趙麗，李宗陽，張澤生，潘瑞樂，*

（1.天津科技大學(xué)，天津 300457；2.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)藥用植物研究所，北京 100193）

楊梅苷的穩(wěn)定性研究

趙麗1，2，李宗陽2，張澤生1，潘瑞樂2，*

（1.天津科技大學(xué)，天津 300457；2.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)藥用植物研究所，北京 100193）

采用HPLC和紫外分光光度法研究楊梅苷溶液在pH、溫度、金屬離子等不同條件下的穩(wěn)定性。HPLC法采用Venusil MP-C18色譜分析柱（4.6 mm×250 mm，5μm），流動(dòng)相為乙腈∶水（18∶82，體積比），流速1.0 mL/min，柱溫25℃，檢測波長352 nm；紫外分光光度法采用352 nm作為檢測波長。結(jié)果表明楊梅苷在中性或弱酸性條件下穩(wěn)定，溫度升高及金屬離子存在時(shí)不穩(wěn)定。楊梅苷溶液應(yīng)在中性或弱酸性條件下低溫或常溫保存，并避免接觸金屬離子。本研究為楊梅苷的貯藏和開發(fā)利用提供了理論參考。

HPLC；紫外分光光度法；楊梅苷；pH；溫度；金屬離子；穩(wěn)定性

楊梅苷（3＇，4＇，5＇，5，7－五羥基黃酮－3－O－α－L－鼠李糖苷）為天然多羥基黃酮類化合物，廣泛存在于楊梅科植物楊梅Myrica rubra Sieb.et Zucc.的樹皮及葉子，豆科植物鬼箭錦雞兒Caragana jubata Poir.的枝葉，蓼科植物扁蓄Polygonum aviculare L的地上部分中[1-2]。楊梅苷具有很強(qiáng)的抗氧化能力，可作為抗氧化劑添加到食品、醫(yī)藥及化妝品等產(chǎn)品中，并于2007年2月取得美國香味料和萃取物質(zhì)制造者協(xié)會(huì)（Flavour Extract Manufacturers′Association，F(xiàn)EMA） 的GRAS（Generally Regarded As Safe）批準(zhǔn)號[3]。此外，楊梅苷還具有收縮血管、降血糖、保肝、利膽、抗炎、抗突變、抗腫瘤等多種作用[4]。楊梅苷在自然界非常豐富，在楊梅樹皮中含量高達(dá)10%[5]，且提取純化工藝簡單，具有良好的開發(fā)應(yīng)用前景。由于楊梅苷具有多個(gè)羥基，極易被氧化，生成低活性甚至沒有活性的氧化產(chǎn)物。為了進(jìn)一步了解楊梅苷的理化性質(zhì)，對楊梅苷在pH、溫度、金屬離子等不同條件下的穩(wěn)定性進(jìn)行了研究，為楊梅苷貯藏和開發(fā)利用提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Waters系列高效液相色譜儀，包括：Waters 600 controller，Waters 600 pump，Waters 2487 dual absorbance detector，Waters Empower工作站、萬分之一電子天平（FA-1104）及千分之一電子天平（JA-2103N）：上海天平儀器廠生產(chǎn)；UV2550紫外可見分光光度計(jì)：日本島津公司；KQ5200B型超聲波清洗器：昆山市超聲儀器有限公司；PHS-3B型pH計(jì)：上海嘉鵬科技有限公司。

楊梅苷對照品是中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所，潘瑞樂課題組從楊梅樹皮中分得，經(jīng)UV，IR，MS，1H-NMR，13C-NMR光譜分析鑒定結(jié)構(gòu)，HPLC純度檢測在95%以上（面積歸一化法）。HPLC用溶劑乙腈、甲醇為色譜純：Fisher公司；純凈水：市售；其它化學(xué)試劑均為分析純：北京化工廠。

1.2 色譜條件

色譜柱為VenusiMP-C18柱（4.6mm×250mm，5μm）；流動(dòng)相為乙腈∶水（18∶82）；流速：1.0 mL/min；柱溫：25℃；檢測波長：352 nm；進(jìn)樣量：20 μL。在此色譜條件下，楊梅苷出峰時(shí)間為20.6 min，結(jié)果見圖1。

1.3 線性關(guān)系考察

精密稱取楊梅苷對照品51.3 mg置于50 mL容量瓶中，加入甲醇定容至刻度，配成1.026 mg/mL的對照品貯備溶液。精密量取對照品貯備溶液1.2、1.6、2.0、2.4、2.8、3.2、3.6 mL置于25 mL量瓶中，加流動(dòng)相定容至刻度，配制成49.25、65.66、82.08、98.50、114.91、131.33、147.74μg/mL系列溶液，在1.2色譜條件下，依次進(jìn)樣20 μL，以楊梅苷峰面積Y對楊梅苷質(zhì)量X（μg）進(jìn)行線性回歸處理并計(jì)算回歸方程，Y=1×106X－177040，r=0.9997，線性范圍為0.985μg～2.955μg。

1.4 精密度試驗(yàn)

精密吸取同一對照品溶液20 μL，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄楊梅苷的峰面積，其峰面積的RSD分別為1.8%，表明儀器精密度良好。

1.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取同一對照品溶液20 μL分別于0、2、4、6、8、10 h進(jìn)樣測定，記錄楊梅苷的峰面積，其峰面積的RSD分別為1.7%，表明楊梅苷溶液在室溫條件下10 h內(nèi)穩(wěn)定不變。

2 結(jié)果與分析

2.1 pH對楊梅苷溶液穩(wěn)定性的影響

用0.1 mol/L NaOH 及HCl溶液配制成pH為1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、11.0、12.0、13.0 的 溶液（pH采用pH計(jì)測定），精密量取14份2.5mL的1.01mg/mL的楊梅苷溶液分別置于25 mL量瓶中，其中1份用蒸餾水定容至刻度，其余13份用上述不同pH溶液定容至刻度，搖勻配制成0.101 mg/mL的不同pH的系列溶液。在4℃的冰箱中放置24 h后，恢復(fù)至室溫，HPLC測定不同pH條件下楊梅苷的保存量，結(jié)果表明在pH為6～7之間時(shí)，即弱酸條件下楊梅苷溶液比較穩(wěn)定，其保存量與蒸餾水定容樣品相同；在pH為1～5或8～10時(shí)，即強(qiáng)酸或堿性條件下，楊梅苷保存量顯著下降；在pH達(dá)11時(shí)，楊梅苷結(jié)構(gòu)完全被破壞，保存量降至0，結(jié)果詳見表1及圖2。

表 1 不同pH下楊梅苷的保存量Table 1 The contents of Myricitrin in different pH values

2.2 溫度對楊梅苷溶液穩(wěn)定性的影響

精密稱取楊梅苷對照品156.5 mg置于100 mL容量瓶中甲醇定容，精密量取10 mL置于7個(gè)100 mL的容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度，配制成0.1565 mg/mL的溶液，分別置于4、25、37、45、68、85、100 ℃中保溫處理4 h，HPLC法測定楊梅苷保存量，結(jié)果表明常溫或4℃冰箱中冷藏，楊梅苷溶液比較穩(wěn)定，隨著溫度的增高，楊梅苷保存量逐漸降低，在100℃已降至原來的50%，詳見表2及圖3。

2.3 金屬離子對楊梅苷溶液穩(wěn)定性的影響

精密稱取NaCl、KCl、無水MgSO4、無水ZnCl2、無水CuSO4、Pb（CH3COO）2·3H2O、FeCl3·6H2O、AgNO3、無 水CaCl2、Al（NO3）3·9H2O，分別用蒸餾水配制成含金屬離子濃度為0.1 mol/L的溶液。精密稱取楊梅苷對照品304.0 mg，甲醇定容到100 mL得楊梅苷母液。精密量取楊梅苷母液5 mL共11份置于100 mL容量瓶中，其中一份用蒸餾水定容至刻度，其余10份用上述不同金屬溶液定容至刻度，即得11份濃度為0.152 mg/mL的不同金屬離子條件下的楊梅苷溶液，于4℃的冰箱中靜置48 h后，取出，恢復(fù)至室溫。結(jié)果發(fā)現(xiàn)楊梅苷在NaCl、KCl、MgSO4溶液中相對穩(wěn)定，溶液澄清透明；楊梅苷與鋁鹽、鐵鹽、鈣鹽等試劑反應(yīng)，生成可溶的黃色絡(luò)合物，與AgNO3溶液產(chǎn)生黑色沉淀，與CuSO4、ZnCl2、Pb（CH3COO）2·3H2O溶液產(chǎn)生黃色沉淀，與鐵鹽生成棕褐色溶液。

表 2 不同溫度下楊梅苷的保存量Table 2 The contents of Myricitrin in different temperature

將樣品分別稀釋5倍（FeCl3·6H2O定容的樣品稀釋125倍），以蒸餾水為空白，352 nm為檢測波長，于紫外分光光度計(jì)下測定各樣品的吸收度。根據(jù)紫外光譜定量分析原理，即樣品在某波長處的吸收強(qiáng)度與所測樣品的濃度成正比。以蒸餾水定容的樣品作為對照，計(jì)算以金屬離子定容樣品的楊梅苷含量。結(jié)果顯示楊梅苷在本文考察的10種金屬離子溶液中均有不同程度的降低，在NaCl、KCl、MgSO4溶液變化較小，在CuSO4、ZnCl2、Pb（CH3COO）2·3H2O溶液中降低比較明顯，但在FeCl3·6H2O溶液中紫外光譜吸收值顯著增高，可能楊梅苷與FeCl3反應(yīng)生成的棕褐色絡(luò)合物在352 nm處有強(qiáng)吸收，詳見表3及圖4。

2.4 分析

楊梅苷結(jié)構(gòu)中含有5個(gè)酚羥基，呈弱酸性，在中性或弱酸性環(huán)境中比較穩(wěn)定，在強(qiáng)堿性環(huán)境中結(jié)構(gòu)完全破壞；溫度對楊梅苷溶液的影響較大，隨著溫度的升高，其穩(wěn)定性降低，在100℃時(shí)含量降低了50%。因此，楊梅苷溶液應(yīng)在低溫或常溫下保存。由于在楊梅苷在B環(huán)上3'，4'，5'相鄰位置均有OH基，3'，4'位和4'，5'位OH基上具有很強(qiáng)金屬螯合能力；在C環(huán)4位上羰基也可與3、5位上OH基共同對金屬離子發(fā)生螯合作用，生成有色絡(luò)合物，影響楊梅苷溶液的穩(wěn)定性。本文考察了10種金屬離子對楊梅苷溶液的影響，結(jié)果表明Na+、K+、Mg2+對楊梅苷影響較小，Al3+、Ag+、Zn2+、Ca2+、Cu2+、Pb2+、Fe3+等影響較大。

表 3 不同金屬離子溶液中楊梅苷的濃度Table 3 The concentration of Myricitrin in different metal ions

3 結(jié)論

通過本實(shí)驗(yàn)研究，楊梅苷溶液應(yīng)保存于中性或弱酸性、低溫或常溫條件下，并避免重金屬離子的影響。

[1]陳曉虎,陳道峰.萹蓄的化學(xué)成分研究[J].中國中藥雜志,2004,29(9):918-919

[2]廖華衛(wèi),劉恩桂,王定勇.楊梅樹皮的化學(xué)成分研究[J].中南藥學(xué)，2006,4(3):196-199

[3]凌關(guān)庭.楊梅提取物及其抗氧化作用[J].糧食與油脂,2009(4):38-41

[4]王曉云,姜子濤.天然抗氧劑二氫楊梅素研究進(jìn)展[J].食品研究與開發(fā)，2007,28(2):185-188

[5]張立.楊梅苷對四氧嘧啶模型小鼠降血糖作用的初步研究[J].中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用,2009,3(15):29-30

Studies on Stability of Myricitrin

ZHAO Li1，2，LI Zong－yang2，ZHANG Ze－sheng1，PAN Rui－le2，*
（1.Tianjin University of Science and Technology，Tianjin 300457，China；2.Institute of Medicinal Plant，Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College，Beijing 100193，China）

The stability of Myricitrin solution was studied under different pH values，temperature and metal ions by HPLC and UV spectrophotometry.The contents of Myricitrin was achieved on Venusil MP－C18column（4.6 mm×250 mm，5μm）with acetonitrile－water（18∶82）as mobile phase at the flow rate of 1.0 mL/min，column temperture at 25℃ and the UV detection wavelength was 352 nm.UV spectrophotometry was determined at 352 nm.The results indicated Myricitrin was stable in weak acidic or neutral solution but was unstable under high temperature and metal ions.The solution of Myricitrin should be kept under neutral and weak acidity，at cold or room temperature，and preventing from metal ions.This research provides scientific basis for preservation and development of Myricitrin.

HPLC；UV spectrophotometry；Myricitrin；pH values；temperature；metal ions；stability

中藥標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研制和開發(fā)的技術(shù)平臺(tái)建設(shè)（2009ZX 09308－001－1－5）

趙麗（1985—），女（漢），碩士研究生，研究方向：營養(yǎng)與食品衛(wèi)生學(xué)。

*通信作者：潘瑞樂，研究員。

2011-03-22