韓先桂 王佩良 邵坤 顧勇 韓先英 丁繼業(yè) （江蘇省盱眙縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 211700）

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仔豬高致病性豬藍(lán)耳病首免日齡抗體測(cè)定試驗(yàn)

韓先桂 王佩良 邵坤 顧勇 韓先英 丁繼業(yè) （江蘇省盱眙縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 211700）

通過(guò)對(duì)14日齡、21日齡和28日齡仔豬免疫的藍(lán)耳抗體檢測(cè)，結(jié)果表明，豬藍(lán)耳病疫苗的首免時(shí)間為14~21日齡最好。

高致病性 藍(lán)耳病 首免日齡 抗體測(cè)定

高致病性豬藍(lán)耳病是近年來(lái)危害我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)的最重要傳染病。接種高致病性豬藍(lán)耳病疫苗是綜合防控高致病性豬藍(lán)耳病的主要措施，但由于各豬場(chǎng)的母豬群、仔豬間母源抗體的分布參差不齊，免疫時(shí)間更是千差萬(wàn)別，導(dǎo)致許多豬場(chǎng)出現(xiàn)經(jīng)過(guò)高致病性豬藍(lán)耳病疫苗免疫但還是發(fā)生高致病性豬藍(lán)耳病的現(xiàn)象，尤其是各豬場(chǎng)仔豬群免疫時(shí)，由于母源抗體滴度對(duì)高致病性豬藍(lán)耳病弱毒苗的免疫保護(hù)效力有影響，導(dǎo)致疫苗接種達(dá)不到預(yù)期效果。為了確定本地區(qū)仔豬高致病性豬藍(lán)耳病首免日齡，特進(jìn)行了仔豬群高致病性藍(lán)耳病母源抗體滴度測(cè)定和母源抗體水平較低狀態(tài)時(shí)仔豬不同日齡免疫效力的小樣本試驗(yàn)。

1 試驗(yàn)方法

檢測(cè)豬血清中藍(lán)耳病抗體的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)。

1.1 方法 是采用豬藍(lán)耳病病毒N蛋白的基因工程表達(dá)產(chǎn)物包被微孔板。在試驗(yàn)中，加入稀釋的對(duì)照血清和待檢血清，經(jīng)溫育后，若樣品中含有豬藍(lán)耳病N蛋白的特異性抗體，則將與包被板上的抗原結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后；再加入酶標(biāo)二抗，與包被板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合酶結(jié)合物，在孔中加入TMB底物液，與酶反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物，加入HF溶液終止反應(yīng)后，用酶標(biāo)儀630nm波長(zhǎng)測(cè)定各反應(yīng)孔中的OD值。

1.2 判定標(biāo)準(zhǔn) 在酶標(biāo)儀上測(cè)各孔OD630nm值，試驗(yàn)成立的條件是陽(yáng)性對(duì)照孔平均OD630nm值≥0.7，陰性對(duì)照孔平均OD630nm值<0.3。樣品OD630nm值>0.42，判為陽(yáng)性；樣品OD630nm值介于0.387到0.42之間，判為可疑；樣品OD630nm值<0.38，判為陰性。

2 試驗(yàn)材料

2.1 供試動(dòng)物 在本縣的盱眙永順生態(tài)農(nóng)業(yè)有限公司規(guī)模養(yǎng)豬場(chǎng)選擇30頭14、21、28日齡乳豬，在較低水平豬藍(lán)耳病母源抗體狀態(tài)時(shí)，按照每頭豬1頭份的標(biāo)準(zhǔn)劑量開(kāi)展免疫試驗(yàn)，分別在免疫后2、3、4、5、6周進(jìn)行抗體監(jiān)測(cè)。

2.2 試驗(yàn)器材 武漢科前動(dòng)物生物制品有限責(zé)任公司生產(chǎn)的豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測(cè)試劑盒(ELISA)、酶標(biāo)儀、微量移液器(10~1000ml)、滴頭(10~1000ml)、微量振蕩器、恒溫箱等。

2.3 試驗(yàn)試劑 廣東大華農(nóng)動(dòng)物保健品股份有限公司生產(chǎn)的生產(chǎn)批號(hào)20101215，生產(chǎn)日期20100325的高致病性豬繁殖與呼吸綜合癥活疫苗(JXA1-R株)為試驗(yàn)疫苗。

2.4 被檢血清采集 采用豬前腔靜脈采血技術(shù)，對(duì)試驗(yàn)豬進(jìn)行逐頭采血2ml未免疫前先檢測(cè)母源抗體水平。再對(duì)14、21、28日齡的3組仔豬分別于接種1頭份高致病性豬繁殖與呼吸綜合癥活疫苗(JXA1-R株)后2、3、4、5、6周進(jìn)行逐頭采血2ml，登記耳標(biāo)號(hào)，做好血樣標(biāo)簽，離心血清冷藏保存?zhèn)溆谩?/p>

3 試驗(yàn)步驟

3.1 分組登記 對(duì)供試驗(yàn)豬只按14、21、28日齡分組，對(duì)耳標(biāo)號(hào)(或母豬耳標(biāo)號(hào))、高致病性豬藍(lán)耳病免疫時(shí)間等做詳細(xì)記錄。

3.2 免疫試驗(yàn) 在試驗(yàn)豬只頸部外側(cè)肌肉注射試驗(yàn)用高致病性豬繁殖與呼吸綜合癥活疫苗(JXA1-R株)，所用疫苗的免疫劑量為1ml/頭，

3.3 抗體檢測(cè) 采用豬前腔靜脈采血技術(shù)，對(duì)試驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行逐頭采血2ml檢測(cè)母源抗體水平。在試驗(yàn)豬只免疫2、3、4、5、6周后進(jìn)行抗體監(jiān)測(cè)。逐頭采集血液2ml，送盱眙縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心實(shí)驗(yàn)室分離血清用豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測(cè)試劑盒(ELISA)檢測(cè)。結(jié)果詳細(xì)記錄待分析。

3.4 數(shù)據(jù)處理 將試驗(yàn)數(shù)據(jù)記錄整理，統(tǒng)計(jì)分析處理，形成報(bào)告。

4 試驗(yàn)結(jié)果與分析

4.1 試驗(yàn)結(jié)果 14日齡10頭仔豬，登記耳標(biāo)號(hào)，從14日齡開(kāi)始采血檢測(cè)仔豬藍(lán)耳病的母源抗體，免疫2周后每周采血1次，即第28、35、42、49、56日齡時(shí)采血檢測(cè)藍(lán)耳抗體OD630nm值，結(jié)果見(jiàn)表l。

表1 14日齡首免藍(lán)耳抗體檢測(cè)結(jié)果

21日齡10頭仔豬，登記耳標(biāo)號(hào)，免疫前采血檢測(cè)仔豬藍(lán)耳病的母源抗體，免疫2周后每周采血1次，即第35、42、49、56、63日齡時(shí)采血檢測(cè)藍(lán)耳病抗體OD630nm值，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 21齡首免藍(lán)耳抗體檢測(cè)結(jié)果

28日齡10頭仔豬，登記耳標(biāo)號(hào)，免疫前采血檢測(cè)仔豬母源抗體，免疫2周后每周采血1次，即第42、49、56、64日齡時(shí)采血檢測(cè)藍(lán)耳病抗體OD630nm值，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 28日齡首免藍(lán)耳抗體檢測(cè)結(jié)果

4.2 檢測(cè)分析 根據(jù)仔豬母源抗體水平的消長(zhǎng)規(guī)律制定高致病性豬繁殖與呼吸綜合癥活疫苗首免日齡。檢測(cè)時(shí)二孔陽(yáng)性對(duì)照OD630nm值為1.907、1.779；二孔陰性對(duì)照OD630nm為0.072、0.202。該試驗(yàn)陽(yáng)性對(duì)照空平均OD630nm值≥0.7，陰性對(duì)照孔平均OD630nm值<0.3所以試驗(yàn)成立。

試驗(yàn)仔豬血樣OD630nm值>0.42，判為陽(yáng)性；樣品OD630nm值介于0.38之0.42之間，判為可疑；樣品OD630nm值<0.38，判為陰性。由表l、2、3結(jié)果可知，14~28日齡仔豬OD630nm值<0.38，判為陰性，藍(lán)耳病母原抗體水平較低。為了達(dá)到免疫合格和群體抗體水平合格率80%以上的要求，仔豬首免日齡最好選在母源抗體不會(huì)影響疫苗效果，又能防御病毒侵襲的期間，即仔豬母源抗體水平較低時(shí)，由上表可知，該仔豬群母源抗體在14、21、28日齡乳豬OD630nm值<0.38(10/10)、(10/10)、(9/10)，故確定該場(chǎng)仔豬群首免日齡應(yīng)在14~21日齡時(shí)。

由上表可知，3個(gè)試驗(yàn)組仔豬接種1頭份藍(lán)耳苗后2周時(shí)檢測(cè)結(jié)果分析，3個(gè)試驗(yàn)組檢測(cè)OD630nm值>0.42的為陽(yáng)性即達(dá)到保護(hù)率，保護(hù)率分別為0%(0/10)、0%(0/10)、60%(6/10)；免疫3周檢測(cè)3組的OD630nm值，保護(hù)率分別為40%(4/10)、0%(0/10)、90%(9/10)；免疫4周檢測(cè)抗體3組的OD630nm值，保護(hù)率分別為100%(10/10)、30%(3/10)、90%(9/10)；免疫5周檢測(cè)3組的抗體OD630nm值，保護(hù)率為100%(10/10)、70%(7/10)、100%(10/10)；免疫6周檢測(cè)抗體OD630nm值，保護(hù)率分別為100%(10/10)、100%(10/10)、100%(10/10)。

5 小結(jié)

第1組在免疫接種后OD630nm值逐漸提高，4周后保護(hù)率為100%(10/10)；第2組免疫后發(fā)生流行性腹瀉，故而前期對(duì)OD630nm值增高產(chǎn)生影響，腹瀉全愈以后OD630nm逐步提高，5周達(dá)到70%(7/10)；第3組在免疫接種5周后抗體的保護(hù)率達(dá)到100%(10/10)?？梢?jiàn)豬只健康的情況下，注射藍(lán)耳病疫苗5周后都可以產(chǎn)生較強(qiáng)的抗體保護(hù)率。

積極開(kāi)展免疫檢測(cè)，建立本場(chǎng)豬群抗體的基準(zhǔn)線。本縣高致病性豬藍(lán)耳病免疫沒(méi)有統(tǒng)一可靠的的免疫程序，根據(jù)該場(chǎng)仔豬高致病性豬藍(lán)耳病免疫測(cè)定的小樣本試驗(yàn)，建議本地區(qū)生豬高致病性豬藍(lán)耳病的首免為14~21日齡，肌注1頭份/頭。但各規(guī)模豬場(chǎng)要結(jié)合本場(chǎng)具體實(shí)際，及根據(jù)母源抗體水平確定本場(chǎng)高致病性豬藍(lán)耳病首免日齡，積極開(kāi)展免疫監(jiān)測(cè)，建立其豬群的抗體基準(zhǔn)線，確保高致病性豬藍(lán)耳病抗體保護(hù)率到達(dá)較高的水平，為養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展提供科學(xué)的依據(jù)。

（2011–07–07）

S858.28

A

1007-1733(2011)10-0006-02