天津市靜?？h藥品檢驗所（301600）陳延晶 鄭兆銀 王玉忠 董明

復(fù)方醋酸潑尼松氯霉素散系由醋酸潑尼松、氯霉素、己烯雌酚組成的復(fù)方制劑，具有抗炎抗過敏的作用，主要用于宮頸炎癥治療。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中[1]無含量測定方法，經(jīng)查閱有關(guān)文獻(xiàn)資料[2～5]，筆者建立了HPLC法同時測定復(fù)方醋酸潑尼松氯霉素散中醋酸潑尼松和氯霉素的含量，方法簡便、快速、結(jié)果準(zhǔn)確。

1 儀器與試藥

島津LC2010AHT高效液相色譜儀，UV-2401PC紫外分光光度計，AG-135電子天平；氯霉素對照品（130555-200602，中國藥品生物制品檢定所）、醋酸潑尼松對照品（100012-200105，中國藥品生物制品檢定所）、復(fù)方醋酸潑尼松氯霉素散（天津某醫(yī)院，批號為20100908、20100909、20100910）。甲醇為色譜純。

2 試驗方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 迪馬ODSC18柱（4.6mm× 2 5 0 m m，5 μ m）色譜柱，以甲醇-水（60:40）為流動相，流速1.0 m l·m i n-1，檢測波長238nm，柱溫3 0 ℃，進(jìn)樣量為2 0 μ l。理論板數(shù)按氯霉素峰計算不低于2000，分離度符合要求。

2.2 溶液制備

2.2.1對照品溶液的制備 避光操作。精密稱取氯霉素對照品約100mg，置50ml量瓶中，加流動相適量使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，作為儲備液(1)備用；精密稱取醋酸潑尼松對照品約10 mg，置200ml量瓶中，加流動相適量使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，作為儲備液(2)備用；分別精密量取儲備液(1)5ml、儲備液(2)2ml置同一10ml量瓶中加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液制備 避光操作。精密稱取復(fù)方醋酸潑尼松氯霉素散適量（約相當(dāng)于氯霉素25mg），置25ml量瓶中，加流動相適量使溶解，并稀釋至刻度，搖勻。

附圖 氣相色譜圖

2.2.3 陰性樣品溶液制備 避光操作。精密稱取與供試品等量的不含醋酸潑尼松與氯霉素的陰性樣品，置25ml量瓶中，加流動相適量使溶解，并稀釋至刻度，搖勻。

2.3 專屬性試驗 按照“2.1”項下色譜條件，分別取對照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液各20μl注入液相色譜儀，色譜圖（見附圖）結(jié)果可見陰性樣品無干擾。2.4 線性關(guān)系的考察 分別精密量取儲備液(1)（精密稱取氯霉素對照品99.90 mg，醋酸潑尼松對照品10.55mg）1.0ml、2.0ml、3.0ml、5.0ml、6.0ml、7.0ml與儲備液(2)0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml、3.0 ml置同一10ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，按“2.1”項下的色譜條件進(jìn)行測定，記錄色譜圖，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為氯霉素：A=11.6×106C +14.9×104（r=0.9999 n=6)；醋酸潑尼松A=4.3×104C-6.4×103（r=0.9999 n=6)。結(jié)果表明，醋酸潑尼松在2.5～15μg/ml范圍內(nèi)與吸收峰面積呈良好線性關(guān)系，氯霉素在0.2～1.4mg/ml范圍內(nèi)與吸收峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗 分別取“2.2.1”項下的對照品溶液及“2.2.2”項下的供試品溶液，精取20μl注入液相色譜儀，按“2.1”項下的色譜條件，分別連續(xù)進(jìn)樣5次，計算氯霉素RSD=0.1%、醋酸潑尼松RSD=0.4%，供試品中氯霉素RSD=0.3%、醋酸潑尼松RSD=1.5%。

附表1 氯霉素回收率試驗結(jié)果

附表2 醋酸潑尼松回收率試驗結(jié)果

附表3 樣品測定結(jié)果（%）

2.6 重復(fù)性試驗 精密稱取同一批號為20100909的樣品5份，按“2.2.2”項下的方法制備，精取20μl注入液相色譜儀，按“2.1”項下的色譜條件分析，計算氯霉素 RSD= 1.2% 、醋酸潑尼RSD=1.4%。

2.7 穩(wěn)定性試驗 精取“2.2.1”項下的對照品溶液，按“2.1”項下的色譜條件分析，分別于0、2、4、6、8小時進(jìn)樣，測定對照品中氯霉素與醋酸潑尼松的峰面積，氯霉素RSD=0.1%、醋酸潑尼松RSD=0.4 %，說明其在8小時內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 回收率試驗 精密稱定氯霉素對照品約200mg，置100ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為儲備液(3)。精密稱定不含氯霉素與醋酸潑尼松的陰性樣品適量（與供試品等量）置25ml量瓶中，用流動相適量溶解；分別精密量取儲備液(3)10.0ml、12.5ml、15.0ml與儲備液(2)（醋酸潑尼松對照品10.55mg）4.0ml、5.0ml、6.0ml分別加入上述25ml量瓶中，流動相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；分別精密量取儲備液(3)10.0ml、12.5ml、15.0ml與貯備液(2)（醋酸潑尼松對照品1 0.5 5 m g）4.0ml、5.0ml、6.0 m l 分別加入25ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。分別取供試品溶液與對照品溶液按“2.1”項下的色譜條件分析，計算回收率。氯霉素為99.5%，RSD=1.0%（n=9）；醋酸潑尼松為1 0 0.9%，RSD=0.2%（n=9）。見附表1、附表2。

2.9 樣品測定 取復(fù)方醋酸潑尼松氯霉素散（天津某醫(yī)院，批號為20100908、20100909、20100910），按“2.2.2”制備，“2.1”下色譜條件分析，見附表3。

3 討論

3.1 檢測波長的確定 氯霉素在272nm有最大吸收，醋酸潑尼松在238nm有最大吸收；處方中兩組分含量相差較大（每1000g樣品中含醋酸潑尼松100mg、氯霉素10g），為了提高檢測靈敏度，選擇醋酸潑尼松的最大吸收波長作為檢測波長。

3.2 溶解方法的選擇 以甲醇、甲醇-水（60：40）兩種溶劑超聲、溫?zé)崛芙鈽悠愤M(jìn)行測定，區(qū)別無幾，但采用葡萄糖為輔料，用甲醇溶解時葡萄糖幾乎不溶解，故采用甲醇-水（60：40）溫?zé)崛芙狻?/p>

3.3 取樣量的確定 比較了約相當(dāng)于氯霉素50mg、30mg、25mg時在上述色譜條件下的分析結(jié)果，表明約相當(dāng)于氯霉素25mg時，峰形良好，分離效果好。

3.4 本研究采用HPLC法同時測定復(fù)方醋酸潑尼松散中醋酸潑尼松、氯霉素的含量，操作簡便、結(jié)果準(zhǔn)確可靠、重復(fù)性好，可用于本制劑的含量測定。