劉 芳，劉 歡，于美麗

（天津第三中心醫(yī)院，天津 300170）

肝硬化患者血漿同型半胱氨酸水平的臨床研究

劉 芳，劉 歡，于美麗

（天津第三中心醫(yī)院，天津 300170）

目的 探討血漿總同型半胱氨酸（tHCY）含量在肝硬化疾病的臨床價(jià)值。方法 測定并分析47例肝硬化患者及55例健康者血漿tHCY含量，以及肝硬化患者血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST）、總膽紅素（TBIL）、膽堿酯酶（CHE）、白蛋白（ALB）、前白蛋白（PALB）、葡萄糖（GLU）、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）含量、血漿中20種氨基酸水平。結(jié)果 肝硬化患者血漿tHCY水平（12.98±3.73μmol/L）與正常對照組（10.29±1.96）μmol/L相比有所升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，肝硬化Child-pugh C級患者中HCY水平明顯升高（14.96±4.74μmol/L），與對照組、肝硬化Child-pugh A級患者、肝硬化Child-pugh B級患者相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。tHCY變化與血清ALT、AST、ALB、TBIL、PALB、BUN、Cr、BCAA/AAA無相關(guān)性，而與氨基酸分析中蛋氨酸（MET）成正相關(guān)，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 HCY可作為評價(jià)肝硬化病情嚴(yán)重程度的一項(xiàng)新的生化指標(biāo)。

肝硬化；同型半胱氨酸；高效液相色譜檢測

同型半胱氨酸又稱為高半胱氨酸（Homocysteine，HCY），它不屬于組成蛋白質(zhì)的20種氨基酸，在體內(nèi)不能合成，只能依賴于蛋氨酸的分解代謝，是甲硫氨酸代謝而形成的一種含硫氨基酸。目前研究認(rèn)為慢性肝病患者血漿Hcy水平顯著升高，可作為肝功能損害的預(yù)測指標(biāo)［1］。而肝硬化患者由于肝臟病變不同，臨床表現(xiàn)、并發(fā)癥以及治療方法也不同，及時(shí)、準(zhǔn)確地了解肝功能對評價(jià)肝硬化患者合理治療、判斷預(yù)后以及預(yù)測并發(fā)癥等具有重要的臨床意義。因此，通過檢測肝硬化患者血漿總同型半胱氨酸（total homocysteine，tHCY）水平，可以評估肝硬化病情變化。

1 材料和方法

1.1 材料

收集200710-200910在天津第三人民醫(yī)院住院治療的肝硬化患者47例，其中男32例，女15例，年齡27～77（52.48±13.25）歲，肝硬化的診斷標(biāo)準(zhǔn)符合2004年全國傳染病與寄生蟲病學(xué)術(shù)會議修訂的肝病診斷標(biāo)準(zhǔn)。同時(shí)期體檢的健康人群55例作為對照組，均無急慢性肝病、上腹部B超檢查肝內(nèi)未見明顯病變、肝臟生化檢查均在正常范圍，其中男23例，女32例，年齡35～73（55.3±8.15）歲。各組間年齡及性別差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2 方法

1.2.1 血樣采集

在入院時(shí)對所有入選研究對象進(jìn)行清晨空腹肘靜脈采血3mL，一次性試管中注入含抗凝劑EDTA30μL，于采血后2h內(nèi)以3 000r/min離心15min，分離血漿，置于-80℃冰箱保存待測。

1.2.2 檢測Hcy

采用美國Waters-600 E型高效液相色譜儀配備日本島津公司RF-10A型熒光檢測儀，CR-1B色譜數(shù)據(jù)處理機(jī)和Eorbax C18（250mm×4.6mm ID）分析柱進(jìn)行所有入選研究對象血漿HCY檢測，以美國Sigma公司提供的HCY標(biāo)準(zhǔn)品作對照；通過日立835-50氨基酸自動分析儀進(jìn)行血漿中蛋氨酸（MET）、精氨酸（ARG）等20種氨基酸檢測，應(yīng)用全自動生化分析儀進(jìn)行血清中丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST）、總膽紅素（TBIL）、膽堿酯酶（CHE）、白蛋白（ALB）、前白蛋白（PALB）、葡萄糖（GLU）、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）檢測。

1.2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（xˉ±s）表示，多個(gè)樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析，組間樣本均數(shù)間兩兩比較采用q檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析，P=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 肝硬化組及正常對照組血漿tHCY檢測結(jié)果比較

肝硬化組空腹血漿tHCY水平為12.98±3.73μmol/L，正常對照組血漿tHCY水平為10.29±1.96μmol/L，在肝硬化患者中血漿tHCY水平顯著升高，兩組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2 肝硬化患者間血漿tHCY差異比較

15例Child-Pugh分級A級患者血漿tHCY值為11.57μmol/L，B級患者12例血漿tHCY值為11.98μmol/L，20例C級患者血漿tHCY值為14.96μmol/L，呈進(jìn)行性增加趨勢，即肝硬化程度越重，血漿tHCY水平越高。Child-Pugh C級患者與對照組、肝硬化Child-pugh A級、B級患者相比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而肝硬化Childpugh A級、B級患者間血漿tHcy水平比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2.3 血漿tHcy水平與主要肝功能指標(biāo)的相關(guān)性

在傳統(tǒng)Child-Pugh A、B、C組中的肝功能的諸項(xiàng)指標(biāo)中，血清白蛋白、前白蛋白、血小板水平逐漸下降，膽紅素水平逐漸升高，凝血酶原活動度逐漸延長。將血漿tHCY水平與主要肝功能指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)性回歸分析，結(jié)果提示tHCY與ALT、AST、ALB、PALB、BCAA/AAA呈負(fù)相關(guān)，與 TBIL、BUN、Cr、MET呈正相關(guān)，但上述結(jié)果不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），即tHCY水平僅與MET相關(guān)性具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），結(jié)果見表3。

3 討論

HCY是一種含硫的氨基酸，是蛋氨酸去甲基后形成的中間產(chǎn)物，通常HCY在細(xì)胞內(nèi)代謝途徑有3條。①轉(zhuǎn)甲基途徑：HCY在蛋氨酸合成酶（Methionine synthase，MS）及輔酶維生素B12參與下，與5-甲基四氫葉酸合成蛋氨酸和四氫葉酸；其替代途徑局限于肝細(xì)胞內(nèi)，甜菜堿（betaine）供甲基并在甜菜堿同型半胱氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶作用下合成蛋氨酸。②轉(zhuǎn)硫途徑：HCY在胱硫醚-β-合成酶（Cystathionine β-Synthase，CBS）及輔酶維生素B6參與下，與絲氨酸縮合成胱硫醚，進(jìn)一步斷裂成半胱氨酸和α-酮丁酸。轉(zhuǎn)硫途徑被認(rèn)為是體內(nèi)清除HCY的主要途徑［2］，這一過程是不可逆的。③HCY在細(xì)胞內(nèi)形成后排出至血漿參加循環(huán)。正常血漿中HCY以結(jié)合形式或游離形式存在，統(tǒng)稱為總HCY。生理?xiàng)l件下，在人體血漿中只有極少量HCY（＜0.3μmol/L）以游離態(tài)存在，絕大部分以HCY-二硫化物結(jié)合態(tài)存在［3］。

臨床上嚴(yán)重的高同型半胱氨酸血癥主要見于與HCY代謝相關(guān)基因突變，即遺傳性胱硫醚β合成酶和N5，N10-亞甲基四氫葉酸還原酶的基因突變。在體內(nèi)，胱硫醚β合成酶基因的表達(dá)主要是在肝、腎、胰腺和大腦等，其中在肝臟中表達(dá)最強(qiáng)，因此，肝臟被認(rèn)為是代謝HCY的主要器官［2］。另外，葉酸、VitB12、Vit B6缺乏也是影響血漿tHCY水平的主要因素，而肝臟不僅僅是葉酸和B族維生素的主要儲存部位，而且近85％的HCY轉(zhuǎn)硫作用是在肝臟中進(jìn)行的，因此當(dāng)肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞損傷時(shí)，將引起HCY代謝障礙。這可能是通過產(chǎn)生過量氧化物及過氧化物本身對肝臟產(chǎn)生損傷，導(dǎo)致肝臟三羧酸循環(huán)的障礙，干擾谷胱甘肽合成，使得谷胱甘肽防止細(xì)胞成分氧化的作用、對血管產(chǎn)生保護(hù)功能降低，進(jìn)而阻礙體內(nèi)DNA、蛋白質(zhì)、多糖、膽堿和兒茶酚氨等的甲基化轉(zhuǎn)反應(yīng)過程，影響細(xì)胞的發(fā)育、分化［4］。這些因素又加重對肝臟損傷［5-9］，兩者形成惡性循環(huán)，加速了肝臟疾病的進(jìn)展。

在我們的研究中，血漿tHCY水平顯著升高（12.98±3.73μmol/L），與正常對照組（10.29±1.96μmol/L）比較具有顯著性差異（P＜0.05）。本研究同時(shí)提示，隨著肝硬化組患者Child-Pugh分級的增加，其血漿tHCY水平明顯升高，呈進(jìn)行性增加趨勢，即肝硬化程度越重，血漿tHCY水平越高。肝硬化Child-pugh C級患者與對照組、肝硬化Child-pughA級B級患者間比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），與Ventura及石勝等［10-11］的研究結(jié)果相一致，因此我們提出失代償期肝硬化患者進(jìn)行血漿中tHCY水平檢測，可能有助于在臨床中對肝硬化患者病情的嚴(yán)重程度加以判斷及監(jiān)測。

表1 血漿tHCY水平與各生化指標(biāo)間的關(guān)系

HCY在體內(nèi)合成依賴蛋氨酸的分解代謝，在HCY代謝過程中，HCY通過轉(zhuǎn)甲基途徑形成蛋氨酸，二者構(gòu)成代謝循環(huán)，相互轉(zhuǎn)化［12］。在本研究分析肝硬化患者血漿tHCY水平與主要肝功能指標(biāo)的相關(guān)性中，提示tHcy變化僅與MET有顯著相關(guān)性，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析P＜0.05，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可能與上述觀點(diǎn)有關(guān)。而血漿tHcy水平與ALT、AST、ALB、PALB、BCAA/AAA成負(fù)相關(guān)，與TBIL、BUN、Cr成正相關(guān)，但不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

因此，我們認(rèn)為，血漿tHCY水平可以作為評價(jià)肝硬化病情嚴(yán)重程度的一項(xiàng)新的生化指標(biāo)。針對失代償期的肝硬化患者，監(jiān)測tHCY水平變化可能有助于理解疾病的演變，為在臨床工作中合理制定治療方案及估計(jì)預(yù)后將有一定意義。但在該研究存在樣本量偏小，尚缺乏病理組織學(xué)的對照研究，還希望在以后的研究中加以進(jìn)一步驗(yàn)證。

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〔編輯 楊德兵〕

Clinical Study of Plasma Homocysteine Levels in Cirrhosis Patients

LIU Fang，LIU Huan，YU Mei-li
（Tianjin Third Central Hospital，Tianjin，300170）

ObjectiveTo investigate the clinical significance of plasma total homocysteine（tHcy）in cirrhosis.MethodsPlasma total homocysteine level were measured in 47 cirrhosis patients and 55 healthy controls during 2007/20-2009/10.Serum ALT，AST，TBIL，CHE，ALB，PALB，GLU，BUN，Cr and amino acid levels in cirrhosis patients were also detected.ResultsPlasma tHcy levels in cirrhosis patients（12.98±3.73 μmol/L）were higher than healthy controls（10.29±1.96）μmol/L（P＜0.05）.Plasma tHcy levels in Childpugh C patients（14.96±4.74）μmol/L was significantly higher than Child-pugh A and B patients（P＜0.05）.There were no correlation between plasma tHcy levels and ALT，AST，ALB，TBIL，PALB，BUN，Cr，BCAA/AAA，but there was significantly positive correlation between tHcy and Methionine（P＜0.05）.ConclusionsPlasma tHcy levels in cirrhosis disease may be a new biochemistry measurement.

cirrhosis；homocysteine；high performance liquid chromatography

R575.2

A

1674-0874（2011）03-0051-03

2010-11-22

劉芳（1970-），女，山西陽高人，碩士，主治醫(yī)師，研究方向：肝膽疾病。