摘 要：目的：建立HPLC法測(cè)定止咳丸中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量測(cè)定方法。方法：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.1%磷酸（5：95）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長為205 nm。理論板數(shù)按鹽酸麻黃堿峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。結(jié)果：鹽酸麻黃堿在0.018 4～2.760 0 μg（r=0.999 93）；鹽酸偽麻黃堿在0.026 4～3.168 μg（r=0.999 98）之間范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。樣品中鹽酸麻黃堿平均回收率為97.88%，RSD= 2.08%；鹽酸偽麻黃堿平均回收率為97.86%，RSD= 2.01%。結(jié)論：該法操作簡便，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可用于控制止咳丸的質(zhì)量。
　　關(guān)鍵詞：止咳丸；鹽酸麻黃堿；鹽酸偽麻黃堿；HPLC
　　中圖分類號(hào)：R282.5 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A
　　文章編號(hào)：1007-2349（2011）06-0078-02
　　
　　止咳丸是云南省的傳統(tǒng)中成藥品種，由云南名中醫(yī)翟玉六先生創(chuàng)制于清光緒33年（1908年），翟玉六大藥房獨(dú)家經(jīng)銷，由于療效卓著，舊時(shí)已創(chuàng)下名牌，成為云南家喻戶曉的常備治咳良藥。收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》（中藥成方制劑第十一冊(cè)）［2］，標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)為WS3-B-2096-96。因麻黃為本品處方中的君藥，且根據(jù)止咳丸標(biāo)準(zhǔn)提高課題任務(wù)書及國家藥典會(huì)的“立項(xiàng)綜合意見單”的專家意見，選取麻黃中的主要成分鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿作為含量測(cè)定指標(biāo)。
　　
　　1 儀器與試藥
　　
　　島津 1100系列高效液相色譜儀（包括真空脫氣泵，四元泵，自動(dòng)進(jìn)樣器，DAD檢測(cè)器）；止咳丸（由昆明中藥廠有限公司提供，批號(hào)：100319、100439、100501）；鹽酸麻黃堿對(duì)照品（171241-200404）、鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品（171237-200505），均由中國藥品生物制品檢定所提供，供含量測(cè)定用。乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。
　　
　　2 實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果
　　
　　2.1 對(duì)照品溶液的制備 取鹽酸麻黃堿對(duì)照品、鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品適量，精密稱定，分別加0.1 moL/L鹽酸溶液制成每1 mL各含10 μg的溶液，作為對(duì)照品溶液。
　　2.2 供試品溶液的制備 取止咳丸適量，除去糖衣，研細(xì)，取細(xì)粉約4 g，精密稱定，置500 mL的錐形瓶中，加氯化鈉7.5 g，再加入消泡劑1 g，加5 moL/L氫氧化鈉溶液70 mL，搖散，超聲處理30 min，再搖散，加水60 mL，蒸餾，用預(yù)先盛有0.5 moL/L鹽酸溶液5 mL的100 mL量瓶收集蒸餾液近90 mL，加水至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。
　　2.3 檢測(cè)波長的確定 取鹽酸麻黃堿對(duì)照品溶液（23 μg/mL）及鹽酸偽麻黃堿溶液（1.32 μg/mL），分別在紫外可見分光光度儀上進(jìn)行鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的紫外光譜掃描，得到鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的紫外吸收光譜，可見鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿在205 nm處有最大吸收，故選擇205 nm作為鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的檢測(cè)波長。鹽酸麻黃堿紫外吸收光譜和鹽酸偽麻黃堿紫外吸收光譜見圖1、2。
　　2.4 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.1%磷酸（5：95）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長為205 nm。理論板數(shù)按鹽酸麻黃堿峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。取對(duì)照品溶液和供試品溶液各20 μL注入液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定［1］。色譜圖見圖3和圖4。
　　結(jié)果表明：供試品鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿與前后鋒的分離度、拖尾因子均能滿足《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥD高效液相色譜法項(xiàng)下規(guī)定，理論板數(shù)按鹽酸麻黃堿峰計(jì)算均大于3000。
　　2.5 陰性對(duì)照實(shí)驗(yàn) 取處方中除麻黃外的其他藥味，按處方劑量及制法和工藝要求制備缺麻黃陰性對(duì)照樣品制成陰性對(duì)照溶液，用與樣品相同的色譜條件測(cè)定。色譜圖見圖5。結(jié)果表明空白樣品的色譜圖中在與對(duì)照品相同保留時(shí)間（±5%）位置上沒有吸收峰，說明該制劑中除麻黃外的其他藥味和輔料對(duì)鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量測(cè)定沒有干擾。
　　2.6 線性與范圍 精密取鹽酸麻黃堿對(duì)照品溶液分別稀釋成0.92、4.14、6.9、12.5、23.0、46.0、69.0、92.0、138 μg/mL的對(duì)照品溶液，精密吸取上述溶液各20 μL，分別進(jìn)樣，以對(duì)照品量（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：Y=2 362.269 10X-13.540 62（r=0.999 93），結(jié)果表明，鹽酸麻黃堿在0.018 4～2.760 0 μg之間呈良好線性關(guān)系。
　　精密取鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品溶液分別稀釋成1.32、7.92、13.2、26.4、52.8、79.2、105.6、158.4 μg/mL的對(duì)照品溶液，精密吸取上述溶液各20 μL，分別進(jìn)樣，以對(duì)照品量（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：Y=2 323.111 10X-7.449 98（r=0.999 98），結(jié)果表明，鹽酸偽麻黃堿在0.026 4～3.168 μg之間呈良好線性關(guān)系。
　　2.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取同一供試品溶液，分別于0、4、8、12、20 h各進(jìn)樣20 μL，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得其鹽酸麻黃堿峰面積值分別為：386.820 89，389.396 12，388.024 84，386.923 80，384.610 84，RSD=0.455%；測(cè)得其鹽酸偽麻黃堿峰面積值分別為：151.975 13，157.575 74，156.058 81，154.100 69，156.055 10，RSD=1.39%。結(jié)果表明，在20 h內(nèi)供試品溶液中的鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿是穩(wěn)定的。
　　2.8 精密度實(shí)驗(yàn) 取供試品溶液、對(duì)照品溶液，于測(cè)定條件下分別進(jìn)樣20 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積。結(jié)果供試品溶液中的鹽酸麻黃堿RSD為1.85%和鹽酸偽麻黃堿RSD為1.76%，對(duì)照品溶液中鹽酸麻黃堿RSD為0.95%和鹽酸偽麻黃堿RSD為1.02%。結(jié)果表明精密度良好。
　　2.9 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn) 取批號(hào)為100319的止咳丸，按正文所列的含量測(cè)定方法，分別制備9份供試品溶液，分別測(cè)定鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量；結(jié)果鹽酸麻黃堿RSD為1.98%和鹽酸偽麻黃堿RSD為1.87%。
　　2.10 回收率實(shí)驗(yàn) 精密稱定已知含量的樣品，共6份，分別精密加入適量鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿，采取全程加樣法；在上述色譜條件下測(cè)定，樣品中鹽酸麻黃堿平均回收率為97.88%，RSD= 2.08%；鹽酸偽麻黃堿平均回收率為97.86%，RSD= 2.01%。
　　2.11 樣品含量測(cè)定 取本品3批6個(gè)樣品，依法配制供試品溶液，精密吸取各20 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿峰面積，含量結(jié)果見表1。
　　
　　3 討論
　　
　　止咳丸收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》（中藥成方制劑第十一冊(cè)），標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)為WS3-B-2096-96。原標(biāo)準(zhǔn)無含量測(cè)定，因麻黃為本品處方中的君藥，且根據(jù)止咳丸標(biāo)準(zhǔn)提高課題任務(wù)書及國家藥典會(huì)的“立項(xiàng)綜合意見單”的專家意見，選取麻黃中的主要成分鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿作為含量測(cè)定指標(biāo)；曾對(duì)乙腈-0.1%磷酸（0.1%三乙胺）（5∶95）；乙腈-0.1%磷酸（5∶95）上述流動(dòng)相，經(jīng)試驗(yàn)比較，采用乙腈-0.1%磷酸（5∶95）作為流動(dòng)相，鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿與其他組分的分離度能達(dá)到要求，空白試驗(yàn)也無干擾，故采用。對(duì)止咳丸中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿含量測(cè)定的分析方法驗(yàn)證結(jié)果表明，該法操作簡便，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可用于控制止咳丸的質(zhì)量。
　　
　　參考文獻(xiàn)：
　?。?］國家藥典委員會(huì).中國藥典［M］.一部.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010.
　?。?］中華藥典委員會(huì).中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn).中藥成方制劑［M］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，1997：29.
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