鞏新玉 閆 晗 劉 靜 趙 璨 楊利民

（1 駐馬店市食品藥品檢驗(yàn)所，河南 駐馬店 463000；2 周口市太康人民醫(yī)院，河南 周口 463000）

利巴韋林的化學(xué)名稱：1-β-D-呋喃核酸基-1H-1，2，4-三氮唑-3-羧酰胺。

利巴韋林的結(jié)構(gòu)式[1]：

分子式：C8H12N4O5

分子量：244.21

利巴韋林（Ribavirin）又稱三氮唑核苷、病毒唑、三唑核苷。為廣譜抗病毒核苷類化合物，能抑制病毒合成核酸，對多種RNA、DNA病毒有抑制作用。臨床用于病毒性感冒、腺病毒、肺炎麻疹、甲型肝炎、流行性出血熱、帶狀皰疹及病毒性腦炎等疾病的治療[2,3]。

HPLC法為中國藥典2005年版二部規(guī)定的利巴韋林（原料及注射液）含量測定的方法，專屬性強(qiáng)，準(zhǔn)確可靠，重復(fù)性好，適用于利巴韋林注射液成品質(zhì)量控制。因利巴韋林注射液在生產(chǎn)過程中，從配制到灌封不能超過12h，HPLC法消耗時間過長，流動相的配制復(fù)雜，成本較高，需要對樣品進(jìn)行過濾和超聲等前處理。利巴韋林注射液半成品的質(zhì)量檢測項(xiàng)目有pH值和含量測定，pH值的測定方法在此不做討論，主要討論含量測定。利巴韋林的含量測定的方法有定氮法 、液相色譜法[1]、反向高效液相色譜法、高效毛細(xì)管電泳法、旋光法[4]、紫外分光光度法[3]、高磺酸法等。這里對幾種常見簡便的方法進(jìn)行比較，優(yōu)化出一種適合生產(chǎn)中利巴韋林注射液半成品質(zhì)量控制的方法。

從利巴韋林分子結(jié)構(gòu)上可知具有紫外吸收性和旋光性，這與中國藥典2005年版二部上的利巴韋林性質(zhì)一致。

利巴韋林注射液處方：利巴韋林100g；氯化鈉9g；藥用炭0.5g；注射用水加至1000mL。

在旋光光度測定方法中，通過對輔料進(jìn)行旋光檢測，輔料沒有旋光度，對此種方法進(jìn)行含量測定沒有影響。再分別用以上兩種方法測定利巴韋林注射液半成品的含量并與HPLC法測得含量進(jìn)行對比優(yōu)化出一種能夠保證準(zhǔn)確性，節(jié)省時間，成本低，適合于利韋林注射液生產(chǎn)需要的方法對利巴韋林注射液半成品進(jìn)行控制，并進(jìn)行方法學(xué)考察。

1 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑

SSI2000型HPLC-UV：（美國聯(lián)盟實(shí)驗(yàn)室）；AL104/01型電子天平：（瑞士梅特勒）；pHS 3C精密pH計（上海雷磁儀器廠）；UV-1201紫外可見分光光度計（北京通用儀器設(shè)備公司）；WZZ-1型自動指示旋光儀（上海物理光學(xué)儀器廠）；利巴韋林對照品（中國藥品生物制品檢定所）；利巴韋林原料：（濟(jì)南明鑫制藥有限公司）【批號】 ；氯化鈉：（中鹽宏博集團(tuán)云夢云虹制藥有限公司）【批號】；藥用炭：（上海活性炭有限公司）；利巴韋林注射液半成品規(guī)格：0.1mg/mL（濮陽市匯元藥業(yè)有限公司）【批號：081101，081102，081103】。

實(shí)驗(yàn)用水均為超純水

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 旋光光度法

2.1.1 檢測條件

利巴韋林具有旋光性，為左旋性物質(zhì)，采用鈉光譜D線，波長為589nm 測定管長為20cm在20℃±0.15℃，以水為溶劑。

2.1.2 旋光度與濃度的線性關(guān)系

精密稱取經(jīng)105℃干燥至恒重的注射用利巴韋林，加注射用水，分別配成40、80、100、120、140mg/mL的5種濃度的溶液，依照2.1.1中的方法測定旋光度。以旋光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得到方程Y =-0.0743X-0.0981，（r=0.9999）。數(shù)據(jù)和線性圖見表1和圖1。

表1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

圖1 標(biāo)準(zhǔn)曲線（旋光）

2.1.3 精密度實(shí)驗(yàn)

取以上5種濃度的利巴韋林溶液，照旋光光度測定法[1]測定旋光度，重復(fù)測定6次，計算標(biāo)準(zhǔn)相對偏差，見表2。

2.1.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

2.1.4.1 溫度對旋光度的影響

取不同溫度的以上5種濃度的溶液，分別測定旋光度結(jié)果，見表3。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在10～30℃范圍溫度內(nèi)對利巴韋林溶液的旋光度基本沒有影響。

表2 精密度實(shí)驗(yàn)

表3 溫度對旋光度的影響

2.1.4.2 pH值對旋光度的影響

藥典規(guī)定利巴韋林注射液pH值范圍是4.0～6.0，取濃度為40mg/mL的利巴韋林溶液，分別用0.1mol/L的鹽酸溶液和0.1mol/L的氫氧化鈉溶液調(diào)整至不同的pH值（4.0、4.5、5.0、5.5、6.0），測定旋光度，見表4。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明pH值在4.0～6.0范圍內(nèi)，利巴韋林注射液旋光度無變化。

表4 pH值對旋光度的影響

2.1.5 回收率實(shí)驗(yàn)

根據(jù)以上配制方法配制濃度為40、80、100mg/mL的利巴韋林溶液，每種濃度的溶液各3份，根據(jù)中國藥典2005年版二部的旋光光度法，測定旋光度，并計算含量，結(jié)果見表5。

表5 回收率試驗(yàn)

2.1.6 樣品的含量測定

取以上081101、081102、081103，三批利巴韋林注射液半成品，直接根據(jù)旋光光度法測定旋光度，并計算含量，見表6兩種方法含量比較。

2.2 HPLC法

2.2.1 色譜條件

色譜柱為Hamilton HC-75 氫型陽離子交換柱（250×4.1mm，9μm）；流動相為超純水（pH用稀硫酸調(diào)至2.5±0.1）；流速為1mL/min，紫外檢測波長為207nm，柱溫25℃，檢測理論塔板數(shù)按利巴韋林峰計算不低于3000。

2.2.2 流動相的配制

取蒸餾水2000mL，加稀硫酸調(diào)節(jié)pH值到2.5，用0.45μm的濾膜抽濾，棄去初濾液，取續(xù)濾液，在超聲波中處理20min，作為流動相。

2.2.3 對照液的制備

取利巴韋林標(biāo)準(zhǔn)品12.5mg，精密稱定，置50mL的量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻。精密量取稀釋液5mL，置25mL的量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻。

2.2.4 樣品含量的測定

取以上081101、081102、081103三批利巴韋林注射液半成品，精密量半成品5mL置100mL量瓶中，用流動相稀釋到刻度，搖勻。量取稀釋液1mL，置100mL量瓶中，加流動相稀釋到刻度，搖勻后，用0.45μm的濾膜抽濾，棄去初濾液。取續(xù)濾液，超聲波處理后按照上述色譜條件，精密量取20μL注入液相色譜儀，記錄峰面積。與標(biāo)準(zhǔn)品的峰面積對比，計算含量。見圖2和圖3。

圖2 081103批半成品掃描圖譜

圖3 標(biāo)準(zhǔn)品掃描圖譜

表6 兩種含量測定方法的比較

把HPLC法和旋光法測得利巴韋林注射液半成品的含量同樣進(jìn)行t檢驗(yàn)，經(jīng)計算t=1.5719。自由度df=（N1+N2-2）=4，查表[11]得t0.05（4）=2.776。t＜t0.05（4），沒有顯著性，說明旋光法可采用。

3 討論與分析

利巴韋林注射液的輔料為氯化鈉，在輔料對主藥吸收度的影響中附有掃描光譜，可見輔料對含量測定結(jié)果不產(chǎn)生實(shí)質(zhì)性影響。為了簡化試驗(yàn)操作，可以用蒸餾水作為空白。

根據(jù)處方的比例，配制成不含利巴韋林的對照液，經(jīng)過旋光測定，證明沒有旋光性，輔料對主藥含量測定沒有影響。進(jìn)行含量測定時可直接用蒸餾水作為對照校正。

通過對以上方法的含量測定結(jié)果分別與HPLC比較，旋光光度法的含量測定結(jié)果偏低。通過進(jìn)行數(shù)理學(xué)T檢驗(yàn)證明，沒有顯著性差異，兩種方法都可采用。

4 結(jié) 論

通過對以上方法的整體考察，旋光光度法與HPLC相比。HPLC法專屬性強(qiáng)，準(zhǔn)確可靠，重復(fù)性好，但不適合利巴韋林注射液半成品的質(zhì)量控制。旋光光度法比HPLC法相對節(jié)省了時間，操作更方便，均可用于利巴韋林注射液半成品的質(zhì)量控制。

旋光光度法樣品檢測濃度不要求太低，利巴韋林注射液為0.1g/mL，濃度適宜，可直接進(jìn)行旋光測定，此濃度測定結(jié)果誤差較小。其操作簡單，可直接用對照品測得校正因子后，照2005版中國藥典《旋光度測定法操作規(guī)程》依法測定，按下式計算，含利巴韋林（C18H12N4O5）應(yīng)為標(biāo)示量的93.0～107.0%。

含量%=α×校正系數(shù)×100%

此方法簡便，快速，適合本廠生產(chǎn)需要，縮短了配制到灌封的時間。旋光光度法是為適應(yīng)本廠優(yōu)化出來的較為理想的方法，通過此方法的優(yōu)化，減少了化驗(yàn)人員的勞動強(qiáng)度，降低了成本。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2005年版(二部)[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社,2005：262.

[2]杜興,何英梅,羅西湘.利巴韋林片含量測定方法改進(jìn)[J].中國藥事,2006,20(3)：171-172.

[3]林婉貞,劉怡,任斌,等.紫外分光光度法測定利巴韋林含片含量[J].天津藥學(xué),2005,17(2)：29-31.

[4]范宇,王聯(lián)民.旋光法測定利巴韋林注射液含量方法探討[J].徐州醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2005,25(2)：152-154.

[5]李安榮,許群芬,龔亞林.紫外分光光度法和高效液相色譜法測定利巴韋林片含量的比較[J].中國藥業(yè),2004,13(12)：34-35.