digestion by measuring glycated hemoglobin Alby mass spectrometry［J］.Mass spectrom，2005(19):2865-2870.

［29］Spackman D H，Stein W H，Moore S.Chromatography of amino acids on sulfonated polystyrene resins［J］.Anal Chem，1958，30:1190.

［30］丁永勝，牟世芬.氨基酸的分析方法及其應(yīng)用進(jìn)展［J］.色譜，2004，22(3):210-215.

［31］戴紅，張宗才，張新申，等.氨基酸分析的檢測方法評述［J］.皮革科學(xué)與工程，2004，14(3):39-43.

［32］周駿山.實(shí)用氨基酸手冊［M］.無錫市氨基酸研究所科技情報室，1989:264.

［33］徐勤，葛向陽，劉建峰.甲醛法測大豆蛋白水解度的改進(jìn)［J］.飼料工業(yè)，2008，29(5):46-47.

［34］姚玉靜，崔春，邱禮平，等.pH-stat法和甲醛滴定法測定大豆蛋白水解度準(zhǔn)確性比較［J］.食品工業(yè)科技，2008(9): 268-270.

［35］熊輝，李向軍，袁倬斌.高效毛細(xì)管電泳電導(dǎo)檢測器的研制［J］.分析科學(xué)學(xué)報，2001，17(4):324-326.

［36］楊曉云，徐漢虹，王文世，等.色氨酸，半胱氨酸和酪氨酸的高效毛細(xì)管電泳分析［J］.分析測試學(xué)報，2001，20(3): 15-18.

［37］王靜萍.大口徑毛細(xì)氣相色譜法測定食用菌中的氨基酸［J］.山西職工醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2001，11(2):4-6.

［38］劉惠文.柱前和柱后衍生高效液相色譜分析氨基酸方法進(jìn)展與評述［J］.氨基酸和生物資源，1995，17(2):77-82.

［39］邵金良，黎其萬，董寶生，等.茚三酮比色法測定茶葉中游離氨基酸總量［J］.中國食品添加劑，2008(2):162-165.

［40］周國蘭，何萍，鄭文莉.茚三酮比色法測定茶葉中游離氨基酸總量方法存在問題的探討［J］.化學(xué)分析計量，2009，18 (5):79-81.

［41］Roth M.Analysis ofprotein reversed phased luquid chromatography［J］.Analytical Chemistry，1971，43:880.

［42］劉春蘭，鄭愛榕，林祥.鄰苯二甲醛柱前衍生法測定海洋膠體中的水解氨基酸［J］.廈門大學(xué)學(xué)報，2006，45(2): 248-252.

［43］肖禮娥，劉世琪，蔣燕霞，等.高效液相色譜柱前衍生法測定醋粉中氨基酸的含量［J］.現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2009，25(2): 304-305.

［44］呂艷，馮鳳琴.反相高效液相色譜定量分析多肽中的氨基酸組成［J］.浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2006(2):211-213.

［45］韓立強(qiáng)，郭豫杰，李衛(wèi)華，等.高效液相色譜法檢測乳品中谷氨酰胺的研究［J］.乳業(yè)科學(xué)與技術(shù)，2009(6):263-264.［46］蔣新宇，周青山.氨基酸的柱前衍生高效液相色譜分析評述［J］.湖南化工，1999，29(2):9-11.

［47］鄧櫻花，王紅，張華山.高效液相色譜和毛細(xì)管電泳分離熒光檢測小分子氨基生物物質(zhì)的進(jìn)展［J］.分析科學(xué)學(xué)報，2006，26(1):104-107.

［48］桂莉，田洪，鄭健，等.高效液相色譜熒光法同時測定小鼠腦組織中4種氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)［J］.第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2009，31(8):675-678.

Research of protein degradation and amino acid detection

SUN Qiu-jun，CHEN Xiao-ye，ZHU Jian-liang
(College of Life Science and Pharmacy，Nanjing University of Technology，Nanjing 210009，China)

Methods of protein degradation were summaried，including acid hydrolysis，alkaline hydrolysis，enzymatic and ultrasound-assisted hydrolysis，and comparing the advantages and disadvantages of each method.Then methods of amino acid detection were summaried from the angle of detection，including chemical analysis， electrochemical analysis and spectrophotometry.

protein;degradation;amino acid;detection

TS201.2+4

A

1002-0306(2011)11-0525-04

2010-10-13

孫秋君(1985-)，女，碩士研究生，從事可再生能源利用的研究。