趙 琦，張軍武

(1．咸陽市衛(wèi)生學(xué)校，陜西咸陽 712000;2．陜西中醫(yī)學(xué)院，陜西咸陽 712046)

黃芪為豆科植物蒙古黃芪Astragalus membranaceus(Fisch．)Bge．var．mongholicus(Bge．)Hsiao或膜莢黃芪Astragalus membranaceus(Fisch．)Bge．的干燥根［1］。黃芪的化學(xué)成分復(fù)雜［2］，包括皂苷類、多糖類、黃酮類以及各種氨基酸、微量元素、生物堿類、有機(jī)酸類等。實(shí)驗(yàn)研究表明［3］，黃芪總黃酮能明顯降低血漿膽固醇濃度和主動(dòng)脈壁中膽固醇的沉積，縮小動(dòng)脈粥樣硬化斑塊面積和降低內(nèi)膜/中膜比率。黃芪臨床應(yīng)用廣泛，有效部位及藥理作用明確，已經(jīng)證實(shí)黃芪總皂苷和總黃酮是黃芪功效的主要物質(zhì)基礎(chǔ)和有效部位，具有強(qiáng)心、改善心臟功能、保護(hù)心肌、減輕心肌缺血等明確的心血管藥理作用，可用于心血管疾病的治療。本文用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)選黃芪總黃酮的提取工藝，以期為其深層次開發(fā)提供依據(jù)。

1 儀器與材料

1．1 儀器

UV1102型紫外/可見分光光度計(jì) (上海天美科學(xué)儀器有限公司);FA1004N電子分析天平 (上海天平廠);ZK-82A型真空干燥箱 (上海實(shí)驗(yàn)儀器廠);GKC-11-CR2型電熱恒溫水浴鍋 (上海金橋科析儀器廠);KQ3200DB型數(shù)控超聲波清洗器 (昆山市超聲儀器有限公司)。

1．2 材料

2年生黃芪采集于陜西省旬邑縣黃芪GAP基地，經(jīng)陜西中醫(yī)學(xué)院生藥教研室鑒定為蒙古黃芪Astragalus membranaceus(Fisch．)Bge．var．mongholicus(Bge．)Hsiao;蘆丁對(duì)照品購自中國藥品生物制品檢定所 (批號(hào):0080-9705);亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉等所用試劑均為分析純;聚酰胺，安徽皖西硅源材料廠。

2 方法與結(jié)果

2．1 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

結(jié)合文獻(xiàn)資料［4］及大生產(chǎn)實(shí)際情況，對(duì)影響提取的主要因素溶媒用量 (A)，乙醇濃度 (B)，提取時(shí)間 (C)，提取次數(shù) (D)采用L9(34)正交試驗(yàn)進(jìn)行考察，以黃芪有效部位總黃酮及總提取物含量為考察指標(biāo)，確定因素水平，方案設(shè)計(jì)見表1。

2．2 總提取物的測定

稱取黃芪粗粉10g，共9份，分別置500mL燒瓶中，加入95%乙醇200mL，搖勻，加熱回流1h，放冷至室溫，濾過，濾液濃縮至適量，將得到的濃縮液定容至250mL容量瓶中，備用。將1～9號(hào)提取物分別濃縮后定容于100mL量瓶中，搖勻、分別精密量取25mL，置于在105～110℃條件下干燥至恒重的蒸發(fā)器中，烘干至恒重，計(jì)算出總提取物(%)，結(jié)果見表2。

表1 因素水平的設(shè)計(jì)

2．3 總黃酮含量測定

2．3．1 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取在105～110℃干燥至恒重的蘆丁對(duì)照品10．5mg，加95%乙醇定容于25mL容量瓶中，得到濃度為0．42mg/mL的溶液作為對(duì)照品溶液。

2．3．2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密吸取對(duì)照品溶液 (濃度為:0．42mg/mL)0．0，0．2，0．4，0．6，0．8，1．0mL; 分 別 置 于10mL容量瓶中，加5%亞硝酸鈉溶液0．3mL，放置6min;再加10%硝酸鋁溶液0．3mL，放置6min;最后加入4%氫氧化鈉溶液4mL;分別加95%乙醇至刻度，搖勻，放置15min，置比色皿中，進(jìn)行400～800nm波長掃描，在510nm波長處均有最大吸收。以吸光度A為縱坐標(biāo)，總黃酮含量 (ug/mL)為橫坐標(biāo)計(jì)算回歸方程為:A=0．008940476C+0．3225，相關(guān)系數(shù) r=0．9983，線性范圍:8．4ug/mL ～42．0ug/mL。

2．3．3 供試品溶液的制備

照“2．2總提取物的測定”項(xiàng)下制備供試品溶液，分別精密吸取樣品溶液1mL，共9份，分別置10mL容量瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線下方法操作，測定吸收度，由回歸方程求出稀釋液中總黃酮濃度，結(jié)果見表2。

從表2試驗(yàn)結(jié)果可以看出，以總提物及總黃酮含量為考察指標(biāo)，綜合分析各因素及水平得到醇提條件應(yīng)為A2B2C1D2，考慮到大生產(chǎn)實(shí)際情況，所以很有必要對(duì)各因素水平的顯著性進(jìn)行方差分析，結(jié)果見表3，表4。

表2 正交試驗(yàn)含量測定結(jié)果

從表3方差分析結(jié)果表明，因素B，C對(duì)總提物均有顯著性影響，因素A和D幾乎無影響。從表4方差分析結(jié)果表明，因素A，B，C對(duì)總黃酮含量均有顯著性影響，因素D幾乎無影響;結(jié)合表2的直觀分析，其優(yōu)選工藝為:A2B2C1D2，考慮到黃芪提取物中總黃酮指標(biāo)的重要性，確定其工藝為:A2B2C1D2，即用10倍量70%乙醇回流提取2次，每次60min。

表3 總提取物含量方差分析

表4 總黃酮含量方差分析

3 結(jié)論

采用正交設(shè)計(jì)法優(yōu)選出提取黃芪總黃酮的最佳工藝，試驗(yàn)證明:黃芪總黃酮醇提取的最佳工藝為用10倍量70%乙醇回流提取2次，每次60min。此工藝較為符合大生產(chǎn)實(shí)際情況，故可以進(jìn)一步推廣、應(yīng)用并改進(jìn)，為黃芪的深層次開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

［1］國家藥典委員會(huì)．中國藥典:一部［M］．北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010．

［2］齊宗韶．黃芪化學(xué)成分的研究概況［J］．中草藥，1987，18(5):41．

［3］汪德清，丁保國，Tomas G Neil，等．黃芪總黃酮對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化早期形成的影響［J］．中國藥理學(xué)通報(bào)，2003，19(6):637-640．

［4］紀(jì)松崗，李翔，婁子洋，等．正交設(shè)計(jì)法確定黃芪中黃酮類成分的超聲提取條件［J］．第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2005，26(10):1168-1169．