張 蕊 薛雅琳 趙會義

(國家糧食局科學(xué)研究院，北京 100037)

蠟含量法鑒別初榨橄欖油的方法研究

張 蕊 薛雅琳 趙會義

(國家糧食局科學(xué)研究院，北京 100037)

研究了蠟含量法鑒別(特級和中級)初榨橄欖油的方法。采用色譜分離技術(shù)，通過柱色譜，洗脫出橄欖油中的蠟組分，再進行氣相色譜分析，用內(nèi)標(biāo)法測得C40酯至C46酯總的蠟含量。結(jié)果表明:該方法C40 酯檢出限為0．106 μg/mL，線性范圍為 0．001 06 ～0．106 mg/mL，加標(biāo)回收率為 98．8% ～107．1%，試驗過程中相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)分別為3．7%和0．8%。該方法具有重復(fù)性好，回收率高等特點。通過測定橄欖油中蠟的含量，可用于鑒別(特級和中級)初榨橄欖油。

橄欖油 蠟含量 鑒別

橄欖油在西方被譽為“液體黃金”，在地中海沿岸國家有著幾千年的歷史［1－2］。近幾年，橄欖油也越來越受到我國消費者的關(guān)注。進口量逐年增加，已由2005年的4 500噸增加到近萬噸。

從橄欖油進口數(shù)量上看，2006年初榨橄欖油約占進口總量的35%，精煉油約占46%，果渣油約占20%。而油橄欖果渣油進口的比例有逐年增長的趨勢。2009年1～2月我國共進口橄欖油1 225噸，其中油橄欖果渣油達到了515．9噸，約占總量42%。在國際標(biāo)準(zhǔn)［3］和國家標(biāo)準(zhǔn)［4］中規(guī)定“油橄欖果渣油任何時候都不得標(biāo)稱橄欖油”。但值得注意的是，食用油市場上幾乎看不到油橄欖果渣油的商品，油橄欖果渣油的去向成為了橄欖油市場最大的疑問［5］。脂肪酸組成分析是鑒別植物油品種較好的方法，然而橄欖油、油橄欖果渣油具有完全相同的脂肪酸和甘三酯組成，因此需要尋求更科學(xué)的特征指標(biāo)進行鑒別。研究利用氣相色譜技術(shù)，結(jié)合柱色譜技術(shù)，分析橄欖油中蠟的含量，根據(jù)蠟的含量對橄欖油等級進行鑒別，解決橄欖油質(zhì)量分級及鑒別檢測遇到的技術(shù)問題。

1 材料與方法

1．1 材料與儀器

特級初榨橄欖油;市售;乙醚(分析純):北京化工試劑;正己烷(色譜純):Fisher Science;正庚烷(色譜純):天津市光得精細化工研究所;花生酸月桂醇酯，0．1%己烷溶液，內(nèi)標(biāo)物:sigma公司;蘇丹Ⅰ:sigma公司;硅膠，粒徑(60～200)μm:青島海洋化工分廠;C40酯、C44酯標(biāo)準(zhǔn)品:sigma公司。

氣相色譜儀，型號GC2010，配冷柱頭進樣口:島津公司;馬福爐，型號SX－4－10:天津市泰斯特儀器有限公司;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，型號R－215:步琪實驗室技術(shù)有限公司。

1．2 蠟的提取

硅膠柱的制備。將硅膠放入500℃的馬福爐中，灼燒至少4 h。冷卻，加入相當(dāng)硅膠量2%的水，搖動混勻。使用前于暗處放置至少12 h。向正己烷中加入15 g硅膠制成懸浮液，然后轉(zhuǎn)移至柱中。借助電動振蕩器使其沉降，使色譜柱更加均勻。再用30 mL正己烷淋洗除去雜質(zhì)，備用。

蠟的洗脫。稱量500 mg試樣于錐形瓶中，加入適量的內(nèi)標(biāo)物。用2次2 mL正己烷將制備好的試樣轉(zhuǎn)移至硅膠柱中。

用70 mL正己烷沖洗硅膠柱，去除雜質(zhì)。再用180 mL正己烷/乙醚混合液(99∶1)開始進行色譜洗脫，流速大約為每10秒鐘15滴，收集餾出液。樣品洗脫時環(huán)境溫度應(yīng)保持在(22±4)℃。

用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮上述分離得到的餾出液，直至溶劑幾乎除去。在弱的氮氣流中除去最后剩余的2 mL溶劑，再加入2～4 mL正庚烷，用于氣相分析。

1．3 測定條件

DB－5毛細管色譜柱(15 m ×0．25 mm ×0．25 μm)，冷柱頭，初始溫度83℃，以5℃/min程序升溫至260℃，保持37 min;檢測器溫度350℃;柱溫，初始爐溫80℃，以5℃/min程序升溫至340℃，保持20 min;載氣為氦氣，線速度45 cm/s;FID檢測器，進樣量 0．5 μL。

2 結(jié)果與討論

2．1 線性關(guān)系的測定

橄欖油中存在一些天然蠟質(zhì)，以C40至C46偶碳數(shù)的脂肪族酯為主。橄欖油中蠟含量表示為C40酯至C46酯各蠟含量的總和。試驗中以花生酸月桂醇酯為內(nèi)標(biāo)物，測定二十二碳酸十八碳醇酯(C40酯)與內(nèi)標(biāo)物的線性相關(guān)性。將C40酯的標(biāo)準(zhǔn)品配制成不同濃度的正己烷溶液，分別為0．106、0．042 4、0．021 2、0．010 6、0．001 06 mg/mL，按體積比 1∶1 與0．108 mg/mL花生酸月桂醇酯正己烷溶液混合，進樣0．5 μL，在最佳色譜條件下進行氣相色譜分析。以C40酯與花生酸月桂醇酯峰面積比為橫坐標(biāo)，C40酯與花生酸月桂醇酯質(zhì)量比為縱坐標(biāo)作圖，繪制曲線，見圖1。

圖1 C40酯標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖2 C40酯與花生酸月桂醇酯(0．010 6 mg/0．108 mg)譜圖

進行線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程:Y=0．988 4X－0．002 7，R2=0．999 9。由方程可知，曲線線性良好。通過曲線的斜率可看出，C40酯與花生酸月桂醇酯的響應(yīng)值比近似為1。因此在計算蠟的含量時，假定C40酯至C46酯的校準(zhǔn)因子均為1，這與COI/T．20/Doc．no．18/Rev．2 要求是一致的［6］。以基線噪音的3倍所對應(yīng)濃度作為方法的檢出限，C40酯檢出限為0．106 μg/mL，氣相色譜圖見圖 2。

2．2 色譜峰的定性

色譜峰的定性是通過標(biāo)準(zhǔn)品以及與文獻譜圖對照進行定性分析。圖3、圖4分別為本試驗條件下測得的純正橄欖油中蠟組分的氣相色譜圖及IOOC標(biāo)準(zhǔn)中所提供的橄欖油中蠟組分氣相色譜圖。由圖3和圖4可知，試驗條件下蠟組分與文獻譜圖中蠟組分有較好的一致性，C40酯至C46酯可被鑒別出來。

2．3 方法的精密度試驗

精密度試驗是對同一樣品進行多次重復(fù)測量，以相對標(biāo)準(zhǔn)偏差作為評價指標(biāo)。在相應(yīng)的色譜條件下，分別對2個不同橄欖油樣品(特級初榨橄欖油1#、純正橄欖油1#)中蠟含量進行重復(fù)性測定。每種樣品分別取6份，分別通過柱色譜洗脫，收集洗脫餾分進行氣相色譜分析。求得6次結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD及置信度為95%時的置信區(qū)間，結(jié)果見表1，采用本方法測定蠟含量具有很好的重復(fù)性。

表1 精密度測定結(jié)果(n=6)

2．4 方法的準(zhǔn)確度試驗

選用純正橄欖油1#進行回收率試驗和重復(fù)性試驗，結(jié)果見表2。外標(biāo)加入量0．5～2倍范圍內(nèi)，回收率為 98．8%～107．1%。

表2 回收率測定結(jié)果

2．5 實際樣品的測定

對市場上采集的5個橄欖油樣品，進行蠟含量的測定。5個橄欖油樣品的蠟含量見表3。

表3 不同橄欖油的蠟含量

從表3可以看出，特級初榨橄欖油1#、2#、3#與純正橄欖油1#、2#中蠟含量有著很大的區(qū)別，蠟含量基本小于100 mg/kg。這是由于初榨橄欖油與橄欖果渣油生產(chǎn)工藝不同造成的。《橄欖油和油橄欖果渣油貿(mào)易標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定，特級初榨橄欖油和中級初榨橄欖油蠟含量≤250 mg/kg，精煉橄欖油、混合橄欖油蠟含量≤350 mg/kg，而油橄欖果渣油 ＞350 mg/kg［3－4］。因此，測定蠟含量是一個很好鑒別(特級和中級)初榨橄欖油的方法［7］。

3 結(jié)論

利用氣相色譜技術(shù)，結(jié)合柱色譜技術(shù)對橄欖油中蠟含量分析方法的精確度、準(zhǔn)確性進行了研究，試驗證明該方法重復(fù)性好，回收率高，可操作性強。根據(jù)分析試驗結(jié)果進行橄欖油等級的鑒別，解決了橄欖油質(zhì)量分級及鑒別檢測中遇到的技術(shù)問題。

［1］邢立民．橄欖油的加工技術(shù)與開發(fā)利用研究［J］．內(nèi)蒙古科技與經(jīng)濟，2008(2):82－83

［2］王傳現(xiàn)，褚慶華，倪昕路，等．近紅外光譜法用于橄欖油的快速無損鑒別［J］．食品科學(xué)，2010(24):402－404

［3］IOOC，COI/T．15/NC No 3/Rev．5，Trade Standard Applying to Olive Oils and Olive － pomace Oils［S］

［4］薛益民，薛雅琳，張蕊，等．GB/T 23347—2009，橄欖油、油橄欖果渣油［S］

［5］彭爭光，翟艷偉，楊樺，等．進口橄欖油存在的主要問題及對策研究［J］．糧食與食品工業(yè)，2010(6):56－58

［6］IOOC，COI/T．20/Doc．no．18/Rev．2，Determination of Wax Content by Capillary Column Gas Chromatography［S］

［7］Kiritsakis，A．K，et．Olive Oil from the Tree to the TableM］，2nded．，Trumbull，CT:Food and Nutrition Press Inc．，1998:86－113．

A Study on Distinguishing Method of Virgin Olive Oil by Determining Wax Content

Zhang Rui Xue Yalin Zhao Huiyi

(Science Academy of State Grain Administration，Beijing 100037)

A method to distinguish virgin olive oil(extra virgin olive oil and medium－grade virgin olive oil)from other grade olive oil and olive － pomace oil was developed in this paper．Using the column chromatograph technology，the wax component(C40 to C46 ester)was eluted．And then it was determined by gas chromatogram through the internal standard method．The results showed:this method has good reproductivity and high recovery rate．Using this method，the detection limit of C40 ester was 0．106 μg/mL and liner range was 0．001 06 ～0．106 mg/mL．The recovery rate of this method was between 98．8%and 107．1%．In the process of testing，the relative standard deviationa(RSD)were respectively 3．7%and 0．8%．The method had such advantages as good repeatability，high recoverage rate and so on．The determination of wax content in the olive oil could be used to distinguish The virgin olive oil(super and medium)．

olive oil，the content of wax，distinguish

TQ646

A

1003－0174(2011)08－0119－04

2010－09－30

張蕊，女，1975年出生，副研究員，油脂化學(xué)及糧油安全