劉青,甘林火,鄧愛(ài)華,翁連進(jìn)

(華僑大學(xué)化工學(xué)院,福建泉州 362021)

L-亮氨酸鈣對(duì)小鼠股骨生長(zhǎng)的影響

劉青,甘林火,鄧愛(ài)華,翁連進(jìn)

(華僑大學(xué)化工學(xué)院,福建泉州 362021)

觀察新氨基酸螯合鈣制劑——L-亮氨酸鈣對(duì)小鼠股骨生長(zhǎng)的影響.將昆明(KM)系小鼠隨機(jī)分成5組,分別喂養(yǎng)高、中、低劑量的L-亮氨酸鈣和葡萄糖酸鈣,通過(guò)測(cè)量相應(yīng)飼料喂養(yǎng)小鼠的體質(zhì)量、血清鈣質(zhì)量濃度、股骨長(zhǎng)度、股骨質(zhì)量和股骨中鈣的質(zhì)量分?jǐn)?shù)等指標(biāo),觀察亮氨酸鈣對(duì) KM系小鼠股骨生長(zhǎng)的影響.結(jié)果表明:L-亮氨酸鈣對(duì)小鼠體質(zhì)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),而小鼠血清鈣質(zhì)量濃度、股骨長(zhǎng)度、股骨質(zhì)量,以及股骨鈣的質(zhì)量分?jǐn)?shù)顯著高于普通飼料對(duì)照組小鼠(＊P<0.05);在相同含鈣元素劑量下,小鼠對(duì)L-亮氨酸鈣的吸收效果比葡萄糖酸鈣好.

L-亮氨酸鈣;小鼠;股骨;補(bǔ)鈣效果;藥效學(xué)

2005年,第4次全國(guó)營(yíng)養(yǎng)調(diào)查結(jié)果表明,我國(guó)居民普遍缺鈣,人均鈣攝入量不足鈣營(yíng)養(yǎng)日攝入量推薦標(biāo)準(zhǔn)(RDA)值的50%.傳統(tǒng)的補(bǔ)鈣制劑吸收率和利用率均較低,因而開(kāi)發(fā)新型的補(bǔ)鈣劑將有較好的應(yīng)用前景.有報(bào)道顯示,氨基酸螯合鈣制劑具有吸收率高、緩釋及與骨高度親和性等優(yōu)點(diǎn),能以分子形式被動(dòng)擴(kuò)散進(jìn)入血漿,使血鈣有充足時(shí)間進(jìn)行新陳代謝,達(dá)到高生物利用度,是比較理想的鈣源.目前,報(bào)道的氨基酸螯合鈣制劑有甘氨酸鈣和天冬氨酸鈣[1-2],而國(guó)內(nèi)外未見(jiàn)L-亮氨酸鈣的研究報(bào)道.文獻(xiàn)[3]根據(jù)鈣在人體小腸內(nèi)的吸收規(guī)律,以人體必須氨基酸為配體,研制了新型免疫調(diào)節(jié)型補(bǔ)鈣制劑——L-亮氨酸鈣[4-5].本文以葡萄糖酸鈣作為對(duì)照物,開(kāi)展小鼠藥效學(xué)試驗(yàn)研究.

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

游標(biāo)卡尺(上海量具刃具廠);V IS-7220型可見(jiàn)分光光度計(jì)(北京瑞利分析儀器公司);BP210S型電子天平(德國(guó)賽多利斯公司);Op tima-2000DV型電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜儀(美國(guó)珀金埃爾默公司).鈣測(cè)定試劑盒(上海榮盛生物技術(shù)有限公司);L-亮氨酸鈣(自制);葡萄糖酸鈣(廣東汕頭金石制藥總廠,批號(hào):070411);KM系小鼠由福建醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所提供;其他試劑均為市售分析純.

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

取昆明(KM)系小鼠50只,雌、雄各半,體質(zhì)量為15～18 g.適應(yīng)性喂養(yǎng)2 d后,按體質(zhì)量和性別隨機(jī)分為5組,每組10只.每天飼喂2次,早晚各1次,自由進(jìn)食,飲去離子水,飼喂期35 d,同時(shí)喂蔬菜補(bǔ)充維生素.其中:空白組(A組)喂基礎(chǔ)飼料,陽(yáng)性對(duì)照組(B組)在飼料中按5 g·kg-1加葡萄糖酸鈣;低(C組)、中(D組)、高(E組)劑量L-亮氨酸鈣組分別在飼料中,按1.5,3.0,5.0 g·kg-1加入L-亮氨酸鈣.以上飼料中加入的鈣鹽都折合成鈣元素計(jì)算.

實(shí)驗(yàn)中稱小鼠最初體質(zhì)量、每周增加的體質(zhì)量和實(shí)際增加的體質(zhì)量.35 d后眼球采血,用鈣試劑盒測(cè)定血清中鈣的質(zhì)量分?jǐn)?shù)[6].小鼠處死后取左側(cè)股骨,剔除肌肉后,用精密游標(biāo)卡尺量其股骨長(zhǎng)度,測(cè)定后于105℃烘箱中,烘至恒重后稱其質(zhì)量,然后按照 GB/T 5009.92-2003《食品中鈣的測(cè)定》中測(cè)定方法,先對(duì)股骨進(jìn)行硝解,再用原子發(fā)射光譜儀測(cè)定硝解液中鈣的質(zhì)量分?jǐn)?shù).

1.3 數(shù)據(jù)分析

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理試驗(yàn)數(shù)據(jù),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P<0.01為差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.

2 結(jié)果與分析

喂飼35 d后,通過(guò)測(cè)量小鼠的體質(zhì)量(mt)、血清鈣質(zhì)量濃度(ρ)、股骨長(zhǎng)度(l)、股骨質(zhì)量(m1)和股骨中鈣的質(zhì)量分?jǐn)?shù)(w)等指標(biāo),結(jié)果如圖1所示.

圖1 不同實(shí)驗(yàn)組小鼠指標(biāo)變化情況Fig.1 Increased weight of mice in several groups

2.1 含鈣飼料對(duì)小鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)的影響

從圖1(a)可知,由于小鼠在實(shí)驗(yàn)的第1,2周還處于生長(zhǎng)發(fā)育期,因此小鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)較快.從第3周開(kāi)始,體質(zhì)量增長(zhǎng)明顯緩慢.經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn),空白組、陽(yáng)性組和3個(gè)L-亮氨酸鈣劑量組的小鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05).鈣主要沉積在骨骼、牙齒等骨組織,不會(huì)對(duì)脂肪組織產(chǎn)生影響,在飼料中添加不同劑量的補(bǔ)鈣劑,不會(huì)引起小鼠體質(zhì)量的顯著增長(zhǎng).

2.2 含鈣飼料對(duì)小鼠血清鈣質(zhì)量濃度的影響

從圖1(b)可知,給予小鼠不同含鈣飼料35 d后,與空白組相比,陽(yáng)性組的血清鈣質(zhì)量濃度有顯著性提高(＊P<0.05).中、高劑量L-亮氨酸鈣給藥組的小鼠血清鈣質(zhì)量濃度與空白組小鼠的血清鈣質(zhì)量濃度相比顯著增高(＊＊P<0.01);在相同含鈣元素劑量條件下,L-亮氨酸鈣高劑量組小鼠的血清鈣質(zhì)量濃度與陽(yáng)性對(duì)照葡萄糖酸鈣組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(#P<0.05).表明,相同含鈣元素劑量條件下,小鼠對(duì)L-亮氨酸鈣的吸收可能比葡萄糖酸鈣強(qiáng),小鼠血清鈣濃度表現(xiàn)為明顯增高.低、中、高L-亮氨酸鈣給藥組小鼠血清鈣濃度與給藥劑量呈正相關(guān)性,隨給藥劑量的增大,小鼠血清鈣濃度增大.

2.3 含鈣飼料對(duì)小鼠股骨長(zhǎng)度的影響

補(bǔ)鈣能否顯著性地增加股骨長(zhǎng)度,文獻(xiàn)報(bào)道的研究結(jié)果不一[4,7-8].從圖1(c)可知,空白組的小鼠股骨長(zhǎng)度與葡萄酸鈣陽(yáng)性組及L-亮氨酸鈣低劑量組的小鼠股骨長(zhǎng)度相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);在L-亮氨酸鈣的中、高劑量組中,小鼠的股骨長(zhǎng)度與空白組小鼠股骨長(zhǎng)度相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0. 05).表明,L-亮氨酸鈣能促進(jìn)骨骼生長(zhǎng),小鼠股骨增長(zhǎng)與補(bǔ)鈣劑量的高低相關(guān).該結(jié)果與孫曉紅、鄒全明等的研究結(jié)果[6-7]一致,高鈣攝取量能提高大鼠的股骨長(zhǎng)度,氨基酸鈣對(duì)大鼠股骨增長(zhǎng)有顯著性影響.

2.4 含鈣飼料對(duì)小鼠股骨質(zhì)量的影響

從圖1(d)可知,3種劑量水平的L-亮氨酸鈣給藥組、葡萄糖酸鈣陽(yáng)性組的小鼠股骨質(zhì)量與空白組小鼠股骨質(zhì)量相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＊P<0.05);而相同含鈣元素劑量條件下,高劑量L-亮氨酸鈣對(duì)小鼠股骨質(zhì)量增加的效果比葡萄糖酸鈣陽(yáng)性組好,兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(#P<0.05).表明,給予L-亮氨酸鈣和葡萄糖酸鈣,能明顯增加小鼠股骨中鈣質(zhì)量分?jǐn)?shù)(##P<0.01).

2.5 含鈣飼料對(duì)小鼠股骨中鈣質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響

從圖1(e)可知,葡萄糖酸鈣陽(yáng)性組的小鼠股骨鈣質(zhì)量分?jǐn)?shù)與空白組小鼠股骨中鈣質(zhì)量分?jǐn)?shù)相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＊P<0.05);3種劑量水平的L-亮氨酸鈣組小鼠股骨鈣質(zhì)量分?jǐn)?shù)與空白組小鼠股骨鈣質(zhì)量分?jǐn)?shù)相比,差異更加明顯(＊＊P<0.01);在相同含鈣元素劑量下,高劑量L-亮氨酸鈣組的小鼠股骨鈣質(zhì)量分?jǐn)?shù)比葡萄糖酸鈣陽(yáng)性組的小鼠股骨鈣質(zhì)量分?jǐn)?shù)有增高趨勢(shì),但兩者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05).

3 結(jié)束語(yǔ)

骨骼的構(gòu)成除礦物質(zhì)因素外,還與膠原蛋白基質(zhì)構(gòu)成有關(guān).添加氨基酸鈣既能補(bǔ)充礦物質(zhì),又能補(bǔ)充基質(zhì)生長(zhǎng)所需的膠原蛋白成分,而且能促進(jìn)鈣的吸收,增加骨質(zhì)量和骨鈣質(zhì)量分?jǐn)?shù)[3,8].L-亮氨酸鈣劑能實(shí)現(xiàn)補(bǔ)鈣,又能補(bǔ)充人體必需氨基酸,因而具有較好的開(kāi)發(fā)前景.

[1]王立升.天門冬氨酸鈣和葡萄糖酸鈣兔體內(nèi)吸收度的研究[J].廣西大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2000,25(4):270-281.

[2]張麗萍,趙紅杰,王岑,等.絡(luò)合鈣在小鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究[J].中國(guó)生化藥物雜志,2000,21(2):71-72.

[3]張經(jīng)坤,張澤民,于傲.人體鈣吸收理論探討[J].科學(xué)通報(bào),2000,45(10):1114-1120.

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[5]劉青,甘林火,鄧愛(ài)華,等.新氨基酸螯合鈣制劑L-亮氨酸鈣的急性毒性及致突變性研究[J].華僑大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2009,30(4):429-431.

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(責(zé)任編輯:黃曉楠英文審校:劉源崗)

Effect of L-Leucine Calcium on the Thighbone Growth of M ice

L IU Qing,GAN Lin-huo, DENG Ai-hua,W ENG Lian-jin
(College of Chemical Engineering,Huaqiao University,Quanzhou 362021,China)

To observe the effects of a new amino acid calcium compoundL-leucine calcium on the mice thighbone grow th.KM mice were equally divided into 5 groups and fed with glucose calcium andL-leucine calcium with different dosage.The mice weight,the concentration of calcium in mice serum,the length,weight and calcium content of mice thighbone were measured in all groups in order to observe the effect ofL-leucine calcium on the thighbone grow th of mice.Results showed that the weight of mice had no significant influence(P>0.05).The concentration of calcium in serum and the length,weight,calcium content of mice thighbone were significantly increased compared theL-leucine calcium group to common group(＊P<0.05).A t the same calcium element dosage,absorption effect of leucine calcium was better than glucose calcium.

L-leucine calcium;mice;thighbone;calcium supp lement effect;pharmacodynamics

R 977.4;R 965.3

A

1000-5013(2011)02-0191-03

2009-06-29

翁連進(jìn)(1968-),男,博士,教授,主要從事氨基酸提取分離工藝的研究.E-mail:ljweng@hqu.edu.cn.

福建省泉州市科技計(jì)劃重點(diǎn)項(xiàng)目(2005G6);華僑大學(xué)科研啟動(dòng)基金資助項(xiàng)目(05BS301)