馮定遠(yuǎn)

在動(dòng)物飼糧中添加植酸酶可減少環(huán)境污染，降低飼養(yǎng)成本，促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育。隨著生物技術(shù)的發(fā)展，商業(yè)植酸酶制劑逐漸得到了廣大用戶(hù)的認(rèn)可。然而，由于現(xiàn)代飼料加工過(guò)程中工藝環(huán)節(jié)的復(fù)雜性，植酸酶制劑的應(yīng)用效果與酶制劑本身的抗逆性密切相關(guān)。不同來(lái)源植酸酶的抗逆性可能存在較大差異。在生產(chǎn)實(shí)際中應(yīng)選擇耐熱性好、最適pH值范圍廣、能被胃腸道消化酶作用的植酸酶制劑，同時(shí)還應(yīng)注意礦物元素對(duì)其酶活的影響。

1 植酸酶的耐熱性

飼料加工過(guò)程中有一個(gè)高溫調(diào)質(zhì)過(guò)程，溫度一般在75～80℃，有時(shí)溫度高達(dá)85～90℃，在膨化飼料制作過(guò)程中甚至達(dá)到120℃或者更高。由于酶制劑本質(zhì)大多為蛋白質(zhì)，而蛋白質(zhì)易受溫度的影響使分子內(nèi)的振動(dòng)增強(qiáng)，從而破壞維持空間構(gòu)象的次級(jí)鍵，有時(shí)還會(huì)使某些蛋白質(zhì)中的二硫鍵斷裂并發(fā)生二硫鍵交換反應(yīng)，從而產(chǎn)生熱變性；而且隨著溫度的升高，發(fā)生熱變性的植酸酶蛋白逐漸增多，植酸酶的活性也隨著迅速下降（汪玉松等，2005）。我們一般認(rèn)為，酶制劑在制?；蚺蚧瘻囟认峦ǔ０l(fā)生的是不可逆活性損失。然而，Pasamontes等（1997）認(rèn)為，植酸酶對(duì)溫度的耐受性可能與其發(fā)生熱變性后的構(gòu)象恢復(fù)有關(guān)，高溫調(diào)質(zhì)時(shí)植酸酶的二級(jí)構(gòu)象發(fā)生改變，冷卻后這種改變的二級(jí)構(gòu)象可以部分回復(fù)到適宜活性的構(gòu)象，從而保持一定的酶活性，這也是目前有些耐高溫植酸酶在高溫處理之后仍然有較高的活性殘留的原因之一。

溫度對(duì)酶制劑影響的研究報(bào)道較多（李衛(wèi)芬等，2001a；馬合勤，2002；于旭華，2004；楊彬，2004；鄭濤，2005；陳惠等，2005；左建軍等，2006；冒高偉，2006；李健等，2006；王楓等，2007；王嚴(yán)等，2007），其研究結(jié)果都表明溫度會(huì)對(duì)外源酶制劑產(chǎn)生影響，經(jīng)高溫處理后外源酶的活性會(huì)受到不同程度的損失。Markus Wyss等（1998）報(bào)道，煙曲霉和黑曲霉植酸酶在50～70℃時(shí)就會(huì)發(fā)生熱變性，pH值2.5的酸性黑曲霉植酸酶在80℃以上高溫時(shí)會(huì)產(chǎn)生不可逆的活性損失作用。尹清強(qiáng)等（2005）研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)60℃調(diào)質(zhì)制粒后與未經(jīng)調(diào)質(zhì)的粉料相比只有48%～58%的酶活殘留，而加熱到80℃時(shí)僅有2%～15%的酶活存留，隨著制粒溫度的升高（60～80℃），植酸酶的酶活力將逐漸下降（P＜0.01）。趙春等（2007）研究結(jié)果表明，添加有植酸酶并經(jīng)75℃制粒后飼糧的飼喂效果要比經(jīng)80、85℃制粒后的飼料飼喂效果好（P＜0.05）。本課題組研究也發(fā)現(xiàn)，經(jīng)高溫調(diào)質(zhì)后植酸酶活性顯著下降，調(diào)質(zhì)溫度為75、85和95℃時(shí)飼糧中耐熱植酸酶活性下降幅度分別為10.75%、25.65%和30.53%（陳旭，2008）。

生產(chǎn)中為了獲得較高的酶活，可選擇增加酶添加量及添加耐溫物質(zhì)（脂肪等）以避免因酶高溫失活而影響動(dòng)物生產(chǎn)。此外，還有兩種解決植酸酶熱變性的常用方法：第一種辦法是采用后噴涂技術(shù)添加植酸酶，也就是于飼料原料經(jīng)調(diào)質(zhì)制粒冷卻后，將液態(tài)的植酸酶制劑均勻噴灑到顆粒飼料表面；后噴涂法避開(kāi)了高溫調(diào)質(zhì)對(duì)植酸酶的活性損傷作用，但是它需要有專(zhuān)門(mén)的后噴涂設(shè)備。另外一種主要的解決辦法是提高植酸酶的耐熱性能。付石軍等（2007）綜述了改善植酸酶耐熱性的方法，指出可以采用自然選擇法、蛋白質(zhì)工程法、化學(xué)修飾法以及包括添加酶穩(wěn)定劑和制備包被型顆粒在內(nèi)的生產(chǎn)工藝改善這四種主要方法來(lái)提高植酸酶的熱穩(wěn)定性。本課題組把從無(wú)花果曲霉中提取的能夠耐受高溫的植酸酶蛋白基因?qū)氘叧嘟湍钢?，通過(guò)畢赤酵母的表達(dá)，并采用液態(tài)發(fā)酵工藝生產(chǎn)而獲得耐熱植酸酶。試驗(yàn)結(jié)果顯示，在經(jīng)75、85、95℃調(diào)質(zhì)后這種耐熱植酸酶的活性有明顯下降（P＜0.01），但經(jīng)各溫度調(diào)質(zhì)后飼料中耐熱植酸酶仍能分別保持89.25%、74.35%、69.47%的相對(duì)酶活性（陳旭，2008）。王國(guó)坤等（2006）和曲麗君（2007）對(duì)泡盛曲霉植酸酶進(jìn)行了研究；崔富昌（2006）對(duì)米曲霉植酸酶進(jìn)行了研究；陳艷（2004）也對(duì)煙曲霉植酸酶進(jìn)行了研究，他們?cè)囼?yàn)中所選用植酸酶經(jīng)90℃處理后僅有40%左右殘存酶活性。相比之下，本課題組所采用的耐熱植酸酶表現(xiàn)出了較好的耐熱性能，即使經(jīng)95℃處理后仍能保持69%以上的酶活性，在普通制粒過(guò)程中能保持較高的酶活力，但為達(dá)到最佳添加效果則還需考慮其調(diào)質(zhì)時(shí)的損失。在較高制粒溫度或膨化溫度條件下需要考慮適量添加耐溫物質(zhì)以進(jìn)一步提高其耐熱性。

能在現(xiàn)代飼料工業(yè)中得到推廣并廣泛利用的植酸酶必須具有良好的熱穩(wěn)定性。但是，與此同時(shí)，我們要注意避免盲目追求耐高溫的特性，因?yàn)轱暳嫌弥菜崦覆粌H要求能在高溫加工之后有較高的活性殘留，更為關(guān)鍵的是其在常溫下（尤其是在動(dòng)物機(jī)體胃腸道內(nèi)溫度下）也需具有較高的酶活性，否則我們?yōu)榱四透邷囟_(kāi)發(fā)耐高溫產(chǎn)品，這就偏離了飼料酶制劑產(chǎn)品設(shè)計(jì)和開(kāi)發(fā)的主線(xiàn)了。這幾年曾經(jīng)出現(xiàn)市場(chǎng)上盲目追求酶制劑的耐高溫性的現(xiàn)象，結(jié)果出現(xiàn)有些植酸酶雖然能耐受高溫的調(diào)質(zhì)作用，但是在常溫下的酶活性卻很低，使其在實(shí)際應(yīng)用中受到一定的限制。陳艷等（2004）研究發(fā)現(xiàn)，煙曲霉植酸酶的最適反應(yīng)溫度為60℃，65℃時(shí)酶活力保持在80%以上，至90℃活力為46.2%，但在37℃活性較低，僅為25.4%。動(dòng)物胃腸道內(nèi)的溫度一般都在37～41℃，這種煙曲霉植酸酶在37℃時(shí)的酶活性只有最適反應(yīng)溫度下的25.4%，因此在實(shí)際生產(chǎn)中會(huì)對(duì)應(yīng)用效果產(chǎn)生一定的影響。

2 pH值對(duì)植酸酶活性的影響

飼料生產(chǎn)中所用的植酸酶主要在動(dòng)物體胃腸道中發(fā)揮作用，在其分解植酸和植酸鹽的過(guò)程中會(huì)受到機(jī)體胃腸道內(nèi)pH值環(huán)境的影響，在不同的pH值環(huán)境中植酸酶表現(xiàn)出不同的酶活性。王楓等（2007）研究發(fā)現(xiàn)，在pH值為4.5～6.0的范圍內(nèi)植酸酶有80%以上的活性，在pH值為5.5處具有最高活性；高于或低于5.5時(shí)都會(huì)影響植酸酶的活性，在pH值3.5、3.0、2.0處的相對(duì)酶活性依次為44.44%、24.05%、3.31%，在pH值6.5、7.0處分別具有49.72%、22.82%的相對(duì)酶活，當(dāng)pH值大于7.5時(shí)，僅剩余不足10%的相對(duì)酶活性。課題組（2008）對(duì)無(wú)花果曲霉源植酸酶的酶學(xué)特性研究表明，體外條件下，將酶促反應(yīng)的pH值分別控制在2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0時(shí)，該植酸酶在pH值2.0～7.0之間pH值5.5處有一個(gè)高峰點(diǎn)，pH值在5.0的相對(duì)酶活性與pH值5.5處相接近，為99.25%；pH值由2.0上升至2.5時(shí)，相對(duì)酶活性迅速由12.25%增至45.72%；在pH值2.5～5.0區(qū)間內(nèi)，相對(duì)酶活性隨pH值的升高呈較緩的升高；在pH值5.5～7.0區(qū)間內(nèi)，相對(duì)酶活性則隨pH值的升高而急劇下降，由pH值5.5時(shí)的相對(duì)酶活100%迅速下降為pH值7.0時(shí)的1.85%；pH值為3.5～6.0時(shí)，耐熱植酸酶的相對(duì)酶活性都保持在70%以上，pH值2.5～6.5時(shí)相對(duì)酶活性都在40%以上，可見(jiàn)此植酸酶可在相對(duì)較寬的pH值范圍內(nèi)發(fā)揮作用；當(dāng)pH值＜2.5和pH值＞6.5時(shí)，耐熱植酸酶的活性都很低，在中性環(huán)境中幾乎沒(méi)有活性（陳旭，2008）。而之前我們對(duì)芽孢桿菌來(lái)源植酸酶的研究時(shí)發(fā)現(xiàn)，在pH值為4.5時(shí)，該植酸酶具有最高酶活，pH值從2.0～3.0，酶活急速升高，從pH值3.0到pH值4.5相對(duì)酶學(xué)活性逐步上升到最高點(diǎn)；當(dāng)pH值在4.5～6.0時(shí)，相對(duì)酶活緩慢降低；當(dāng)pH值在4.0～6.0之間時(shí)，相對(duì)酶活保持在80%以上，其中pH值在4.5～5.5之間時(shí)，相對(duì)酶活都在95%以上（李春文，2007）。

這可能是因?yàn)閜H值影響酶蛋白的空間結(jié)構(gòu)和催化活性，當(dāng)環(huán)境pH值和植酸酶的最適pH值相差過(guò)大時(shí)，維持蛋白結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性的次級(jí)鍵遭到破壞，導(dǎo)致其空間結(jié)構(gòu)改變，甚至是活性中心疏水內(nèi)環(huán)境產(chǎn)生變化，致使酶活性減弱或喪失（劉志偉，2007、2008）。另一方面，從植酸酶催化反應(yīng)機(jī)理上講，環(huán)境pH值直接影響植酸酶活性位點(diǎn)氨基酸殘基側(cè)鏈的解離狀態(tài)（劉志偉等，2008）。而蔡琨等（2004）認(rèn)為，pH值對(duì)酶活性的影響并非是由于酸、堿作用了整個(gè)酶分子從而影響整個(gè)酶分子的解離狀態(tài)，而是由于它們改變了酶的活性中心或與之有關(guān)的基團(tuán)的解離狀態(tài)，從而使酶的活性狀態(tài)發(fā)生改變。

對(duì)于不同來(lái)源的植酸酶，植酸酶的最適pH值和發(fā)揮作用的最適pH值范圍也不同。許堯興等（1999）研究發(fā)現(xiàn)，來(lái)源于無(wú)花果曲霉A.ficuum CN-92的植酸酶最適反應(yīng)pH值為5.5，適宜范圍為5.0～6.6，pH值高于6.0時(shí)酶解速度驟降。陳艷等（2004）報(bào)道，煙曲霉植酸酶的最適反應(yīng)pH值為5.0，適宜范圍為4.0～5.8，pH值高于7.0，酶解速度驟降至相對(duì)酶活不足10%。王國(guó)坤等（2006）和曲麗君（2007）研究結(jié)果也表明，泡盛曲霉植酸酶最高活性分別在pH值為2.5和5.5時(shí)（在pH值2.5時(shí)相對(duì)酶活力為pH值5.5條件下的90%），在pH值2.0～6.0范圍內(nèi)都有較強(qiáng)的活性（＞60%），因此能很好地適應(yīng)畜禽動(dòng)物的消化道環(huán)境（唾液腺pH值5.0；胃pH值2.0～4.0；小腸上部pH值4.0～6.0），降解消化系統(tǒng)中的植酸（鹽）。王嚴(yán)等（2007）報(bào)道，重組植酸酶（黑曲霉WY-6植酸酶）具有很寬的pH值適用范圍，在pH值2.5～6.5范圍內(nèi)均能保持較高的酶活力。從這些研究結(jié)果可看出，植酸酶發(fā)揮作用的最適pH值范圍大多在酸性環(huán)境中有比較寬的pH值范圍內(nèi)。本課題組試驗(yàn)所用耐熱植酸酶在不同pH值環(huán)境中表現(xiàn)出不同的酶活性。

也有許多學(xué)者對(duì)其是否適合在機(jī)體胃腸道內(nèi)發(fā)揮作用及發(fā)揮作用的主要部位進(jìn)行了研究。史凱來(lái)等（2000）報(bào)道，在雞嗉囊pH值（pH值5.0～6.0）環(huán)境下，植酸酶的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)酶活為100%，可以充分發(fā)揮作用。Taewan等（2006）通過(guò)改變黑曲霉植酸酶PhyA上的pH值相關(guān)位點(diǎn)獲得了突變體E228K，試驗(yàn)證明，該突變體表達(dá)所得的植酸酶能適應(yīng)胃中pH值，在機(jī)體胃中發(fā)揮作用，提高了其作為動(dòng)物飼料添加劑的有效性。劉志偉（2007）研究發(fā)現(xiàn)，黑曲霉植酸酶在pH值2.5～7.5（肉仔雞消化道）酶活性可保持在30%以上，其中在pH值4.5（嗉囊）的條件下活性最高，其次是pH值2.5、pH值3.0及pH值3.5（胃部），在pH值6.0和pH值7.0（小腸）最低，據(jù)此判定植酸酶在肉仔雞的消化道內(nèi)的適宜作用位點(diǎn)為嗉囊、十二指腸和空腸前段。程萬(wàn)蓮等（2007）研究結(jié)果與上述報(bào)道有所不同，其研究結(jié)果表明，42日齡和70日齡海蘭褐蛋雞肌胃的pH值在2.5～3.4，超過(guò)了植酸酶的活性范圍，因此在肌胃中沒(méi)能檢測(cè)到植酸酶活性，而小腸食糜的pH值為6.0～7.0，能夠檢測(cè)到植酸酶活性。從上述研究結(jié)果可以看出，一般在pH值4.5～5.5左右植酸酶具有最高的酶活性。

此外，近年來(lái)，為了最大程度利用植酸酶在動(dòng)物體內(nèi)發(fā)揮酶解作用，開(kāi)發(fā)具有較寬的適宜作用pH值范圍的植酸酶是一個(gè)重要的發(fā)展方向。其中，最主要的手段是通過(guò)基因工程技術(shù)、修飾改良等技術(shù)開(kāi)發(fā)在不同pH值條件下具有兩個(gè)或者多個(gè)活性高峰的植酸酶。李健等（2006）選擇的植酸酶適宜pH值范圍內(nèi)卻有兩個(gè)酶活高峰點(diǎn)，即一個(gè)在pH值2.5處，一個(gè)在pH值5.5處。本課題組試驗(yàn)所用耐熱植酸酶適宜作用pH值范圍內(nèi)只有一個(gè)高峰點(diǎn)，最適作用pH值為5.5，隨著pH值由2.0上升至5.5，耐熱植酸酶的酶活性逐漸上升，當(dāng)pH值高于5.5后植酸酶的活性迅速下降（陳旭，2007），這與王強(qiáng)（2006）研究的植酸酶特點(diǎn)相一致。

從pH值對(duì)植酸酶的酶活影響程度考慮，忽略其它因素對(duì)植酸酶活性的影響，可以看出大部分植酸酶能適應(yīng)畜禽胃腸道中pH值，可以較大程度地發(fā)揮水解植酸的作用。

3 礦物元素對(duì)植酸酶活性的影響

植酸酶添加到飼料中，進(jìn)入機(jī)體胃腸道后，動(dòng)物機(jī)體本身和飼料的各種離子都將對(duì)其活性產(chǎn)生影響。很多學(xué)者對(duì)不同來(lái)源的植酸酶進(jìn)行了研究（許堯興等，1999；馬合勤，2002；鄭濤，2005；潘力等，2006；陳旭等，2008），他們的研究結(jié)果均表明，不同濃度、不同種類(lèi)的金屬離子會(huì)對(duì)植酸酶活性產(chǎn)生不同程度的影響。

許堯興等（1999）研究表明，F(xiàn)e2+對(duì)植酸酶有抑制作用，而鄭濤（2005）研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)e2+對(duì)植酸酶有激活作用。Fe2+除在低濃度（5 μmol/l）時(shí)有酶活抑制作用外，在其它濃度中都表現(xiàn)出明顯的酶活促進(jìn)作用（陳旭，2008）。另外，本課題組試驗(yàn)結(jié)果與許堯興等（1999）、王國(guó)坤等（2006）和曲麗君（2007）結(jié)果基本一致，不同的是本課題組試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，中高濃度（10、20、40 μmol/l）Fe2+對(duì)植酸酶活性有促進(jìn)作用。雖然兩試驗(yàn)所采用的植酸酶均來(lái)自于無(wú)花果曲霉屬，但所用Fe2+濃度不同，因此，該試驗(yàn)結(jié)果的差異可能是由于植酸酶結(jié)構(gòu)的差異或金屬離子濃度的不同所引起的。

Liu等（2005）和張政軍等（2006）對(duì)堿式氯化銅（TBCC）和硫酸銅對(duì)植酸酶存留率的影響進(jìn)行了研究，試驗(yàn)結(jié)果表明，在提高植酸酶儲(chǔ)存穩(wěn)定性方面，添加TBCC比添加硫酸銅具有更好的效果。但我們的研究發(fā)現(xiàn)，雖然低濃度Cu2+對(duì)酶活的抑制作用不明顯（P＞0.05），但高濃度（40 μmol/l）時(shí)效果顯著（0.01＜P＜0.05）（陳旭，2008）。在我們的試驗(yàn)中，中高濃度（10、20、40 μmol/l）Zn2+對(duì)耐熱植酸酶酶活均有顯著的抑制作用（陳旭，2008）。這可能是由于Zn2+和Cu2+與酶促反應(yīng)的植酸鈉形成了復(fù)合物，降低了底物的有效濃度，從而使植酸酶活性受抑制。何為等（2004）也認(rèn)為，金屬離子對(duì)酶活性的抑制作用可能是因?yàn)檫@些金屬離子如Cu2+可能影響了酶分子中巰基的還原狀態(tài)，使之氧化，從而改變酶的構(gòu)象，使酶失活。

本課題組研究還發(fā)現(xiàn)，Ca2+、Mn2+和高濃度（40 μmol/l）的Mg2+有顯著的酶活促進(jìn)作用（陳旭，2008）；這可能是因?yàn)镃a2+、Mg2+、Mn2+是該耐熱植酸酶的活性輔助因子，影響酶與底物的結(jié)合及解離狀態(tài)，達(dá)到一定濃度時(shí)有酶活促進(jìn)作用（何為等，2004）。此外，Ca2+、Mg2+、Mn2+、Fe2+、Zn2+、Cu2+6種離子的混合體有顯著抑制植酸酶活性的作用。

本課題組上述試驗(yàn)結(jié)果與陳艷等（2004）和王嚴(yán)（2007）研究結(jié)果基本相同。但與王國(guó)坤等（2006）和曲麗君（2007）的報(bào)道結(jié)果相反，他們的研究結(jié)果表明，Ca2+、Mg2+、Mn2+對(duì)植酸酶活性有輕微的抑制作用，F(xiàn)e2+、Zn2+對(duì)酶促反應(yīng)有顯著的抑制作用。出現(xiàn)這種差異的原因之一是由于所添加金屬離子濃度不同，本課題組試驗(yàn)所用Ca2+濃度為0.5、1.0、2.0、4.0 mmol/l，金屬離子Mg2+、Mn2+、Fe2+、Zn2+都各為5、10、20、40 μmol/l，而王國(guó)坤等（2006）和曲麗君（2007）試驗(yàn)中所用各離子的濃度均為1 mmol/l；另外一個(gè)原因是由于植酸酶來(lái)源不同，本課題組試驗(yàn)所用植酸酶為從無(wú)花果曲霉中提取的耐高溫植酸酶基因于畢赤酵母中表達(dá)而得，而王國(guó)坤等（2006）和曲麗君（2007）試驗(yàn)所用均為源于泡盛曲霉的植酸酶。

從應(yīng)用學(xué)的角度來(lái)看，動(dòng)物飼料和消化代謝過(guò)程中礦物元素都是不可或缺的，這是酶制劑應(yīng)用中潛在的問(wèn)題。在實(shí)際生產(chǎn)中，應(yīng)選擇礦物元素抑制作用小的植酸酶制劑，同時(shí)減少不必要礦物元素的添加，尤其是對(duì)植酸酶制劑酶活有抑制作用的礦物元素。

4 植酸酶對(duì)胃腸道消化酶的耐受性

外源酶制劑一般由微生物發(fā)酵而得，其本質(zhì)是具有催化活性的蛋白質(zhì)，因此當(dāng)外源酶制劑進(jìn)入畜禽消化道后，其作為蛋白質(zhì)需要經(jīng)受機(jī)體胃腸道內(nèi)內(nèi)源性蛋白酶（如胃蛋白酶和胰蛋白酶等）的作用。所添加的外源酶制劑在動(dòng)物機(jī)體內(nèi)是否能耐受動(dòng)物機(jī)體內(nèi)源消化酶的消化分解，能否保持自身的酶活性，這是外源酶制劑在實(shí)際應(yīng)用過(guò)程中必須解決的問(wèn)題。沈水寶（2002）研究發(fā)現(xiàn)，α-淀粉酶不能耐受胃蛋白酶的作用，酸性蛋白酶、纖維素酶、β-葡聚糖酶和木聚糖酶對(duì)胃蛋白酶的耐受性較好。于旭華（2004）研究發(fā)現(xiàn)，分別來(lái)自細(xì)菌和真菌的兩種木聚糖酶經(jīng)胃蛋白酶處理后相對(duì)酶活性迅速下降，酶活損失達(dá)70%以上，但是這兩種木聚糖酶對(duì)胰蛋白酶的耐受性較好，經(jīng)胰蛋白酶處理后酶活性存留都在80%以上。

近年來(lái)，關(guān)于植酸酶對(duì)胃腸道消化酶耐受性的研究報(bào)道逐漸增多，但多數(shù)集中于對(duì)胃蛋白酶的耐受性研究。研究結(jié)果顯示，植酸酶對(duì)胃蛋白酶有不同程度的耐受性，胰蛋白酶對(duì)植酸酶的酶活抑制作用比胃蛋白酶大。王銀東等（2006）試驗(yàn)結(jié)果表明，植酸酶經(jīng)不同濃度胃蛋白酶作用后均能保持酶活性不變，表現(xiàn)出對(duì)胃蛋白酶極好的耐受性。王嚴(yán)等（2007）對(duì)重組黑曲霉WY-6植酸酶的研究也發(fā)現(xiàn)，植酸酶對(duì)胃蛋白酶的抗性較高，加入高濃度胃蛋白酶后仍能保持70.9%的相對(duì)酶活性。張鐵鷹等（2006）研究發(fā)現(xiàn)，植酸酶活性在pH值3.0環(huán)境中較為穩(wěn)定，相對(duì)酶活性保持在85%以上，當(dāng)肉仔雞按照5.86 mg/ml水平添加胃蛋白酶，植酸酶的相對(duì)酶活性下降至65%；植酸酶在pH值6.0環(huán)境中相對(duì)酶活性保持在60%～70%，當(dāng)肉仔雞按照8.4 mg/ml水平添加胰蛋白酶，植酸酶的相對(duì)酶活性急劇降至30%左右。該試驗(yàn)結(jié)果表明，植酸酶不能耐受胃蛋白酶和胰蛋白酶，胰蛋白酶對(duì)植酸酶活性的抑制作用要比胃蛋白酶強(qiáng)。本課題組試驗(yàn)研究也發(fā)現(xiàn)，經(jīng)不同濃度的胃蛋白酶和胰蛋白酶處理后，耐熱植酸酶的相對(duì)酶活性均顯著降低（P＜0.01），經(jīng)不同濃度胃蛋白酶處理后，無(wú)花果曲霉源植酸酶的相對(duì)酶活性幾乎沒(méi)有變化，維持在83%左右，但隨著胰蛋白酶添加量的加大，耐熱植酸酶的相對(duì)酶活逐級(jí)遞減（P＜0.01），由2.5 U/ml胰蛋白酶處理后的75.44%相對(duì)酶活性降低至20 U/ml時(shí)的60.79%，胰蛋白酶對(duì)耐熱植酸酶的活性抑制作用強(qiáng)于胃蛋白酶（陳旭，2008）。

理論上，胃蛋白酶可以切割黑曲霉植酸酶肽段上127個(gè)位點(diǎn)，胰蛋白酶對(duì)黑曲霉植酸酶肽段有33個(gè)切割位點(diǎn)，雖然胃蛋白酶的酶切位點(diǎn)遠(yuǎn)多于胰蛋白酶，但是胰蛋白酶對(duì)植酸酶的破壞作用要強(qiáng)于胃蛋白酶，可能是因?yàn)橹菜崦冈趐H值6.0下的蛋白結(jié)構(gòu)同pH值3.0下相比更有利于蛋白酶的切割（劉志偉，2007）。

5 結(jié)語(yǔ)

不同結(jié)構(gòu)植酸酶制劑的酶學(xué)特異性和抗逆性存在差異，應(yīng)注意溫度、pH值、礦物元素和胃腸道消化酶對(duì)植酸酶活性的影響。在選用植酸酶制劑時(shí)，應(yīng)根據(jù)實(shí)際生產(chǎn)和動(dòng)物生理特點(diǎn)從上述四個(gè)方面評(píng)價(jià)植酸酶，以選擇酶活較高、穩(wěn)定性較好的植酸酶產(chǎn)品。

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