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促泌素在腎上腺原發(fā)腫瘤中的表達(dá)及其臨床意義

2011-11-02 01:52:46王文軍張帆陳玉娟梅晶晶
關(guān)鍵詞:嗜鉻細(xì)胞髓質(zhì)組織化學(xué)

王文軍 張帆陳玉娟 梅晶晶

(皖南醫(yī)學(xué)院弋磯山醫(yī)院病理科,安徽蕪湖 241000)

促泌素在腎上腺原發(fā)腫瘤中的表達(dá)及其臨床意義

王文軍 張帆*陳玉娟 梅晶晶

(皖南醫(yī)學(xué)院弋磯山醫(yī)院病理科,安徽蕪湖 241000)

目的 比較促泌素(secretagogin,SCGN)與傳統(tǒng)神經(jīng)內(nèi)分泌標(biāo)記物在腎上腺原發(fā)腫瘤中的表達(dá)差異。方法 收集腎上腺原發(fā)腫瘤手術(shù)標(biāo)本共37例,其中包括18例皮質(zhì)腺瘤、3例皮質(zhì)腺癌、16例嗜鉻細(xì)胞瘤。同時(shí)選取5例正常腎上腺組織,5例腎透明細(xì)胞癌作為對(duì)照。所有標(biāo)本均使用SCGN、PGP9.5、CD56、NSE、Syn及CgA進(jìn)行免疫組織化學(xué)SP法染色。結(jié)果 SCGN在全部5例正常腎上腺皮質(zhì)均有表達(dá),而在髓質(zhì)不表達(dá)(P<0.01),其中在皮質(zhì)的表達(dá)明顯高于 PGP9.5和CgA的表達(dá)(P均<0.01);全部18例皮質(zhì)腺瘤均表達(dá) SCGN,且明顯高于 NSE(P<0.05)、PGP9.5和 CgA(P均 <0.01);腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤中SCGN的陽(yáng)性表達(dá)率僅為18.8%(3/16),明顯低于其它標(biāo)記物(P均<0.01)。SCGN在皮質(zhì)腺瘤(18/18)中的表達(dá)明顯高于嗜鉻細(xì)胞瘤(3/16)(P<0.01),而PGP9.5和CgA在嗜鉻細(xì)胞瘤(15/16,16/16)中的表達(dá)明顯高于皮質(zhì)腺瘤(3/18,1/18)(P均<0.01);CD56、NSE和Syn在皮質(zhì)腺瘤、皮質(zhì)腺癌和嗜鉻細(xì)胞瘤中均有高表達(dá),但兩兩組間比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P均>0.05)。SCGN在全部5例腎透明細(xì)胞癌中均不表達(dá)。結(jié)論 SCGN對(duì)腎上腺皮質(zhì)腺瘤有較高敏感性,其與嗜鉻細(xì)胞瘤的標(biāo)記物CgA和PGP9.5聯(lián)合可在兩者的診斷和鑒別診斷中發(fā)揮重要作用。

促泌素; 腎上腺皮質(zhì)腺瘤; 嗜鉻細(xì)胞瘤; 免疫組織化學(xué)

促泌素(secretagogin,SCGN)首先由 Wagner 等[1、2]克隆,目前作為一種新型的神經(jīng)內(nèi)分泌標(biāo)記物已受到重視。腎上腺原發(fā)腫瘤主要包括皮質(zhì)腺瘤(Adrenal cortical adenoma)和嗜鉻細(xì)胞瘤(Pheochromocytoma),兩者有時(shí)很難鑒別,而免疫組織化學(xué)標(biāo)記對(duì)其鑒別診斷很有幫助。SCGN能否在腎上腺皮髓質(zhì)腫瘤中表達(dá),且是否具有鑒別診斷意義?本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)比研究,探討SCGN在腎上腺原發(fā)腫瘤臨床病理診斷中的應(yīng)用價(jià)值。

材料和方法

1.材料

收集2002年1月至2008年1月間皖南醫(yī)學(xué)院弋磯山醫(yī)院病理科存檔石蠟包埋組織,均為手術(shù)切除標(biāo)本。實(shí)驗(yàn)組共37例腎上腺原發(fā)腫瘤標(biāo)本,包括18例皮質(zhì)腺瘤、3例皮質(zhì)腺癌和16例嗜鉻細(xì)胞瘤。另外選取正常腎上腺、腎透明細(xì)胞癌各5例作為對(duì)照組。所有病例均由兩位高年資病理醫(yī)師根據(jù)WHO2004年新分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)結(jié)合免疫組織化學(xué)結(jié)果進(jìn)行病理診斷,術(shù)前均未行任何治療。

2.免疫組織化學(xué)染色

上述存檔蠟塊組織均為4%甲醛固定,常規(guī)脫水,石蠟包埋,4μm厚切片。分別進(jìn)行促泌素(secretagogin,SCGN)、蛋白基因產(chǎn)物 9.5(protein gene production 9.5,PGP9.5)、CD56 即神經(jīng)細(xì)胞粘附分子(neural cell adhesion molecule,NCAM)、神經(jīng)元特異性烯醇化酶(neuron specific enolose,NSE)、突觸素(synaptophysin,Syn)及嗜鉻蛋白 A(chromogranin A,CgA)免疫組織化學(xué)SP兩步法染色,DAB顯色。上述抗體相關(guān)信息詳見(jiàn)表1,其中SCGN由浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院來(lái)茂德教授惠贈(zèng)。所用抗體均采用p H6.0的檸檬酸鈉緩沖液高壓修復(fù)。以PBS代替一抗作空白對(duì)照,以已知陽(yáng)性病例作陽(yáng)性對(duì)照。操作嚴(yán)格按產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

表1 抗體名稱(chēng)、性質(zhì)、克隆號(hào)、來(lái)源、工作濃度及陽(yáng)性部位Table1 The characteristics of all markers

3 結(jié)果判斷免疫組織化學(xué)染色細(xì)胞膜、胞質(zhì)或胞核出現(xiàn)清晰淡黃色至棕褐色顆粒者為陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞。結(jié)合染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)進(jìn)行分級(jí)[3]。兩人雙盲法分別觀察切片,每人選擇10個(gè)具有代表性的高倍視野(×400倍),評(píng)分后取平均值。染色強(qiáng)度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn):不著色為0分,淡黃色為1分,黃褐色為2分,棕褐色為3分。陽(yáng)性細(xì)胞所占整張切片比例評(píng)分標(biāo)準(zhǔn):陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<5%為0分,5%-25%為 1分,26%-50%為 2分,51%-75%為 3分,>75%為 4分。兩種評(píng)分相乘,0分為陰性,≥1分為陽(yáng)性;陽(yáng)性率按陽(yáng)性例數(shù)除以總例數(shù)計(jì)算。若兩人觀察結(jié)果相差3分則重新評(píng)定。

4.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理,兩兩間比較采用χ2Fisher精確檢驗(yàn),P<0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1.SCGN等標(biāo)記在正常腎上腺組織中的表達(dá)所有5例正常腎上腺皮質(zhì)均表達(dá) SCGN(圖 1)和CD56,均不表達(dá) PGP9.5和CgA,后兩者與 SCGN比較均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)。SCGN在正常腎上腺髓質(zhì)均不表達(dá),而 CgA(圖 2)和 PGP9.5在全部髓質(zhì)均為彌漫陽(yáng)性表達(dá),各標(biāo)記陽(yáng)性率均明顯高于SCGN(P<0.01)。SCGN僅在皮質(zhì)表達(dá),而在髓質(zhì)不表達(dá)(P<0.01);相反 PGP9.5和 CgA 僅在髓質(zhì)表達(dá),而在皮質(zhì)不表達(dá)(P均<0.01);CD56、NSE和Syn在皮質(zhì)和髓質(zhì)均可表達(dá),但在兩部位間的表達(dá)率均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)(見(jiàn)表2)。

2 SCGN等標(biāo)記在腎上腺皮質(zhì)腫瘤中的表達(dá)SCGN(圖3)和Syn在腎上腺皮質(zhì)腺瘤中均全部表達(dá),分別與 PGP9.5陽(yáng)性率16.7%(3/18)和 CgA 陽(yáng)性率5.6%(1/18)比較均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)。皮質(zhì)腺癌中各標(biāo)記均有不同程度表達(dá),與SCGN(圖4)比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)(見(jiàn)表3)。

表2 SCGN等標(biāo)記在正常腎上腺皮質(zhì)、髓質(zhì)中的表達(dá)Table 2 Expression of SCGN and the other markers in normal adrenal cortex and medulla

3.SCGN等標(biāo)記在腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤中的表達(dá)

SCGN在腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤(圖5)中的陽(yáng)性率僅為18.8%(3/16)且呈灶性弱陽(yáng)性,相反 CgA(圖6)和Syn均全部表達(dá),余標(biāo)記陽(yáng)性率也明顯高于SCGN,均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)(見(jiàn)表3)。

4.SCGN等標(biāo)記在腎上腺皮髓質(zhì)腫瘤間的表達(dá)差異

SCGN在皮質(zhì)腺瘤中的表達(dá)明顯高于嗜鉻細(xì)胞瘤(P<0.01),而 PGP9.5和 CgA 在嗜鉻細(xì)胞瘤中的表達(dá)均明顯高于皮質(zhì)腺瘤(P<0.01)。所有標(biāo)記在皮質(zhì)腺瘤和皮質(zhì)腺癌之間的表達(dá)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。除CgA在嗜鉻細(xì)胞瘤表達(dá)高于皮質(zhì)腺癌有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)外,余標(biāo)記在嗜鉻細(xì)胞瘤與皮質(zhì)腺癌之間的表達(dá)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。CD56、NSE和Syn在三組腫瘤中均有表達(dá),但兩兩組間比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)(見(jiàn)表3)。

5.SCGN等標(biāo)記在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)

SCGN等所有標(biāo)記在5例腎透明細(xì)胞癌中均無(wú)表達(dá)(表中未列出)。

表3 SCGN等標(biāo)記在原發(fā)性腎上腺腫瘤中的表達(dá)Table 3 Expression of SCGN and the other markers in primary adrenal tumors

討 論

SCGN基因定位于6p22.1-22.3,包含六個(gè)并行的EF手型鈣結(jié)合結(jié)構(gòu)域,屬于鈣結(jié)合蛋白感受器家族。近年的研究顯示SCGN在正常神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞和相應(yīng)腫瘤中均有表達(dá),為一種新型的神經(jīng)內(nèi)分泌標(biāo)記物[4-7]。目前僅有一種稱(chēng)為突觸小體相關(guān)蛋白-25(25kDa synaptosome-associated protein,SNAP-25)的SCGN結(jié)合蛋白被鑒定出來(lái)。SCGN的作用機(jī)制一方面與其較低的Ca2+親和力以及在Ca2+誘導(dǎo)下的構(gòu)型改變有關(guān),另一方面其與SNAP-25結(jié)合后可以通過(guò)Ca2+信號(hào)引發(fā)神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞胞吐作用,參與此類(lèi)細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化[8]。

傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為腎上腺皮質(zhì)起源于中胚層,不屬于神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng),而髓質(zhì)起源于外胚層具有神經(jīng)內(nèi)分泌功能。但資料顯示腎上腺皮質(zhì)亦有一定的神經(jīng)內(nèi)分泌分化[9],且有臨床資料作證[10]。這對(duì)傳統(tǒng)腎上腺皮質(zhì)發(fā)生學(xué)提出挑戰(zhàn),但到目前為止,包括正常及異常腎上腺皮質(zhì)與神經(jīng)內(nèi)分泌分化的關(guān)系仍不肯定。本實(shí)驗(yàn)顯示SCGN僅在正常腎上腺皮質(zhì)表達(dá),而在髓質(zhì)不表達(dá),其表達(dá)區(qū)域與 PGP9.5和CgA正好相反,以上三種標(biāo)記在皮質(zhì)與髓質(zhì)間的差異表達(dá)均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);CD56、NSE和Syn在正常腎上腺皮質(zhì)和髓質(zhì)均有不同程度的表達(dá),但三者在皮質(zhì)與髓質(zhì)間的表達(dá)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。一方面證實(shí)正常腎上腺皮質(zhì)可伴有神經(jīng)內(nèi)分泌分化,同時(shí)提示SCGN可作為正常腎上腺皮質(zhì)特異的免疫組化標(biāo)記物。

嗜鉻細(xì)胞瘤屬神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤是不爭(zhēng)的事實(shí),可表達(dá) CgA、Syn、NSE、PGP9.5 和 CD56,其中 CgA是特異性和敏感性兼優(yōu)的免疫組化標(biāo)記物[11-14],本研究也充分證實(shí)了這一點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)尚顯示皮質(zhì)腺瘤和皮質(zhì)腺癌也可表達(dá) Syn、NSE和 CD56,同時(shí)PGP9.5和CgA在個(gè)別標(biāo)本呈小灶性弱陽(yáng)性,與相關(guān)研究結(jié)果相似[15-18],證實(shí)腎上腺皮質(zhì)腫瘤也可伴有神經(jīng)內(nèi)分泌分化[19-21]。相關(guān)實(shí)驗(yàn)證實(shí)神經(jīng)內(nèi)分泌標(biāo)記物SCGNmRNA及其蛋白在腎上腺皮質(zhì)腺瘤和嗜鉻細(xì)胞瘤中均有不同程度表達(dá)[2、6、22]。本實(shí)驗(yàn)SCGN在18例腎上腺皮質(zhì)腺瘤中均全部表達(dá),在3例皮質(zhì)腺癌中有2例表達(dá),而在16例腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤中僅有3例且均為小灶性弱表達(dá),提示SCGN對(duì)皮質(zhì)腫瘤有較高敏感性和特異性,其與診斷嗜鉻細(xì)胞瘤的金標(biāo)準(zhǔn)CgA聯(lián)合可在兩者的鑒別中發(fā)揮重要作用。

腎上腺和腎臟腫瘤常因相互累犯,造成原發(fā)部位和腫瘤類(lèi)型不能通過(guò)普通病理形態(tài)學(xué)特點(diǎn)進(jìn)行確診,而免疫組織化學(xué)標(biāo)記可有助于進(jìn)一步明確診斷。Kim等[23]研究顯示SCGN在腎透明細(xì)胞癌中升高,來(lái)茂德等[6]免疫組織化學(xué)法顯示SCGN在3/5例腎透明細(xì)胞癌中陽(yáng)性表達(dá),而本實(shí)驗(yàn)SCGN等標(biāo)記在全部5例腎透明細(xì)胞癌中均無(wú)表達(dá),故SCGN在腎透明細(xì)胞癌和腎上腺腫瘤中是否具有鑒別診斷價(jià)值有待進(jìn)一步大樣本的研究。

總之,本研究證實(shí)包括SCGN在內(nèi)的神經(jīng)內(nèi)分泌標(biāo)記物均可用于腎上腺原發(fā)腫瘤的臨床病理診斷。尤其是SCGN、PGP9.5和CgA可主要用于腎上腺皮質(zhì)腺瘤和嗜鉻細(xì)胞瘤的鑒別診斷,即若SCGN陽(yáng)性、PGP9.5和 CgA陰性,多考慮為皮質(zhì)腺瘤;若 SCGN陰性,PGP9.5和 CgA 陽(yáng)性,則考慮為嗜鉻細(xì)胞瘤。限于CD56、NSE和Syn在兩者中均高表達(dá),故鑒別意義不大。而SCGN在腎上腺正常皮髓質(zhì)及其原發(fā)腫瘤中表達(dá)差異的機(jī)制值得進(jìn)一步探討。

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圖 版 說(shuō) 明

圖1 SCGN在正常腎上腺皮質(zhì)表達(dá),而在髓質(zhì)不表達(dá)。SP兩步法 ×40

圖2 CgA在正常腎上腺皮質(zhì)不表達(dá),而在髓質(zhì)強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。SP兩步法 ×40

圖3 SCGN在腎上腺皮質(zhì)腺瘤中彌漫強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。SP兩步法 ×100

圖4 SCGN在腎上腺皮質(zhì)腺癌中彌漫強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。SP兩步法 ×100

圖5 SCGN在腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤中不表達(dá),而在其殘留的皮質(zhì)表達(dá)。SP兩步法 ×100

圖6 CgA在腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤中強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。SP兩步法×100

EXPLANATION OF FIGURES

Fig.1 The positive expression of SCGN protein in normal adrenal cortex,but not in medulla. SP method ×40

Fig.2 The positive expression of CgA protein in normal adrenal medulla,but not in cortex.SP method ×40

Fig.3 The diffusely positive expression of SCGN protein in adrenal cortical adenoma.SP method ×100

Fig.4 The diffusely positive expression of SCGN protein in adrenal cortical adenocarcinoma. SP method ×100

Fig.5 The negative expression of SCGN protein in adrenal pheochromocytoma,but positive among normal adrenal cortex. SP method ×100

Fig.6 The strongly positive expression of CgA protein in adrenal pheochromocytoma. SP method ×100

Expression and significance of secretagogin in primary adrenal tumors

Wang Wenjun,Zhang Fan*,Chen Yujuan,Mei Jingjing

(Department ofPathology,Yijishan Hospital of Wannan Medical College,W uhu241000,China)

Objective To investigate the expression of secretagogin(SCGN)and traditional neuroendocrine markers and to explore the significance of SCGN in primary adrenal tumors.Methods Thirty-seven samples of primary adrenal tumors were collected,including 18 cases of adrenal cortical adenoma,3 adrenal cortical adenocarcinoma and 16 pheochromocytoma.At the same time,5 cases of normal adrenal and 5 cases of clear cell carcinoma in kidney were selected as controls.All specimens were detected by immunohistochemistry. Using the specific antibody for SCGN and 5 conventional neuroendocrine markers PGP9.5,CD56,NSE,Syn and CgA.Results SCGN staining was positive in all 5 cases of normal adrenal cortex,but not in medulla(P<0.01),more frequently than PGP9.5 and CgA(P<0.01). SCGN showed positive staining in all 18 cases of adrenal cortical adenoma,which was obviously higher than those of NSE(P<0.05),PGP9.5 and CgA(P<0.01). The positive rate of SCGN in pheochromocytoma was only 18.8%(3/16)less than those of the other markers(P<0.01). The positive rate of SCGN was significantly different between adrenal cortical adenoma(18/18)and pheochromocytoma(3/16)(P<0.01).Also,significant differences were seen in the positive rates of PGP9.5 and CgA between pheochromocytoma(15/16,16/16)and adrenal cortical adenoma(3/18,1/18)(P<0.01).Although the positive rates of CD56,NSE and Syn were higher in all primary adrenal tumors,there was no significant difference in pairwise comparison(P>0.05). All 5 cases of clear cell carcinoma in kidney did not express SCGN.Conclusion SCGN is a novel marker that may be useful in the diagnosis of adrenal cortical adenoma.A combination of SCGN,PGP9.5 and CgA could serve as diagnostic markers for distinguishing adrenal cortical adenoma from pheochromocytoma.

Secretagogin; Adrenal cortical adenoma; Pheochromocytoma; Immunohistochemistry

R736.6

A

10.3870/zgzzhx.2011.02.014

2010-10-10

2011-02-27

王文軍,男(1976年),漢族,主治醫(yī)師。

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